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刘大玲

作品数:1 被引量:9H指数:1
供职机构:暨南大学微生物技术研究所更多>>
发文基金:国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
相关领域:生物学更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇生物学

主题

  • 1篇英文
  • 1篇酶学性质
  • 1篇酶学性质分析
  • 1篇酵母
  • 1篇克隆
  • 1篇基因
  • 1篇基因克隆
  • 1篇毕赤酵母
  • 1篇CDNA末端
  • 1篇CDNA末端...
  • 1篇纯化

机构

  • 1篇暨南大学
  • 1篇国家工程研究...
  • 1篇广东省生物工...

作者

  • 1篇温思霞
  • 1篇管敏
  • 1篇谢春芳
  • 1篇周涛
  • 1篇姚冬生
  • 1篇曹红
  • 1篇刘大玲

传媒

  • 1篇微生物学报

年份

  • 1篇2011
1 条 记 录,以下是 1-1
排序方式:
假蜜环菌黄曲霉毒素氧化酶的基因克隆、表达、纯化及酶学性质分析(英文)被引量:9
2011年
【目的】黄曲霉毒素氧化酶(aflatoxin-oxidase,AFO)来源于假蜜环菌(Armillariella tabescens)的细胞内提取物,具有转化黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)的特性。为更进一步了解该酶的性质,我们克隆了AFO的基因,并进行了重组AFO蛋白的表达、纯化和酶学性质分析。【方法】本研究利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得的AFO短肽序列设计简并引物进行逆转录,再通过cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术获得了AFO基因的全长cDNA序列。构建重组表达载体pPIC9-afo,在毕赤酵母中进行重组AFO(rAFO)的融合分泌表达,用Ni离子螯合层析进行rAFO的纯化,获得有活性的rAFO后,对其进行肽质量指纹(peptide mass fingerprinting,PMF)鉴定和酶学性质分析。【结果】黄曲霉毒素氧化酶(AFO)基因的开放阅读框为2088 bp,编码695个氨基酸;肽质量指纹鉴定结果显示重组AFO的肽片段序列覆盖率为63.2%。活性测定表明纯化后的重组AFO(rAFO)比活力为234 U/mg;对rAFO进行酶学性质分析表明,对于底物黄曲霉毒素B1,rAFO的Km值为3.93±0.20×10-6 mol/L;反应最适温度为30℃,最适pH为6.0;30℃放置90 min后酶活力下降50%;rAFO在pH5.5-7.0之间酶活力较稳定,相对活力维持在51%-65%之间。【结论】本文第一次成功克隆并重组表达了一种具有黄曲霉毒素B1转化功能的酶——黄曲霉毒素氧化酶(aflatoxin-oxidase,AFO),纯化后的重组AFO(rAFO)具有较好的黄曲霉毒素B1转化活性,为进一步研究和应用奠定了基础。
温思霞管敏周涛曹红谢春芳刘大玲姚冬生
关键词:CDNA末端快速扩增毕赤酵母
共1页<1>
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