崔长法
- 作品数：12 被引量：6H指数：1
- 供职机构：成都生物制品研究所有限责任公司更多>>
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- 相关领域：医药卫生农业科学理学更多>>
- 响应面法优化检测己二酸二肼衍化后破伤风类毒素纯度的排阻型高效液相法
- 2016年
- 目的响应面法优化检测己二酸二肼(adipate hydrazine,ADH)衍化后破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)纯度的排阻型高效液相(SEC-HPLC)法。方法 SEC-HPLC层析柱Superdex 200 increase 3.2/300流动相为:20 mmol/L Na_2CO_3/NaHCO_3,150 mmol/L NaCl,pH 9.0,柱温25℃,单针检测时间60 min。采用响应面法及中心复合表面设计模型(Central Composite Face-centred,CCF)对层析柱的流速、进样量、样品浓度进行优化,通过分离度、峰对称性、峰理论塔板数、单针进样时间等评价指标,确定最优色谱参数,并在最优色谱参数下连续进样100针,验证其分离效果。结果色谱柱的最优色谱条件为:流速50μl/min,进样量5μl,样品浓度1.0 mg/ml,连续进样100针各响应量均满足优化目标。结论成功采用响应面法优化了检测ADH衍化后TT纯度的SEC-HPLC法,且优化后的方法具有良好的稳定性。
- 蔡峰马诚蓝天陈思周觉非赵祥宇杨溢尧崔长法
- 关键词：响应面法破伤风类毒素纯度
- 一种肺炎链球菌荚膜多糖的纯化方法
- 本发明提供了一种肺炎链球菌荚膜多糖的纯化方法，由如下步骤组成：向肺炎链球菌菌液中加入脱氧胆酸钠杀菌，调pH至酸性沉淀得到上清液，超滤后加入CTAB沉淀，取上清液或收集沉淀加入盐溶液得重悬液，再加入碘化钠沉淀去除残余CTA...
- 赵静王博崔长法唐利廖淡宜程可欣王公孝
- 一种肺炎链球菌荚膜多糖的纯化方法
- 本发明提供了一种肺炎链球菌荚膜多糖的纯化方法，由如下步骤组成：向肺炎链球菌菌液中加入脱氧胆酸钠杀菌，调pH至酸性沉淀得到上清液，超滤后加入CTAB沉淀，取上清液或收集沉淀加入盐溶液得重悬液，再加入碘化钠沉淀去除残余CTA...
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- 肺炎球菌1型荚膜多糖多克隆抗体制备与夹心ELISA法建立及其在多糖浓度测定中的应用
- 2013年
- 目的：利用肺炎球菌1型全菌体制备多克隆抗体，并且利用该抗体建立肺炎1型荚膜多糖夹心酶联免疫吸附分析法（ Enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA），用于检测发酵和纯化过程中的多糖浓度。方法用灭活的1型肺炎链球菌免疫家兔6周，获得高滴度的抗多糖血清，经过亲和层析纯化，获得高纯度的兔抗肺炎1型多糖抗体IgG。以纯化IgG作为包被抗体，加入多糖样品，再以生物素化的抗体作为检测抗体，建立夹心ELISA法检测肺炎1型多糖浓度。确定标准曲线的最佳线性范围，并对该方法进行特异性、准确性和精密度验证。结果兔免疫血清经过双向免疫扩散检测抗体滴度可达1∶32；该方法的线性检测范围为1．56～50 ng/mL；最低检测限为3．13 ng/mL。在标准品中混入其他型别多糖或培养基，回收率分别为102％和108％；该方法批内精密度和批间精密度分别为6．08％和7．01％。结论建立的夹心ELISA方法，其特异性、准确性和精密度均良好，可以特异地检测肺炎球菌1型多糖浓度。
- 刘威廖红梅谢谦黄放邹莎莎马诚江山崔长法
- 关键词：夹心ELISA
- 磷酸铝佐剂吸附率对9V型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗免疫原性的影响
- :探讨磷酸铝佐剂及其吸附率对9V型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗免疫原性的影响.方法:磷酸铝佐剂在不同条件下,与9V型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合物进行吸附,吸附率分别为17％,61％和80％,三种制剂经腹腔免疫NIH小鼠,E...
