刘培峰
- 作品数：15 被引量：29H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科委纳米专项基金上海市人才发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 4种人肾细胞癌原位移植裸鼠模型建立方法的比较被引量：1
- 2017年
- 背景与目的:肾细胞癌是最常见的肾脏恶性肿瘤,起病隐匿,恶性程度高。研究旨在建立成功率高、稳定的人肾细胞癌原位动物造模方法。方法:采用人肾细胞癌细胞(786-0、ACHN)进行细胞悬液原位注射法、皮下成瘤后引瘤原代细胞悬液原位注射法、皮下成瘤后引瘤组织块原位移植肾包膜下法及皮下成瘤后引瘤组织块原位移植肾周筋膜内法建立原位移植裸鼠模型,采用PET/CT、H-E染色、免疫组织化学染色及血清生化检测等手段观察成瘤率及肿瘤生长情况,评估4种方法的建模效果。结果:人肾细胞癌皮下移植瘤裸鼠模型,ACHN组成瘤率(90%)高于786-0组(30%);人肾细胞癌原位移植裸鼠模型,786-0原位注射组、ACHN原位注射组、ACHN皮下移植瘤引瘤后原代细胞原位注射组、ACHN组织块肾包膜下包埋组和ACHN组织块肾周筋膜内包埋组的成瘤率分别为33%、80%、90%、100%和20%,其中以ACHN皮下成瘤后引瘤组织块原位移植肾包膜下法成瘤率最高,影像学及病理组织学检查结果显示符合低分化肾细胞癌。结论:成功建立4种人肾细胞癌原位移植裸鼠模型,其中以ACHN皮下成瘤后引瘤组织块原位移植肾包膜下法成瘤效果最佳,为肾细胞癌发病机制及靶向治疗的进一步研究提供理想的动物模型。
- 赵佩佩陈晓静王巧玲赵雪赵亚男刘培峰戴慧莉
- 关键词：肾细胞癌裸鼠原位移植PET/CT
- 不同粒径Fe3O4纳米颗粒诱导人肝癌细胞毒性的作用机制研究
- 【目的】四氧化三铁磁性纳米颗粒(FeO NPs)已在疾病诊断、药物递送,以及肿瘤热疗等方面展现出了广泛的应用前景,然而,对其潜在毒性方面的机制研究远不及其应用的发展,故而影响了FeO NPs在临床上的深入应用。因此,我们...
- 谢月霞蔡晨蕾刘培峰
- 关键词：肝癌细胞FE3O4纳米颗粒细胞毒性
- 文献传递
- 构建叶酸修饰的乳腺癌靶向纳米超声造影微粒被引量：3
- 2016年
- 背景:研究表明,纳米级超声对比剂具有较强的穿透能力,使血管外靶组织显像成为可能,超越了微米级对比剂仅能发生血池内显像的局限性。目的:构建叶酸修饰的乳腺癌靶向纳米超声造影微粒,评估其与细胞靶向结合的能力及体外超声成像效果。方法:采用超声乳化-蒸发法制备对比剂聚乙二醇化乳酸羟基乙酸共聚物包裹液态氟碳的纳米粒(记为m PP/PFOB)和叶酸修饰的聚乙二醇化乳酸羟基乙酸共聚物包裹液态氟碳的纳米粒(记为m PPF/PFOB)。(1)生物相容性检测:取对数生长期的人皮肤成纤维细胞HFF-1、人乳腺癌MCF-7细胞,分别加入0,0.005,0.01,0.02,0.05,0.1,0.2,1 g/L的m PP/PFOB或m PPF/PFOB,培养24 h后检测细胞活力。(2)体外寻靶能力检测:取对数生长期的HFF-1、MCF-7细胞,均分3组干预,A、B组分别加入Cy5标记的m PP/PFOB与m PPF/PFOB,C组在加入Cy5标记的m PP/PFOB前以叶酸处理2 h,培养0.5 h后,流式细胞仪检测荧光强度;培养20 min后,共聚焦显微镜观察对比剂在细胞中的分布。