张荷
- 作品数：5 被引量：15H指数：2
- 供职机构：贵州大学动物科学学院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸭肠炎病毒感染鸭肝酵母双杂交cDNA文库的构建被引量：2
- 2011年
- 为构建应用于酵母双杂交系统的鸭肠炎病毒(DEV)感染鸭肝cDNA文库,利用Trizol法提取接种DEV GZ株病毒液5 d的鸭肝总RNA,利用cDNA合成试剂盒反转录合成双链cDNA,与pGADT7酵母表达载体连接,转化酵母受体菌Y187,以未经稀释、1∶10和1∶100比例稀释的菌液无菌接种于SD/-Leu缺陷型固体培养基,置于30℃培养3 d,随机挑取生长良好的酵母菌落进行菌落PCR,检测插入片段的大小。结果显示,获得的原始文库克隆总数为1.0×106CFU,随机选取23个克隆进行PCR检测,插入片段长度集中在0.5～1 kb之间。结果表明,构建的cDNA文库有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段。
- 张荷毛君婷杨颖王开功周碧君文明
- 关键词：酵母双杂交鸭肠炎病毒CDNA文库
- 金丝猴淋巴肉瘤的病理形态观察被引量：2
- 2010年
- 贵州省某野生动物园突发1例金丝猴死亡病例,为确诊病因,通过细菌学检测和病理组织学观察对病死金丝猴进行了综合诊断。结果表明,细菌学分离为阴性;病理组织学观察,可见部分组织器官的正常结构破坏、消失,被大量分化不成熟的淋巴瘤细胞所替代,确诊该金丝猴患有淋巴肉瘤。
- 张荷王开功周碧君程振涛李诗举尹传宝
- 关键词：金丝猴淋巴肉瘤病理组织学
- 鸭肠炎病毒核衣壳蛋白密码子偏爱性分析被引量：3
- 2011年
- 为给鸭肠炎病毒(DEV)核衣壳蛋白(NP)基因选择良好的宿主表达系统提供参考依据,本研究运用EM-BOSS软件包CHIPS和CUSP程序对DEVNP基因进行了密码子偏爱性分析。结果显示,DEV NP基因的ENC值为51.180,编码NP蛋白的A、I等氨基酸不同密码子的使用频率存在一定的差异;从与DEV NP基因密码子使用频率比值上看,大肠杆菌22个、酵母18个、鸭12个和人20个密码子存在较大的偏爱性。由此可见,编码DEVNP蛋白密码子出现频率较均一,且酵母等真核生物与其密码子偏爱性较为接近,可作为该基因体外表达宿主的首选。
- 高颖代淑燕张荷程振涛周碧君文明
- 关键词：鸭肠炎病毒核衣壳蛋白密码子偏爱性
- DEV-NP基因酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活检测
- 2011年
- 为构建鸭肠炎病毒(DEV)核衣壳蛋白(NP)基因酵母双杂交诱饵载体,采用PCR技术扩增出DEV-NP基因,克隆至酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7中,以PCR检测、限制性酶切和序列测定等方法进行鉴定;然后采用PEG/LiAc法将阳性质粒pGBKT7-NP转化酵母Y2HGold,在不同营养缺失型培养基进行自激活检测,结果显示,经PCR检测和EcoR I/BamHⅠ双酶切,可见到与预期相一致的目的片段;测序表明该片段含DEV NP基因全部序列;转化Y2HGold酵母菌后,在SD/-Trp/X-α-Gal固体培养基上长出蓝色菌落,而在SD/-Trp/X-α-Gal/AbA固体培养基上未见有菌落生长。无自激活作用的诱饵载体pGBKT7-NP的成功构建,为DEV NP宿主结合蛋白的筛选奠定了基础。
- 张荷代淑燕毛君婷王开功周碧君文明
- 关键词：诱饵载体酵母双杂交自激活作用
- 鸭肠炎病毒核衣壳蛋白受体的筛选与鉴定被引量：11
- 2012年
- 为进一步阐明鸭肠炎病毒(DEV)致病机理,本研究通过构建DEV感染鸭肝组织cDNA文库及其文库质粒和DEV核衣壳蛋白(NP)基因"诱饵"质粒,利用酵母双杂交系统筛选DEV NP互作蛋白(受体)基因,并采用GSTpull-down试验进行验证,结果显示:所构建鸭肝组织cDNA文库的库容量为1×106 CFU,插入片段大小集中在0.5～1kb;"诱饵"质粒pGBKT7-NP无自激活现象;筛选并初步证实DEV NP在鸭肝组织细胞的受体蛋白为蛋白激酶C抑制蛋白(PKCI)。这些结果为进一步研究DEV致病机理提供新的线索。
- 张荷毛君婷杨颖王开功周碧君文明
- 关键词：鸭肠炎病毒核衣壳蛋白酵母双杂交系统
