郑青云
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 供职机构：常熟理工学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金常熟市科技计划项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程更多>>
- 重组大肠杆菌双相体系合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸被引量：2
- 2016年
- 在水/正己烷双相体系中,利用重组大肠杆菌全细胞催化苯丙酮酸(PPA)提高(R)-2-羟基-3-苯基丙酸(PLA)的产量。研究了双相体系中正己烷的体积分数、转化温度、转速、底物浓度和菌体量对PLA产量的影响。结果表明:最优转化条件为正己烷体积分数为40%;转化温度为40℃;转化转速为300 r/min;底物浓度为15 g/L;湿菌体浓度为15 g/L。在此条件下进行全细胞转化,PLA的产率为(7.25±0.08)g/(L·h)。分批补加底物,生成PLA的单位时间产量为(8.77±0.13)g/(L·h)。
- 徐艳陆炀郑青云孔维伟庞敬权齐斌朱益波
- 关键词：苯丙酮酸
- 重组融合蛋白大肠杆菌不对称合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸被引量：3
- 2017年
- 将来自于Lactobacillus plantarum的突变D-乳酸脱氢酶(D-LDH^(Y52V))和Candida boidinii的甲酸脱氢酶(FDH)进行融合,重组成双功能融合蛋白,为生物法合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸(D-PLA)提供新的方法。利用重叠延伸PCR技术,将对底物苯丙酮酸(PPA)亲合力更高的突变蛋白D-LDH^(Y52V)与FDH通过连接肽(Gly4Ser)3融合,将融合基因克隆至表达载体p ET-28a(+),并转化Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导得到高效表达。SDS-PAGE电泳分析结果表明,融合蛋白分子质量为79.7 k Da,在重组菌中获得了正确表达;酶活性测定结果表明,融合蛋白具有D-LDH和FDH的双重生物学活性。在不对称转化PPA合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸(DPLA)的应用中,融合蛋白体系比D-LDH^(Y52V)单独表达体系的D-PLA产量提高了40.71%。通过5 h底物分批补加发酵,D-PLA产量为17.34 g/L,底物转化率为77.64%,生产强度3.47 g/(L·h)。双功能融合蛋白增强了辅酶再生的效率,有效促进了(R)-2-羟基-3-苯基丙酸的不对称合成。
- 朱益波蒋卓越郭倩郑青云林容天钱志浩齐斌王立梅
- 关键词：甲酸脱氢酶融合蛋白辅酶再生
- 一种双相体系促进微生物合成2-羟基-3-苯基丙酸的方法
- 本发明提供了一种双相体系促进微生物合成2-羟基-3-苯基丙酸的方法，包括如下步骤：配制水/有机溶剂双相体系；活化菌体细胞，收集菌体用缓冲液洗涤后，悬浮在上述的水/有机溶剂双相体系，并加入底物苯丙酮酸钠和葡萄糖，进行全细胞...
- 朱益波郑青云孙亚男徐艳王立梅齐斌
- 文献传递
- 采用大孔吸附树脂纯化发酵液中D-3-苯基乳酸
- 2018年
- 为从发酵液中分离纯化D-3-苯基乳酸(D-3-phenyl lactic acid,PLA),利用重组大肠杆菌E.coli p ET-28aldhY52V转化底物苯丙酮酸(phenylpyruvic acid,PPA)合成PLA,采用离子交换法对PLA纯化工艺进行了初步研究。通过对6种常用阴离子交换树脂对PLA的静态吸附容量测定,确定了D315具有较强的PLA吸附性能。在固定床上样条件优化结果表明,上样流速为4 BV/h、径高比为1∶7时,上样吸附效果较好。利用二阶段洗脱工艺:第一阶段用100 mmol/L HCl进行洗脱,第二阶段用200 mmol/L Na Cl在5 BV/h流速下洗脱。洗脱验证结果表明,第一阶段洗脱液中PLA/PPA的质量浓度比值由初始的4.2上升到10.3,PLA收率为66.4%。研究结果为进一步采用离子交换法纯化发酵液中PLA的工艺优化提供了借鉴。
- 郑青云程俊崔春霞朱益波
- 关键词：LACTIC离子交换
