王绍伟
- 作品数：4 被引量：16H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：甘肃省科技支撑计划国家科技支撑计划国家肉牛牦牛产业技术体系项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 4种抗原定量方法观察牛支原体培养特征被引量：8
- 2016年
- 为探索在疫苗研制过程中牛支原体抗原收获时间及抗原定量替代方法,将牛支原体08M株接种于含10%马血清的Thiaucourt’s培养基,在110h内同时监测其颜色变化单位（color change units,CCU）、菌落形成单位（colony forming units,CFU）、菌体蛋白浓度和核酸含量的变化,绘制相应曲线。活菌计数结果（CCU和CFU）显示,牛支原体生长可分为明显的4期,10h进入对数期,30h进入稳定期,活菌数最高可达1.0×108 CCU/mL和7.7×107 CFU/mL,75h进入衰亡期;蛋白浓度从15h开始迅速增长,至35h蛋白浓度最高,为72.06μg/mL,此后维持在58.38～70.65μg/mL;核酸含量从15h开始增长,至25h后Ct值维持在15.32～17.84。结果表明,牛支原体蛋白含量在稳定期初期与活菌数具有良好的相关性。因此,在牛支原体灭活疫苗生产中,稳定期初期是最佳抗原收获时间,可用蛋白浓度法代替活菌计数法进行抗原定量。
- 王展慧赵萍陈胜利郝华芳秦明明王绍伟刘永生储岳峰
- 关键词：牛支原体菌落形成单位蛋白浓度核酸含量
- 检测支原体属特异性的5种PCR方法的评估和应用被引量：3
- 2016年
- 为了筛选一种可靠的PCR方法作为实验室日常快速检测支原体的手段,利用实验室保存的17种55株支原体和13种16株细菌,对5种已发表的支原体属特异性PCR方法进行了评估和筛选。结果显示,方法 4(使用引物对RNA5和MGSO扩增1 021 bp的16S rRNA基因片段)具有良好的特异性,能够完全区分支原体与非支原体细菌,以牛支原体为扩增对象,最低能够检出10 pg牛支原体基因组DNA以及浓度为100 ccu/m L的牛支原体培养物。利用该PCR方法和支原体分离方法检测人工感染牛支原体样品和临床采集样品73份,二者符合率为93.15%。结果表明方法4可作为实验室支原体常规快速检测方法。
- 秦明明赵萍陈胜利郝华芳王展慧王绍伟赵天荣梁荣刘永生储岳峰
- 关键词：PCR支原体属
- 绵羊和山羊嗜血支原体感染的检测及分子鉴定被引量：1
- 2016年
- 为了解绵羊和山羊嗜血支原体在甘肃、辽宁、内蒙古、宁夏、重庆、海南等地的流行状况及病原种类,利用瑞氏染色方法和已发表的嗜血支原体通用qPCR方法,对2011—2015年间采自上述地区的绵羊和山羊血液样品346份进行了检测,并对部分qPCR阳性样品扩增产物进行了测序和序列分析。结果,在甘肃、内蒙古的绵羊样品中和重庆、海南的山羊样品中检出嗜血支原体;其中,瑞氏染色方法的绵羊样品阳性率为12.45%(33/265),山羊样品阳性率为24.69%(20/81);qPCR绵羊阳性率为22.26%(59/265),山羊阳性率为37.04%(30/81)。对部分阳性样品的qPCR产物进行的序列分析结果显示,绵羊样品中5/7份为绵羊支原体和绵羊嗜血支原体待定种共同感染,1/7为绵羊支原体感染,1/7为绵羊嗜血支原体待定种感染;山羊样品中,2/3为绵羊支原体感染,1/3为绵羊嗜血支原体待定种感染。本文在我国首次证实山羊和绵羊中流行绵羊支原体和绵羊嗜血支原体待定种两种不同的嗜血支原体,且绵羊中存在两种嗜血支原体共同感染的情况。
- 王绍伟简莹娜赵萍陈胜利郝华芳秦明明王展慧杨吉飞刘志杰贾宁刘永生储岳峰
- 牛支原体08M株的致病性和免疫原性试验被引量：4
- 2017年
- 为了评估牛支原体08M株作为牛支原体灭活疫苗候选株的可能性,攻毒组的每头犊牛气管注射10 mL 08M(1×109CCU/mL)新鲜菌液,对照组气管注射10 mL 0.15 mol/L pH 7.2的PBS。在不同时间采集鼻拭子用realtime PCR进行排菌检测,采集血清检测感染抗体,攻毒后第28天进行剖检,观察肺部病变并进行病原分离。同时,以牛支原体08M培养物为抗原,混合MONTANIDEISA 201 VG,分别制备抗原质量浓度为0.46和1.48 mg/mL两个剂量的免疫原,以每头牛2 mL的剂量,间隔28 d颈部皮下注射犊牛2次,同时设置阴性对照组和空白对照组,二免后第28天进行攻毒试验,方法同致病性试验,免疫后在不同时间采集血清,检测血清抗体。致病性试验结果显示,攻毒组动物在攻毒后第4~14天进行间歇性排菌,第7天可以检测到感染抗体,剖检后观察到攻毒组牛肺部发生明显的病变并从肺部病变组织中分离到牛支原体。免疫原性试验结果显示,2种质量浓度的免疫原免疫动物后均能产生较高水平的血清抗体,攻毒后所有动物均进行间歇性排菌,免疫组动物血清抗体水平无明显变化,对照组动物一免后第14天血清抗体达到最高水平,剖检后所有动物肺部均有病变且都能够分离出牛支原体。结果表明,牛支原体08M株具有较强的毒力和良好的免疫原性,本试验中用牛支原体08M株制备的灭活疫苗免疫犊牛后可以使牛体产生很好的免疫反应但却没有保护作用。
- 王展慧赵萍陈胜利郝华芳秦明明王绍伟季文恒刘永生殷宏储岳峰
- 关键词：牛支原体免疫原性血清抗体
