刘秀财
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 丙型肝炎病毒非结构蛋白2反式激活蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
- 2009年
- 目的对HCV非结构蛋白2反式激活蛋白（NS2TP）进行原核表达，制备多克隆抗体，并探讨其在不同肝组织中的表达情况。方法PCR法获得HCVNS2TP基因，将其克隆至原核表达载体pET-32a（＋）上，并转化入E．coliBL21。在大肠埃希菌中诱导表达，表达产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析，经免疫印迹分析验证后，大量表达并纯化该重组蛋白。将重组蛋白免疫家兔后获取多克隆抗体，应用免疫组织化学技术检测健康人及慢性HCV患者的肝组织。结果成功获得了重组目的蛋白（相对分子质量为33×10^2）及高滴度、高特异度的多克隆抗体。慢性HCV患者肝组织内NS2TP的表达高于健康肝组织，且以细胞核内分布为主。结论明确了慢性HCV患者肝组织内NS2TP表达量及细胞内定位的变化，为进一步研究NS2TP的生物学功能和HCV的致病机制奠定了基础。
- 洪源兰孟东王琦张黎颖刘秀财李晓光郝晓花成军
- 关键词：反式激活因子类免疫组织化学肝炎病毒
- XTP3基因融合蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备被引量：2
- 2008年
- 目的构建稳定表达乙肝病毒XTP3蛋白的原核表达载体并在大肠埃希菌中诱导融合蛋白的表达,制备兔抗XTP3蛋白多克隆抗体并检测该抗体在乙肝肝癌、正常肝组织中的作用效果。方法PCR获得XTP3基因片段,插入至pET-32a(+)中构建原核表达载体pET-32a(+)-XTP3,测序正确后转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达。SDS-PAGE、Western blotting分析鉴定融合蛋白的表达。利用Ni+亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性。免疫新西兰兔,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blotting及免疫组化验证。结果成功构建pET-32a(+)-XTP3表达载体并在大肠埃希菌中诱导出高水平表达的XTP3融合蛋白,目的蛋白分子量为52kD,SDS-PAGE分析表明为包涵体表达。经亲和树脂纯化后免疫新西兰兔,成功获得融合蛋白及兔抗XTP3多克隆抗体。ELISA检测证明多克隆抗体效价>1:128000。免疫组化证实本实验中XTP3多克隆抗体在肝癌组织中的表达呈明显的细胞膜阳性,特异性良好。结论成功表达、纯化了XTP3基因融合蛋白,获得高特异性、高效价兔抗XTP3多克隆抗体,为进一步研究XTP3蛋白的生物学特性奠定了基础。
- 徐浩赵龙凤成军刘秀财王琦李国力洪源兰孟东孙成福
- 关键词：原核表达
