姜爱民
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中国医科大学药学院更多>>
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- M_2-G_(i1α)融合蛋白在Sf9细胞中的表达及M_2AChR特异性药物的鉴别
- 2010年
- 目的通过杆状病毒-Sf9细胞系统表达M2-Gi1α融合蛋白,并利用M2-Gi1α融合蛋白为工具筛选毒蕈碱性乙酰胆碱受体亚型2(M2AChR)特异性配体,探讨M2-Gi1α融合蛋白中两组分相互作用的机制。方法通过两步PCR反应建立M2AChR与Gi1α融合cDNAs,并在Sf9昆虫细胞中表达M2-Gi1α融合蛋白。通过[3H]羟苯二乙酸奎宁酯([3H]QNB)配体饱和结合实验及[35S]GTPγS竞争性替代结合实验,检测M2-Gi1α融合蛋白表达水平,并筛选M2AChR的特异性配体。结果 M2-Gi1α融合蛋白的表达水平为(8.44±0.39)nmol·g-1膜蛋白。不同配体使M2-Gi1α融合蛋白中Gi1α与GDP的亲和力发生变化,乙酰胆碱、氧化震颤素、槟榔碱、阿托品、fangchinoline、levitimide的IC50值分别为:21.35,23.86,11.91,0.13,1.05,1.75μmol·L-1,无配体存在时为2.50μmol·L-1。结论杆状病毒-Sf9细胞表达系统表达的M2-Gi1α融合蛋白具备M受体与配体结合的特性和组分间的耦联功能,通过检测GDP亲和力的大小有利于筛选和鉴别M2受体亚型特异性药物。
- 张雪薇郭政东白立川姜爱民孙科
- 关键词：融合蛋白G蛋白耦联受体拮抗剂
- m_3AChR-G_(11α)融合蛋白表达及功能检测
- 2010年
- 目的制备m3AChR-G11α融合蛋白,探索m3AChR与G11间的偶联功能、相互作用及其影响因素。方法通过应用两步PCR方法构建m3AChR-G11α融重组的cDNAs,并在Baculovirus-infected Insect cells(Sf9)细胞内表达m3AChR-G11α融合蛋白。BCA法测定Sf9细胞表达的膜蛋白总含量,[3H]QNB和[35S]GTPγS放射性配体结合实验检测融合蛋白的偶联功能。结果 BCA法测定Sf9细胞膜蛋白的总浓度为2.86g·L-1,M3-G11α融合蛋白的表达水平为7.76×10-9mol·g-1protein。不同配体存在时使融合蛋白中的G11α与GDP的亲和力发生变化。ACh,Pilo,CCh,MCN-A-343,Atro,4-Damp,Dafi及无配体存在时,GDP的IC50值分别为:82.21,93.70,12.10,14.30,1.93,1.37,0.72和1.99×10-6mol·L-1。结论 Sf9细胞表达的m3AChR-G11α融合蛋白具有m受体配体结合的特性及两组分间偶联的功能,m3AChR-G11α融合蛋白中的G11亚基对GDP的亲和性取决于m受体配体的性质,分析GDP的亲和性变化有利于筛选和鉴别m3受体亚型特异性配体。
- 白立川郭政东张雪薇孙科姜爱民
- 关键词：M受体G蛋白融合蛋白激动剂拮抗剂
