蔡良琬
- 作品数：19 被引量：95H指数：6
- 供职机构：中国医学科学院中国协和医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 表皮生长因子在引起神经胶质瘤细胞生长抑制过程中对其受体的影响被引量：8
- 1995年
- 表皮生长因子在引起神经胶质瘤细胞生长抑制过程中对其受体的影响王欣，杨予安，蔡良琬，黄秉仁，陆国钧（中国医学科学院基础医学研究所，北京１００００５）表皮生长因子（ＥＧＦ）是一细胞生长调节因子，它的作用是通过其细胞表面受体（ＥＧＦｒ）介导的。ＥＧＦｒ基因...
- 王欣杨予安蔡良琬黄秉仁陆国钧
- 关键词：神经胶质瘤表皮生长因子受体
- 乙型肝炎病毒X基因的分析与在大肠杆菌中的表达
- 1996年
- 以ＨＢＶ－ＮＣｌＤＮＡ为材料研究了其中的Ｘ基因，首先确定了此Ｘ基因的顺序，即用ＡＢＩ自动萤光测序议测序证明了此Ｘ基因的３８５位核苷酸后缺失１９个核苷酸，从而引起移码突变，使此Ｘ基因共有５１９个核苷酸，编码１７２个氨基酸，比另一种ａｄｒ型Ｘ蛋白多１８个氨基酸。在其第五位氨基酸上有一ＡＴＧ起始密码，也与另一Ｘ基因不同。经重组后获得在大肠杆菌中的热诱导表达，用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法证明确为Ｘ蛋白，并有多态性。
- 曾明黄秉仁蔡良琬潘国宗
- 关键词：乙型肝炎病毒X基因体外表达
- 利用DDRT-PCR技术分析神经生长因子低亲和力受体诱导的细胞凋亡过程中基因表达的差异被引量：3
- 1998年
- 转染了Ｐ７５ＮＧＦＲ的Ｒ２神经细胞系Ｒ２Ｌ１在去血清的培养时可以诱导细胞凋亡的发生．此凋亡可以被ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ和蛋白质合成抑制剂环己酰胺所抑制．利用ＤＤＲＴ－ＰＣＲ技术比较了去血清培养的发生凋亡的Ｒ２Ｌ１细胞与有血清培养的不发生凋亡的Ｒ２Ｌ１细胞以及去血清培养的不发生凋亡的Ｒ２Ｐ细胞基因表达的差异．克隆了数个特异或差异表达的短ｃＤＮＡ片段，经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交证实其中两个片段ＬＩＡＲＥＳＴ－１和ＬＩＡＲＥＳＴ－２表达量在凋亡细胞中显著高于不发生凋亡的细胞中，ＧｅｎＢａｎｋ检索表明此二片段为新的ｃＤＮＡ序列并给予登录号Ｕ４７３１５和Ｕ４７３１６．另有一个ｃＤＮＡ片段ＬＩＡＲＣＤ－３在凋亡细胞中受到了明显的抑制，经检索为一已知的与前强啡肽原上游调控区结合的ＤＮＡ结合蛋白ｃＤＮＡ编码区的一部分。
- 顾继杰黄秉仁蔡良琬
- 关键词：神经生长因子细胞凋亡
- HBV－NC1株X基因在真核细胞中表达，基因调控与致癌作用的初探
- 1996年
- 报道了ＨＢＶ－ＮＣ１株的Ｘ基因进入真核细胞表达载体ｐＸＴ１质粒的ＴＫ启动子之后，转染细胞及表达Ｘ基因成功。即发现包装病毒感染ＮＩＨ／３Ｔ３细胞后有Ｘ基因表达，用斑点杂交又证明此Ｘ基因已整合到细胞的基因组中，当与有ｐＭＳＨ报告基因的质粒共同感染真核细胞后确有激活转录调控现象出现。应用反义的ＸＲＮＡ表达载体感染肝癌细胞发现有接触抑制作用出现。
- 曾明黄秉仁蔡良琬潘国宗
- 关键词：乙型肝炎病毒X基因基因调控
- 人神经生长因子低亲和力受体（p^（75）NGFR）cDNA的克隆及其在神经细胞中表达活性的初步研究被引量：1
- 1996年
- 利用酸性异硫氰酸胍－酚－氯仿一步法从人胎儿基底前脑中提取总ＲＮＡ，用逆转录与聚合酶链反应相结合的ＲＴ－ＰＣＲ法，扩增出人神经生长因子低亲和力受体ｐ^（７５）ＮＧＦＲ基因ｃＤＮＡ，在限制性内切酶ＳｍａⅠ存在下的连接体系中，将扩增出的ｃＤＮＡ片段克隆入ｐＵＣ１２的ＳｍａⅠ位或，经限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＰｓｔⅠ酶切鉴定是否插入以及ＨｉｎｄⅢ酶切鉴定方向。将重组质粒中的ｐ^（７５）ＮＧＦＲ的ｃＤＮＡ再次亚克隆至ｐＵＣ１２载体中后，以其双链ＤＮＡ为模板，用末端终止法测出其全部核苷酸顺序，证实其核苷酸编码的ｐ^（７５）ＮＧＦＲ除两个碱基突变外，其余与文献完全一致。完整的ｐ^（７５）ＮＧＦＲ的ｃＤＮＡ分两步克隆到逆转录病毒表达载体ｐＸＴ－１，经ＰＡ３１７包装细胞株体外包装后、收集病毒上清转染条件不死性大鼠小脑神经细胞系Ｒ２．初步结果表明转染了ｐ^（７５）ＮＧＦＲ的Ｒ２细胞株去除ＮＧＦ培养时出现程序化死亡的典型特征梯型ＤＮＡ带。