(3)体外超声显影:实验分3组,A组为生理盐水,B组制备m PPF/PFOB纳米粒与生理盐水混悬液,C组以m PPF/PFOB纳米粒与生理盐水混悬液重悬MCF-7细胞沉淀,制备纳米粒与细胞混悬液,将3种液体加入乳胶手套中扎紧,采用超声诊断仪检测体外超声成像效果。结果与结论:(1)生物相容性检测结果:两种纳米粒无明显的细胞毒性;(2)流式细胞仪检测结果:在MCF-7细胞中,B组平均荧光强度明显高于A组和C组;而在HFF-1细胞中,3组平均荧光强度无显著差别;(3)共聚焦显微镜观察结果:m PPF/PFOB主要聚集在MCF-7细胞膜周围,m PP/PFOB则分布在胞浆。(4)体外超声显影结果:m PPF/PFOB与MCF-7细胞结合后,在体外能增强超声回声;(5)结果提示:叶酸修饰的聚乙二醇化乳酸羟基乙酸共聚物包裹液态氟碳的纳米粒具有良好的生物相容性,具有与乳腺癌MCF-7细胞靶向结合能力和增强超�
- 陈园园徐枫杨辉刘婷周建桥蔡晨蕾叶园园刘培峰韩宝三
- 关键词：纳米粒聚乳酸-羟基乙酸共聚物叶酸受体靶向对比剂乳腺癌国家自然科学基金
- DNA纳米配位聚合物促进骨髓间充质干细胞活性
- 2023年
- 目的:合成一种DNA纳米配位聚合物(Ca-pHis-Apt19S),并探讨其对骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cell,BMSC)活性的影响。方法:通过贴壁筛选法从小鼠股骨干骺端提取并用流式细胞术表面抗原鉴定BMSC;利用细胞穿透肽聚组氨酸(polyhistidine,pHis)与BMSC适配体Apt19S共价链接,通过与钙离子配位自组装制备DNA纳米配位聚合物(Ca-pHis-Apt19S),以期用于提高BMSC活性。用不同质量浓度的Ca-pHis-Apt19S处理BMSC,采用CCK-8法、活/死细胞染色法和流式细胞术检测Ca-pHis-Apt19S对BMSC的活力和表型的影响;采用荧光共聚焦显微镜观察Ca-pHis-Apt19S对BMSC的靶向能力,同时通过CCK-8法研究Ca-pHis-Apt19S促进BMSC活性的主要成分。结果:成功合成了粒径为50~120 nm的球形DNA纳米配位聚合物Ca-pHis-Apt19S;合成的Ca-pHis-Apt19S可显著促进BMSC的活力(P<0.05)且不影响其细胞凋亡和表面抗原的表达;共聚焦显微成像结果证实BMSC适配体Apt19S的组装能进一步提高细胞对Ca-pHis-Apt19S的摄取,而CCK-8实验结果显示,Ca-pHis-Apt19S中pHis能随着细胞摄取量的增加而进一步显著提高BMSC的活力(P<0.05)。结论:Ca-pHis-Apt19S可在体外靶向BMSC并显著提高其生物活性而不改变其表型,为BMSC的体外培养提供一种新方法。
- 杜凌陈晓静唐倩云刘培峰
- 关键词：脱氧核糖核酸骨髓间充质干细胞
- 改进的造口袋的压圈
- 一种改进的造口袋的压圈，包括一个环状的压圈体，所述的压圈体的表面设置有至少一个湿度检测模块，任意一个所述的湿度检测模块的表面均设置有一个湿度检测标签，所述的压圈体上还设置有一个控制器，任意一个所述的湿度检测模块的输出端均...