- 杨溢尧刘威廖红梅杜游王凯葛永红熊慧玲江山崔长法
- 关键词：吸附率免疫原性
- 5型肺炎链球菌荚膜多糖与破伤风类毒素的结合及其影响因素探讨被引量：3
- 2013年
- 目的:制备5型肺炎链球菌多糖与破伤风类毒素衍化物的结合物,探讨结合过程中多糖分子大小、多糖蛋白投入比、反应时间等因素对结合终产物的影响。方法:应用1-氰基-4-二甲氨基-吡啶四氟硼酸酯(CDAP)活化剪切后的5型肺炎球菌荚膜多糖,在缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDAC)作用下与连接了二酰乙二腈(ADH)的破伤风类毒素(TT)进行偶联反应,经分子筛层析纯化,得到5型肺炎链球菌多糖与破伤风类毒素的结合物,并检测其生化指标,免疫原性等。结果:剪切后的多糖免疫原性良好,其与TT的结合物在分子筛上可以很好分离;描述了多糖活化时CDAP的投入量,蛋白与多糖投入比,反应时间等对结合效率、结合物分子量、游离糖含量和结合物的多糖蛋白比影响。合成的结合物在免疫小鼠后,多糖特异性IgG抗体几何平均滴度(GMT)较多糖显著提高,显示免疫增强效应。结论:CDAP方法可以应用于PN5型肺炎链球菌荚膜多糖与破伤风类毒素结合疫苗的制备。
- 尹丹丹周觉非刘威邹莎莎杨溢尧马诚崔长法江山张雪梅葛永红
- 关键词：肺炎链球菌荚膜多糖结合疫苗破伤风类毒素
- 肺炎链球菌18C血清型荚膜多糖黏度的初步探讨被引量：1
- 2020年
- 目的初步探讨18C型肺炎链球菌(简称肺炎球菌)荚膜多糖的黏度性质及不同溶液体系对其黏度的影响,为肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗工艺开发和优化提供基础资料。方法采用黏度计测定不同相对分子质量、不同温度、不同浓度水溶液、不同盐浓度溶液体系和不同pH条件下18C型多糖溶液的黏度。结果18C型多糖溶液黏度与多糖相对分子质量呈正相关,与溶液温度呈线性负相关(R^2>0.99),与多糖浓度呈线性正相关(R^2>0.98);在0.15 mol/L NaCl溶液中其黏度最小,随盐浓度的增加,其黏度呈线性增加(R^2>0.98);溶液体系pH接近多糖等电点时,溶液的黏度较低,高于其等电点,溶液黏度增加,随后pH变化对溶液黏度的影响不明显。结论以18C型多糖为例,报道了肺炎球菌荚膜多糖溶液黏度及其在不同条件下的变化,提示在这一领域需要进一步的系统研究,为指导疫苗工艺开发、优化提供依据。
- 赵静王博廖蔚兰廖淡宜蓝天陈思刘威崔长法
- 关键词：黏度相对分子质量
- 磷酸铝佐剂对9V型肺炎球菌多糖结合物的免疫促进及琥珀酸的影响被引量：1
- 2022年
- 目的探讨不同性质的磷酸铝佐剂对9V型肺炎球菌多糖(Streptococcus pneumococcal 9V polysaccharide,9V-PS)结合物的免疫促进作用,及琥珀酸对免疫应答的影响。方法采用3种磷酸铝佐剂与9V-PS结合物制备疫苗,另外在相同配方的疫苗中加入琥珀酸,同时将无佐剂的9V-PS结合物作为对照。用所制疫苗皮下免疫小鼠,收集不同针次免疫后血清,ELISA测定免疫后小鼠血清中抗9V-PS IgG抗体浓度。结果采用不同磷酸铝佐剂的3种疫苗之间比较,小鼠血清中抗9V-PS IgG抗体浓度差异无统计学意义(t值为0.38~0.86,P值均>0.05)。磷酸铝佐剂配伍的疫苗与无佐剂组相比,小鼠血清中抗9V-PS IgG抗体浓度均显著提高,差异有统计学意义(t值为3.75~4.35,P值均<0.05);佐剂A和B组加入琥珀酸与未加入比较,小鼠血清中抗9V-PS IgG抗体浓度差异无统计学意义(t值分别为1.39、0.45,P值均>0.05)。结论磷酸铝佐剂可以显著提高9V-PS结合物的免疫应答。不同磷酸铝佐剂的免疫促进作用无明显差异。添加琥珀酸对免疫应答不产生明显影响。
- 杨溢尧刘威邹莎莎曾华英张伟赵雪琪杜游崔长法
- 关键词：佐剂免疫磷酸铝琥珀酸
- 肺炎链球菌无动物源冻干保护剂
- 本发明公开了一种肺炎链球菌无动物源冻干保护剂，属于微生物保存领域。所述冻干保护剂由如下成分组成：1％～5％重量/体积的大豆胨，1％～5％重量/体积的海藻糖，4％～8％重量/体积的甘露醇和0.3％～1.5％体积/体积的甘油...
- 廖淡宜赵静崔长法唐利程可欣王博王公孝赖军王红
- 肺炎链球菌无动物源冻干保护剂
- 本发明公开了一种肺炎链球菌无动物源冻干保护剂，属于微生物保存领域。所述冻干保护剂由如下成分组成：1％～5％重量/体积的大豆胨，1％～5％重量/体积的海藻糖，4％～8％重量/体积的甘露醇和0.3％～1.5％体积/体积的甘油...
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