葛永红
- 作品数：11 被引量：20H指数：3
- 供职机构：成都生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
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- 一种构建大容量同义密码库及优化基因模板的方法
- 本发明公开了构建大容量同义密码库及优化基因模板的方法，它是通过优化基因模板,改进蛋白质的理化性质。本发明优化基因的方法可以改进编码目标蛋白的核苷酸密码，并维持目标蛋白的原氨基酸序列不变,进而改进目标蛋白的可溶性、功能、产...
- 王明蓉张雪梅葛永红何明跃
- 文献传递
- 铜绿假单胞菌6型O-特异性多糖与破伤风类毒素结合物免疫原性研究被引量：1
- 2012年
- 目的研制有效防治铜绿假单胞菌感染的疫苗。方法用热酚水法提取铜绿假单胞菌6型(IATS 6)菌株的脂多糖(LPS),去除类脂A并纯化O-特异性多糖(O-SP),用CDAP活化O-SP,己二酸二肼作连接臂,在EDAC作用下,与破伤风类毒素结合制备出O-SP-TT结合物并对该结合物进行小鼠免疫原性试验和免疫保护性试验。结果制备的结合物在小鼠免疫原性试验中,产生了高效价的IgG抗体,与O-SP试验组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫保护性试验表明,结合物免疫小鼠能很好的保护5～10 LD50活菌的腹腔攻击。结论该结合物有望成为防治IATS 6型铜绿假单胞菌感染的有效疫苗。
- 谢茂超陈明拓姜晓杨硕王学林葛永红
- 关键词：铜绿假单胞菌O-特异性多糖结合疫苗免疫原性免疫保护性
- 登革病毒3型E蛋白的原核表达及抗体的制备被引量：2
- 2013年
- 目的原核表达并纯化登革病毒3型（DENV-3）E蛋白，并用于制备其抗体。方法采用PCR技术克隆DENV-3E蛋白基因，插入原核表达质粒载体pET-32a（＋），转化大肠杆菌RoseRa（DE3），IPTG诱导表达。表达产物经纯化后，免疫家兔，制备DENV-3E蛋白抗血清，并用于Westernblot鉴定。同时，采用ELISA测定其抗体效价，并初步应用于DENV-3的检测。结果重组表达载体经双酶切及测序证实构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为65×103，主要以包涵体形式表达；用纯化的包涵体蛋白免疫家兔后，获得的特异性抗血清效价为1：20480，该血清可与DENV-3发生特异性反应。结论本研究原核表达并纯化了DENV-3E蛋白，制备了高滴度的特异性兔抗血清。制备获得的DENV-3E蛋白抗体可用于登革病毒的鉴定，为登革病毒相关研究奠定了基础。
- 林华杨会强李竹石杨健赵宇刘俐葛永红曾献武曹毅乔代蓉李玉华
- 关键词：登革病毒E蛋白原核表达多克隆抗体
- 肠道病毒71型细胞感染灭活验证方法的建立被引量：3
- 2013年
- 目的建立肠道病毒71型细胞感染灭活验证的方法,为肠道病毒71型灭活疫苗的安全性提供技术保障。方法将不同浓度的肠道病毒71型接种于五种不同细胞选择敏感性好的细胞,然后将制备的8批肠道病毒71型灭活样品接种在筛选到的敏感细胞上,35℃,5%CO2连续培养21 d,观察细胞病变情况。结果 Vero细胞感染法最低能检测到1CCID50/ml的肠道病毒71型,该方法检测8批肠道病毒71型灭活样品均为阴性。结论本研究建立的肠道病毒71型细胞感染灭活验证方法具有良好的敏感性和重复性,可用于肠道病毒71型疫苗的灭活验证。
- 刘杰潘海龙孙艳牟建超陈平刘辉何敏曾献武葛永红杨莉
- 关键词：肠道病毒71型
- 磷酸铝佐剂吸附率对9V型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗免疫原性的影响
- :探讨磷酸铝佐剂及其吸附率对9V型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗免疫原性的影响.方法:磷酸铝佐剂在不同条件下,与9V型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合物进行吸附,吸附率分别为17％,61％和80％,三种制剂经腹腔免疫NIH小鼠,E...
