李冬
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：东北农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 脂肪酸结合蛋白5对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成的影响被引量：2
- 2017年
- 脂肪酸结合蛋白5(fatty acid binding protein 5,FABP5)是一种胞内脂质运载体。本试验应用甘油三酯测定法及BODIPY染色法检测奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cell,BMEC)中甘油三酯及脂滴分泌情况,采用实时荧光定量PCR、Western blotting技术检测BMECs中FABP5对固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)的表达影响。结果显示,试验成功获得高纯度的BMECs,构建了pGCMV-IRES-EGFP-FABP5真核表达载体,且与空白对照组和空载体组相比,FABP5过表达组的甘油三酯和脂滴分泌量极显著增加(P<0.01),同时SREBP-1c及靶基因FAS、ACC的表达量均极显著增加(P<0.01);试验成功筛选了FABP5siRNA1为最佳干扰片段,当FABP5抑制时,抑制组的甘油三酯、脂滴分泌量极显著减少(P<0.01),SREBP-1c、FAS、ACC的表达量均极显著降低(P<0.01)。表明FABP5可通过上调SREBP-1c的表达从而促进BMEC中乳脂的合成。
- 于萌萌李萌李姗姗李冬高学军
- 关键词：奶牛乳腺上皮细胞固醇调节元件结合蛋白-1C乳脂
- 牛mettl3基因的原核表达与蛋白纯化被引量：2
- 2017年
- m^6A甲基转移酶(methyltransferase-like protein 3,METTL3)可调控m RNA的m6A甲基化水平,调节细胞蛋白质合成,实验室前期发现METTL3为乳腺上皮细胞乳合成重要调节分子,发挥泌乳调节作用。目前尚不清楚METTL3分子结构基础及其参与的调节机制。为揭示METTL3结构与功能关系,对METTL3蛋白作原核表达及纯化。研究采用PCR方法扩增牛mettl3基因完整CDS区,将CDS区插入原核表达载体p GEX-4T-1,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导METTL3蛋白大量表达,用8 mol·L-1尿素裂解包涵体,利用GST蛋白纯化试剂盒纯化诱导获得METTL3蛋白。SDS-PAGE证实GST-METTL3融合蛋白存在于包涵体内,试验获得高纯度GST-METTL3融合蛋白,为进一步研究METTL3蛋白在奶牛泌乳中作用提供重要依据。
- 高学军刘丽杰李冬李姗姗陈东莹于萌萌
- 关键词：原核表达纯化
- METTL3调节奶牛乳腺乳蛋白和乳脂肪合成机理
- 乳中最为重要的是乳蛋白和乳脂肪的含量以及组成，这也是衡量乳制品质量的两大重要指标.但是我国牛奶中乳蛋白和乳脂肪的含量较低，如何通过调节关键蛋白来提高乳制品中乳蛋白和乳脂肪的含量成为我们研究的重点.METTL3(methy...
- 刘丽杰李冬敖金霞张明辉高学军
- 关键词：牛乳腺上皮细胞
- 牛NF-κB1基因的原核表达与蛋白纯化被引量：1
- 2016年
- NF-κB1是一类重要核转录因子,参与多种基因表达调控。NF-κB1能与奶牛乳腺中乳合成调控相关基因结合,发挥泌乳调节作用。研究应用PCR方法扩增奶牛NF-κB1基因编码序列,通过Eco RⅠ和XhoⅠ酶切位点将其定向插入p GEX-4T-1载体中,构建原核表达重组质粒p GEX-4T-1-NF-κB1,转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)。经酶切和测序鉴定正确后,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)大量诱导表达,8 mol·L^(-1)尿素裂解包涵体,裂解后上清经GST-Sepharose 4B亲和纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定。结果表明,原核表达载体p GEX-4T-1-NF-κB1构建成功,SDS-PAGE证实NF-κB1融合蛋白存在于包涵体内,纯化后得到GST-NF-κB1融合蛋白,为进一步研究NF-κB1蛋白在奶牛泌乳中作用提供试验依据。
- 高学军李姗姗于萌萌李冬
- 关键词：奶牛克隆原核表达纯化
- METTL3对奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白和乳脂肪合成的调控及其作用机理
- 乳蛋白和乳脂肪是在哺乳动物的乳腺上皮细胞中被合成的，其合成的过程及调控是非常重要的代谢过程。乳蛋白和乳脂的合成机理是很重要的生命科学问题，近年来，越来越多的研究去揭示乳蛋白及乳脂肪合成的机理，但是研究进展却很少。现已发现...
- 李冬
- 关键词：甲基转移酶乳腺上皮细胞奶牛
- METTL3对乳腺上皮细胞中乳蛋白和乳脂肪合成的影响被引量：3
- 2017年
- 本试验旨在研究m6 A甲基转移酶(methyltransferase-like protein 3,METTL3)在奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMEC)中对乳蛋白和乳脂肪的调节作用。试验建立不同的BMEC模型,应用Western blotting、免疫荧光法检测添加雌激素(E)、蛋氨酸(Met)、METTL3超表达和抑制时对BMEC中乳蛋白和乳脂的影响,以及基因定位和表达变化。结果显示,当在BMEC培养液中添加E、Met及METTL3表达水平提高时,mTOR、p-mTOR、GlyRS、p-GlyRS、CSN2、SREBP-1c等表达量均增加,反之,这些基因表达量均下降,表明METTL3可以通过调控乳脂、乳蛋白的相关信号通路分子的基因表达进而影响乳脂、乳蛋白的表达。提示METTL3是乳合成的重要调节分子,可对细胞中乳脂、乳蛋白的合成起正调控作用。
- 李冬黄鑫李姗姗于萌萌李萌张明辉高学军
- 关键词：M6奶牛乳腺上皮细胞乳脂肪乳蛋白
