- 抗日本血吸虫单抗NP11－4嵌合Fab抗体及其制备方法、应用
- 本发明抗日本血吸虫单抗NP11－4嵌合Fab抗体及其制备方法、应用涉及基因工程技术及制备血吸虫病治疗药物领域。应用定位于日本血吸虫成虫表膜、尾蚴膜、童虫膜、虫卵卵壳及卵内毛蚴膜的单抗NP11－4，利用基因工程技术提取杂交...
- 冯振卿顾春艳朱进李红任勇亚张慧林管晓虹
- 文献传递
- 日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体的构建 表达与初步鉴定
- 2009年
- 目的构建和表达日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体,初步鉴定表达产物的活性。方法用overlap PCR法扩增双链抗体基因VH-GGGGS-VL,将双链抗体基因重组入原核表达载体pBAD/gⅢ。表达质粒转化E.coli TOP10F′,左旋阿拉伯糖诱导表达。对表达产物进行分离纯化,ELISA检测纯化蛋白与血吸虫病人血清抗体的结合活性。结果测序证实双链抗体基因正确,构建了双链抗体的原核表达系统,双链抗体在细菌超声上清和沉淀内均有表达,分子量约为34kD。纯化产物经ELISA鉴定,结果表明NP30单特异性双链抗体可与血吸虫病人血清抗体特异性结合。结论构建和表达的日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体具有与亲本单抗相同的结合活性。
- 朱晓娟许静李红顾春艳唐奇李玉华仇镇宁王祝鸣朱进冯振卿管晓虹
- 关键词：日本血吸虫抗独特型抗体蛋白表达
- 日本血吸虫抗独特型抗体NP30对急性血吸虫病的免疫治疗作用被引量：1
- 2009年
- 目的探讨日本血吸虫抗独特型抗体NP30对急性血吸虫病的免疫治疗作用。方法根据L9(34)正交表设计动物实验,日本血吸虫尾蚴感染C57BL/6小鼠后注射抗独特型抗体NP30,观察不同治疗方案各组小鼠的存活时间并计算不同时间段的生存率,取小鼠肝脏石蜡切片,HE染色,测量小鼠单个虫卵肉芽肿的直径及面积。结果各实验组小鼠的生存中位数为45～78d,其中第4组生存中位数为71d,比同样感染40条尾蚴的对照组2(53d)延长了33.96%。Cox回归分析显示小鼠存活时间主要与尾蚴感染水平、抗体注射途径有关(P均<0.05)。各实验组小鼠单个虫卵肉芽肿平均直径为179.07～226.86μm,平均面积为(32.11～51.37)×103μm2;对照组各组小鼠单个虫卵肉芽肿平均直径为205.89～239.86μm,平均面积为(44.61～57.24)×103μm2。极差分析及方差分析均显示抗独特型抗体NP30的注射方式和注射剂量是影响虫卵肉芽肿平均直径和面积的主效应因素。NP30的最佳免疫治疗方案为感染尾蚴28d后,以每鼠每只20μg的剂量连续3次肌肉注射。结论抗独特型抗体NP30可改善血吸虫感染小鼠的生存状况,降低血吸虫对宿主造成的免疫病理损害,具有治疗急性血吸虫病的潜能。
- 许静朱晓娟顾春艳李红戴洋李玉华仇镇宁管晓虹朱荫昌冯振卿
- 关键词：日本血吸虫急性血吸虫病抗独特型抗体正交设计
- 肝癌干细胞的来源及其研究进展
- 2008年
- 肿瘤干细胞（CSC）假说认为肿瘤组织是由一小部分具有干细胞特性的细胞分化而来，其在肿瘤发生、发展、转移中起重要作用。现已证实在很多实体肿瘤中存存肿瘤于细胞．肝癌作为最常用的恶性肿瘤之一，越来越多的证据提示有肿瘤干细胞的存在。
- 查斌山顾春艳张建平冯振卿
- 关键词：肿瘤干细胞肝肿瘤
- 抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4人／鼠嵌合Fab抗体片段的制备及功能鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的:构建日本血吸虫单克隆抗体NP11-4的人/鼠嵌合Fab(cFab)抗体片段,并对cFab抗体片段结合活性进行鉴定。方法:用抗体框架区的通用引物PCR扩增抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4的VH及VL基因,测序分析其核苷酸序列。将测序正确的鼠源VH、VL分别与人IgG1的CH1、CL通过Overlap PCR扩增Fd及全长L,再利用Overlap PCR以Fd和全长L基因为模板扩增cFab基因。将cFab基因片段克隆至载体pComb3XSS中构建表达载体pComb3XSS-Fab,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导进行蛋白可溶性表达。通过Westernblot和ELISA方法对cFab抗体片段进行检测。结果:构建出抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4 cFab表达载体,Westernblot结果证实在大肠杆菌Top10F′中表达出cFab可溶性抗体片段,ELISA结果显示cFab抗体片段与可溶性虫卵抗原(SEA)有较好的结合活性。结论:表达、纯化了抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4cFab抗体片段,cFab抗体片段具有与亲本抗体相同的抗原结合能力,为制备抗日本血吸虫人源化免疫毒素提供了技术贮备。
- 顾春艳李红任勇亚许静朱晓娟李玉华仇镇宁王祝鸣朱进戚晓红管晓虹冯振卿
- 关键词：日本血吸虫可变区基因
- 抗血吸虫单克隆抗体NP11-4单链抗体及其制备方法、应用
- 本发明抗血吸虫单克隆抗体NP11-4单链抗体及其制备方法、应用涉及基因工程技术及血吸虫病治疗药物领域。本发明应用定位于日本血吸虫成虫表膜、尾蚴膜、童虫膜、虫卵卵壳及卵内毛蚴膜的单克隆抗体NP11-4，利用基因工程技术提取...