- 易明顾继杰黄秉仁蔡良琬
- 关键词：神经生长因子神经细胞
- 胶质细胞衍生的神经营养因子成熟肽基因的克隆、表达及纯化的研究被引量：1
- 1998年
- 通过ＰＣＲ的方法克隆了胶质细胞衍生的神经营养因子（ｇｌｉａｃｅｌ－ｌｉｎｅｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕ－ｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＧＤＮＦ）成熟肽的基因，并将其连接到Ｅ．ｃｏｌｉ高效表达载体ｐＥＴ１６ｂ，在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得高效表达．表达蛋白占菌体总蛋白２１％以上，以包涵体形式存在，经体外复性后用金属螯合亲和层析的方法得到具有较高纯度和活性ｒｈＧＤＮＦ．
- 马雪梅黄秉仁蔡良琬
- 关键词：GDNFE.COLI基因表达纯化
- 人工合成表皮生长因子基因在甲基营养型酵母中的高效表达被引量：15
- 1998年
- 选用酵母菌偏爱密码子人工合成了编码５１个氨基酸的人表皮生长因子（ｈＥＧＦ）基因．将合成基因与编码酵母α因子前导肽８５个氨基酸的ＤＮＡ片段融合后克隆到醇氧化酶基因启动子下游，并构建出多拷贝表达载体．此载体转化甲基营养型酵母株ＧＳ１１５后筛选出整合型ＭｕｔＳＨｉｓ＋基因型菌株．高密度培养及诱导表达后该株可分泌具完好生物活性和正确物理化学性质的人表皮生长因子，产量达１００ｍｇ／Ｌ，经３次柱层析纯度达９５％以上。
- 黄秉仁蔡良琬廖洪涛唐申秀周海涛
- 关键词：人表皮生长因子甲基营养型酵母
- 类胰岛素生长因子-Ⅰ的克隆、表达、分离纯化与活性检测被引量：9
- 1997年
- 把类胰岛素生长因子-Ⅰ（IGF－Ⅰ）cDNA重组于酵母游离体型表达载体YEpHC8，转化酵母后获得了IGF－Ⅰ的表达，并经Bio－Rex70和Bio－GelP10分离纯化后进行了重组蛋白的活性检测。
- 魏辉俊黄秉仁蔡良琬
- 关键词：基因表达IGF-I克隆活性
- 白细胞介素-6基因的克隆、表达及纯化的研究
- 1998年
- 目的进行重组人白细胞介素-6(rhIL-6)的批量生产研究。方法将克隆的人IL-6基因置于pET30a载体的T7启动子下游,在宿主大肠杆菌中进行表达。结果工程菌表达量占菌体总蛋白的50%以上,纯品纯度大于95%,rhIL-6的分子量为21 000,等电点为6.7。用依赖IL-6的小鼠杂交瘤细胞系7TD1以MTT比色法测定表达蛋白生物活性表明,rhIL-6的ED50为0.35 ng/ml。结论上述结果表明rhIL-6已基本达到中试生产的要求。
- 马雪梅陈忠郑华军黄秉仁蔡良琬
- 关键词：白细胞介素-6基因表达纯化
- EGF作用下人脑胶质瘤细胞生长抑制的机理
- 2004年
- 目的 克隆、测序胶质细胞瘤 BT325细胞在生长抑制量表皮生长因子 (epithelial growth factor EGF)作用下差异表达的基因,了解 BT325细胞生长抑制的分子机制。方法 在生长抑制量 EGF 作用下,用差异显示反转录聚合酶链反应 (differential display reversed transcription polym erase chain reaction DDRT-PCR ) 技 术 分析 人 胶 质 细胞瘤 BT325细胞表达 水 平 明显 差 异 的 cDNA , 对差 异 显 示 基因 进 行 序 列 测定 和 同 源 比较 , 并 用 Dot blot及 Northernblot等方法进行验证。结果 在 EGF 作用下,生长抑制的胶质瘤细胞中出现一些上调和下调表达的 cDNA 片段。克隆、分离了 6个表达明显上调的 ESTs,1个序列为新的基因片段,另 5个与已知基因有不同程度的同源,其中 1个与转醛缩酶基因的编码区同源。新近的研究已发现,转醛缩酶与细胞凋亡有关。结论 高剂量 EGF 可诱导 BT325中许多基因表达水平的改变,EGF 抑制 BT325细胞生长可能与促进转醛缩酶基因的表达而诱导细胞凋亡有关。
- 王欣周明锐黄秉仁蔡良琬
- 关键词：表皮生长因子基因表达
