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高分辨率溶解曲线法检测食品中致病菌的方法研究: 当今食源性疾病已成为一个全球关注的食品卫生问题,水产品、肉制品和奶制品等食物中经常同时发现沙门氏菌(Salmonella)、单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)和金黄色葡萄球菌(Staphyloc...; 章丽; 关键词：HRM 克隆表达; 文献传递

腾冲嗜热厌氧菌耐热解旋酶Tte-uvrD的克隆表达及粗酶的初步应用: 2014年; 以腾冲嗜热厌氧菌(Thermoanaerobacter tengcongensis)基因组DNA为模版,通过PCR克隆编码解旋酶Tte-uvrD的基因tte-uvrd,将该基因插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达载体pET-32a(+)-tte-uvrd,转入E.coli BL21中,经蓝白斑筛选和双酶切法筛选阳性重组转化子,挑取测序正确的单个阳性菌落,在IPTG诱导下表达出重组蛋白Tte-uvrD。诱导后的菌体经超声破碎和离心,上清液用硫酸铵沉淀法初步纯化,透析除盐,冻干复溶后得到粗酶液。用tHDA反应来验证Tte-uvrD粗酶液的活性,比较不同储存温度下粗酶液酶活保持的时间,并比较-20℃下储存两个月的粗酶液与商品化纯酶的tHDA反应灵敏度。结果表明,用本研究建立的克隆方法可成功克隆出耐热解旋酶TteuvrD,其粗酶液能用于tHDA反应,说明粗酶液具有解旋活性;粗酶液在-20℃下第80d酶活仍能保持稳定,4℃下则只能保持酶活约一周;-20℃下储存两个月的粗酶液能达到与商品化纯酶相当的灵敏度。; 章丽余以刚黄秀丽肖性龙; 关键词：腾冲嗜热厌氧菌

高分辨率熔解曲线分析法检测食源性副溶血性弧菌: 2013年; 为建立一种快速鉴定副溶血性弧菌的HRM(高分辨率熔解曲线)real-time PCR法,以tox R为靶基因,结合特异性引物,通过优化反应体系及条件,进行特异性、敏感性及重复性评价,并初步应用于90份送检的鲜活海产品样本的检测。特异性试验表明,该方法能选择性检测副溶血弧菌,Tm值为76.64±0.57℃;而与创伤弧菌、霍乱弧菌、金黄色葡萄球菌等多种海产品中常见的食源性病原菌没有交叉反应。灵敏度试验表明,该方法最少可检测tox R重组质粒的浓度为3.50×102copies/mL。重复性试验表明,同一样品于试验内及试验间的平均Tm值分别为76.53±0.35℃和76.74±0.52℃,变异系数分别为0.56±0.42%和1.11±0.73%。对90份鲜活海产品样本的检测证实该法可使阳性检出率从国标法的14.44%提高至18.89%。本研究所建立的副溶血性弧菌HRM real-time PCR法具有特异性好、灵敏度高、重复性好的特点,能应用于食品样本的检测,具有很好的研究价值和应用前景。; 章丽余以刚赖富饶吴晖杨锡洪肖性龙; 关键词：副溶血性弧菌高分辨率熔解曲线实时PCR 荧光

一种同时检测沙门氏菌、单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的试剂盒和方法: 本发明公开了一种同时检测沙门氏菌、单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的试剂盒和方法，试剂盒包括上述三种菌的上、下游引物，具体为沙门氏菌的上、下游引物分别为Seq No.4、5，单增李斯特菌的上、下游引物分别为Seq No.6、...; 肖性龙章丽李蓉余以刚吴晖李晓凤胡双芳; 文献传递

荧光PCR高分辨率熔解曲线分析法检测食源性金黄色葡萄球菌被引量：1: 2014年; 以sa442为靶基因,结合特异性引物,建立了一种快速检测鉴定食品中常见的金黄色葡萄球菌的HRM(高分辨率熔解曲线)real-time PCR法,对该法进行特异性验证,敏感性分析及重复性评价,并实现了其在人工染菌鸡肉样本检测的初步应用。结果表明,该方法具有较强的特异性,对8株金黄色葡萄球菌目标菌株均产生特异性溶解曲线,Tm值为(77.34±0.287)℃,而沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157等8种肉产品中常见的食源性非目标病原菌均不产生扩增曲线;灵敏度高,该法对阳性重组质粒PMD18-sa442的检测限为2.00×102 copies/mL;重复性强,同一样品于试验内及试验间的变异系数分别为(0.76±0.52)%和(1.34±0.45)%;且该法可初步应用于人工染菌鸡肉样(染菌量5、10、20 cfu/25 g样品匀浆)的检测。所建立的金黄色葡萄球菌HRM real-time PCR法具有特异性好、灵敏度高、重复性强的特点,能应用于食品样本的检测,为金黄色葡萄球菌的快速检测提供了新的方法。; 黄秀丽章丽奉夏平肖性龙余以刚; 关键词：金黄色葡萄球菌高分辨率熔解曲线荧光PCR

猪瘟病毒野生株和疫苗株荧光RT-PCR鉴别方法的建立被引量：1: 2013年; 为了建立猪瘟病毒野生株和疫苗株荧光RT-PCR鉴别方法,设计了1对通用引物和2条特异性MGB探针。此外,为防止假阴性结果出现,制备了假病毒用于全程检测监控。测试了本方法的特异性,灵敏度,重复性等技术指标。结果显示,在选定的猪病相关病毒组内特异性符合率达100%;对野毒株和疫苗株的检测灵敏度分别达到1TCID50/mL和0.1 TCID50/mL;重复性实验表明组内和组间变异系数均在0.7-2.2%之间。临床比对试验结果显示,荧光RT-PCR对猪肉、脾脏和血液病料进行猪瘟野毒检测的阳性率分别为66.7%、60.0%、77.8%,而传统方法的阳性率分别为52.4%、40.0%、50.0%;检出率比传统方法要高。此外,临床试验样本中,PCR抑制物在猪肉、脾脏和血液病料中存在的比例分别为9.5%、10.0%和5.6%,显示了假病毒作为内标对PCR检测监控的重要作用。; 余以刚黄韵陶文扬章丽吴晖肖性龙赖富饶杨锡洪; 关键词：猪瘟病毒荧光RT-PCR 假病毒

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章丽