- 冯振卿李红顾春艳任勇亚朱进张慧林管晓虹
- 文献传递
- 抗日本血吸虫单链抗体免疫毒素的构建 表达及生物学活性鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的构建抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4单链抗体和绿脓杆菌外毒素衍生物PE38KDEL的原核融合表达载体,并对其表达产物进行生物学活性鉴定。方法应用PCR方法体外扩增NP11-4VH、VL、scFv和PE38KDEL基因,经测序后将scFv及PE38KDEL基因通过限制性内切酶双酶切及连接反应,构建原核表达载体pBAD/gIIIA-scFv-PE38KDEL,转化E.coliTop10F′,L-阿拉伯糖诱导表达,表达产物经Western blot及ELISA鉴定其活性。结果构建了重组免疫毒素表达载体pBAD/gIIIA-scFv-PE38KDEL,诱导表达产物主要以包涵体形式存在,分子量约为70kD;经变性、复性后的重组免疫毒素与血吸虫可溶性虫卵抗原有较好的结合活性。结论构建及表达了抗日本血吸虫单链抗体免疫毒素,为血吸虫病治疗提供了一条新思路。
- 李红朱晓娟顾春艳任勇亚许静王忠灿李玉华仇镇宁朱进冯振卿管晓虹
- 关键词：日本血吸虫SCFVPE38KDEL重组免疫毒素
- 抗日本血吸虫单抗NP11-4嵌合Fab抗体及其制备方法、应用
- 本发明抗日本血吸虫单抗NP11-4嵌合Fab抗体及其制备方法、应用涉及基因工程技术及制备血吸虫病治疗药物领域。应用定位于日本血吸虫成虫表膜、尾蚴膜、童虫膜、虫卵卵壳及卵内毛蚴膜的单抗NP11-4，利用基因工程技术提取杂交...
- 冯振卿顾春艳朱进李红任勇亚张慧林管晓虹
- 文献传递
- 抗血吸虫单克隆抗体NP11－4单链抗体及其制备方法、应用
- 本发明抗血吸虫单克隆抗体NP11－4单链抗体及其制备方法、应用涉及基因工程技术及血吸虫病治疗药物领域。本发明应用定位于日本血吸虫成虫表膜、尾蚴膜、童虫膜、虫卵卵壳及卵内毛蚴膜的单克隆抗体NP11－4，利用基因工程技术提取...
- 冯振卿李红顾春艳任勇亚朱进张慧林管晓虹
- 文献传递
- CAY10404靶向干预Wnt/β-catenin信号通路对多发性骨髓瘤干细胞清除作用的研究被引量：1
- 2013年
- Wnt信号被认为是多发性骨髓瘤(MM)致癌作用的一个重要角色。为了观察Wnt/β-catenin信号通路在多发性骨髓瘤特别是多发性骨髓瘤干细胞中的表达及Wnt/β-catenin信号通路抑制剂CAY10404对多发性骨髓瘤的治疗作用,对13个多发性骨髓瘤患者的骨髓样本和多发性骨髓瘤细胞株中的Wnt/β-catenin相关基因的表达情况进行分析和运用Western-blot方法分析β-catenin蛋白在多发性骨髓瘤不同细胞亚群中的表达及COX2抑制剂CAY10404对β-catenin蛋白表达的抑制,通过体内外试验观察CAY1040对多发性骨髓瘤不同细胞亚群的增殖抑制作用。结果显示Wnt/β-catenin信号通路在多发性骨髓瘤病人样本CD138-/CD19+干细胞亚群中比CD138+细胞亚群表达显著增高(P<0.05);体内外试验显示CAY10404明显抑制多发性骨髓瘤干细胞亚群的增殖(P<0.05)。该研究通过靶向干预Wnt/β-catenin信号通路,对治疗多发性骨髓瘤尤其是多发性骨髓瘤干细胞进行了探索。
- 杨烨顾春艳陆美龄王旻
- 关键词：基因芯片WNTΒ-CATENIN信号通路细胞实验