- 杨溢尧刘威廖红梅杜游王凯葛永红熊慧玲江山崔长法
- 关键词：吸附率免疫原性
- 不同链长6A型肺炎球菌荚膜多糖与多糖结合物的稳定性及小鼠免疫原性
- 2023年
- 目的研究不同链长的6A型肺炎球菌荚膜多糖(type 6A pneumococcal capsular poly-saccharide,Pn6A)稳定性差异及链长对结合物稳定性和免疫原性的影响.方法采用高压均质机获得不同链长的Pn6A,并在1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐作用下与破伤风类毒素-己二酰肼衍生物形成共轭结合物.通过比较原始多糖、多糖降解物及结合物的核磁共振氢谱验证结构的正确性,通过硫酸蒽酮法和速率比浊法定量比较抗原性;通过高效液相-分子尺寸排阻层析-多角度激光散射仪比较不同链长多糖的稳定性;分析结合物物理化学(理化)性质,并通过重均相对分子质量(weight-average relative molecular weight,Mw)变化及游离多糖变化比较结合物稳定性;用原始多糖和结合物分别皮下免疫NIH小鼠3次,ELISA检测抗多糖IgG水平.结果Pn6A经机械剪切3、8、20次后,Mw由14.01×10^(5)g/mol分别下降为1.55×10^(5)、0.92×10^(5)和0.58×10^(5)g/mol,其对应结合物理化数据相近;核磁共振结果表明,多糖降解物和结合物各特征质子的化学位移相比原始多糖未发生改变;硫酸蒽酮法和速率比浊法定量计算得到的不同多糖和结合物单位抗原值相近;在不同pH及温度条件下,长链多糖及其结合物的Mw和游离多糖变化均大于短链多糖.不同链长多糖结合物免疫小鼠后诱导的IgG抗体滴度均高于原始多糖(F=2.90,P=0.048),而不同结合物之间的免疫原性差异无统计学意义(F=1.39,P=0.267).结论机械剪切不会破坏Pn6A化学结构和抗原性;Pn6A链长越短,所获得的多糖及结合物越稳定;Pn6 A经机械剪切后制备的结合物在小鼠体内可诱导良好的免疫应答.
- 周觉非代洁张玉洁蓝天杜游赵嘉祯陈思邓前廖红梅邹莎莎杨溢尧葛永红
- 关键词：核磁共振氢谱破伤风类毒素结合疫苗免疫原性
- 氢氧化铝佐剂对铜绿假单胞菌11型O-特异性多糖与破伤风类毒素结合物免疫原性和免疫保护性的影响被引量：1
- 2013年
- 目的评价氢氧化铝[Al(OH)3]佐剂对铜绿假单胞菌11型O-特异性多糖与破伤风类毒素结合物免疫原性和免疫保护性的影响。方法用热酚水法提取铜绿假单胞菌11型(IATS 11)菌株的脂多糖(LPS),去除类脂A并纯化O-特异性多糖(O-SP),用1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)活化O-SP,己二酸二肼(ADH)作连接臂,在乙基二甲氨基丙基碳二亚胺盐酸盐(EDAC)作用下,与破伤风类毒素(TT)结合制备出O-SP-TT结合物,并对该结合物进行添加Al(OH)3佐剂和不添加该佐剂的小鼠免疫原性试验和免疫保护性试验。结果加有Al(OH)3佐剂的结合物在小鼠免疫原性试验中,产生了高效价的IgG抗体,与不添加该佐剂试验组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫保护性试验表明,添加Al(OH)3佐剂结合物免疫小鼠对5～10 LD50活菌的腹腔攻击具有良好的保护作用。结论 Al(OH)3佐剂对本结合物有优良的免疫增强作用,添加该佐剂的结合物可望有效防止IATS 11型铜绿假单胞菌感染。
- 谢茂超陈明拓姜晓杨硕吴泓舟王学林熊慧玲葛永红
- 关键词：铜绿假单胞菌O-特异性多糖结合物免疫原性免疫保护性
- 5型肺炎链球菌荚膜多糖与破伤风类毒素的结合及其影响因素探讨被引量：3
- 2013年
- 目的:制备5型肺炎链球菌多糖与破伤风类毒素衍化物的结合物,探讨结合过程中多糖分子大小、多糖蛋白投入比、反应时间等因素对结合终产物的影响。方法:应用1-氰基-4-二甲氨基-吡啶四氟硼酸酯(CDAP)活化剪切后的5型肺炎球菌荚膜多糖,在缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDAC)作用下与连接了二酰乙二腈(ADH)的破伤风类毒素(TT)进行偶联反应,经分子筛层析纯化,得到5型肺炎链球菌多糖与破伤风类毒素的结合物,并检测其生化指标,免疫原性等。结果:剪切后的多糖免疫原性良好,其与TT的结合物在分子筛上可以很好分离;描述了多糖活化时CDAP的投入量,蛋白与多糖投入比,反应时间等对结合效率、结合物分子量、游离糖含量和结合物的多糖蛋白比影响。合成的结合物在免疫小鼠后,多糖特异性IgG抗体几何平均滴度(GMT)较多糖显著提高,显示免疫增强效应。结论:CDAP方法可以应用于PN5型肺炎链球菌荚膜多糖与破伤风类毒素结合疫苗的制备。
- 尹丹丹周觉非刘威邹莎莎杨溢尧马诚崔长法江山张雪梅葛永红
- 关键词：肺炎链球菌荚膜多糖结合疫苗破伤风类毒素
- 登革热疫苗研究进展与挑战
- 2024年
- 登革热是世界范围内流行最为广泛的虫媒病毒感染性疾病之一,由登革病毒(dengue virus,DENV)感染引起。每年约有3.9亿人感染DENV,其中大约有9600万人会出现临床症状,且每20例患者中就有1例患者可能出现严重的登革热并导致休克、内脏出血和死亡。DENV包括4种血清型(1~4),均可以引起不同程度的疾病。目前,没有特定的针对登革热的治疗药物,只有2种疫苗在一些国家获批使用:CYD-TDV和TAK-003。其中适用于9~45岁人群的疫苗CYD-TDV受到抗体依赖性增强(antibody-dependent enhancement,ADE)效应的影响,可能导致更严重的感染。因此,如何减缓或消除ADE的影响成为当前登革热疫苗研究的一个重要问题。除此之外,DENV非结构蛋白对免疫系统的影响也不可忽视。目前,至少有7种登革热疫苗处于不同的研发和临床试验阶段。本综述将主要介绍3种取得重大进展的候选疫苗,并总结规避ADE效应的方法和以非结构蛋白为免疫原的登革热疫苗研发进展。
- 孙益明杨会强葛永红
- 关键词：登革病毒登革热疫苗非结构蛋白
- 铜绿假单胞菌3型O-特异性多糖-破伤风类毒素结合疫苗的制备及其免疫特性分析被引量：3
- 2012年
- 目的研制铜绿假单胞菌3型O-特异性多糖(O-specific polysaccharide,O-SP)-破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)结合疫苗,并分析其免疫特性。方法采用热酚水法提取铜绿假单胞菌国际抗原分型系统(International Antigen Typing System,IATS)3型菌株的脂多糖(Lipopolysacchride,LPS),去除类脂A后纯化O-SP,用1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)活化O-SP,己二酸二肼(ADH)作为连接臂,在碳二亚胺(EDAC)作用下,与TT结合制备O-SP-TT结合疫苗,检测其理化性质,并分析结合疫苗的免疫原性和免疫保护性。结果 O-SP收获量相当于水解LPS量的30%,其蛋白质和核酸含量均低于1.0%,O-SP衍化度为3.83%,O-SP与TT的结合率约为40%,多糖蛋白质比(w/w)为1∶2.18。O-SP-TT结合疫苗可刺激小鼠产生高效价的IgG抗体,与O-SP组相比,差异有统计学意义(P<0.05);结合疫苗免疫小鼠能保护5 LD50和10 LD50活菌的攻击,小鼠免疫O-SP-TT后兔抗血清对3 LD50和5 LD50活菌攻击具有良好的保护作用。结论制备的铜绿假单胞菌3型O-SP-TT结合疫苗具有良好的免疫原性和免疫保护性,该疫苗有望成为防治IATS 3型铜绿假单胞菌感染的有效疫苗。
- 谢茂超陈明拓姜晓杨硕吴鸿舟王学林赵高梅葛永红
- 关键词：铜绿假单胞菌O-特异性多糖破伤风类毒素结合疫苗免疫保护性