- 袁秀群陈海戈刘培峰
- 乳糖酸修饰mPEG-PLGA-PLL纳米粒靶向肝癌细胞Huh7的研究被引量：5
- 2012年
- 背景与目的:去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)是一种肝细胞特异性表达的膜表面蛋白,能够特异性地识别带有半乳糖残基的糖蛋白。乳糖酸含有半乳糖基团,可以作为靶向肝癌的特异性配基。该研究旨在探讨乳糖酸修饰的聚乙二醇/聚丙交酯-乙交酯/聚赖氨酸[methoxy-poly(ethylene glycol)-b-poly(D,L-lactide-co-glycolide)-b-poly(L-lysine)(mPEG-PLGA-PLL)纳米粒,mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs)]对肝癌Huh7靶向效果,为构建新型的靶向肝癌的纳米递送系统提供实验数据。方法:MTT法确定Huh7细胞摄取mPEG-PLGA-PLL NPs与mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs适当的浓度;通过激光共聚焦和荧光显微镜定性观察Huh7对罗丹明B标记的mPEG-PLGA-PLL NPs和mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs的摄取;并采用流式细胞计数仪定量研究Huh7细胞对两者的摄取差别;尾静脉注射荷Huh7瘤裸鼠研究两者体内分布情况。结果:mPEG-PLGA-PLL NPs与mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs的浓度在0.2 mg/mL时细胞存活率较高且对Huh7细胞的毒性较小。激光共聚焦断层扫描显示Huh7细胞可以较好地摄取mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs,同时流式细胞仪定量显示mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs在Huh7细胞的分布较mPEG-PLGA-PLL NPs高40%(P<0.05)。mPEG-PLGA-PLL NPs与mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs在移植瘤中的分布明显多于其他脏器,并且随时间的延长mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs体现了更好的靶向效果。结论:体外与体内实验证明乳糖酸修饰的mPEG-PLGA-PLL NPs对肝癌细胞Huh7有很好的靶向效果,可为肝癌的靶向治疗提供较好的药物载体。
- 孙彦明朱明洁王炳武孙颖刘培峰段友容
- 关键词：纳米粒靶向
- 白花蛇舌草通过抑制RAP1-JNK信号通路选择性促进人肾癌ACHN细胞间质-上皮转化被引量：7
- 2019年
- 目的 :研究白花蛇舌草(Hedyotis di usa Willd,HDW)对人肾癌细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 :人肾细胞腺癌ACHN和人肾近曲小管HK-2细胞经HDW处理24 h后,采用CCK-8法检测HDW对ACHN和HK-2细胞增殖的影响,FCM法检测HDW对细胞周期和凋亡的影响。光学显微镜下及罗丹明染色法观察HDW处理对ACHN和HK-2细胞形态的影响;采用免疫荧光染色法和蛋白质印迹法检测间质-上皮转化(mesenchymal-epithelial transition,MET)相关蛋白表达的变化。划痕愈合实验和Transwell小室法检测ACHN和HK-2细胞的迁移和侵袭能力,RNA测序法检测HDW对ACHN细胞转录组的影响;实时荧光定量PCR法检测RAP1信号通路相关基因RAP1GAP、RASGRP2、RAPGEF3、MAGI1及GNAI1 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activate protein kinase,MAPK)通路相关蛋白c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(phospho-JNK,p-JNK)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)、磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和磷酸化ERK(phospho-ERK,p-ERK)表达水平的改变。结果:HDW可选择性抑制ACHN细胞增殖(P <0.01),将细胞周期阻滞于S期(P <0.01),诱导细胞凋亡(P <0.01)。HDW处理后ACHN细胞的形态发生了明显变化,HDW可促进ACHN细胞中E-钙黏蛋白1(E-cadherin 1)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达,并抑制波形蛋白(Vimentin)和Snail1的表达(P值均<0.01)。HDW能显著抑制细胞的迁移和侵袭能力(P值均<0.01),且ACHN和HK-2细胞之间没有明显差异。RNA测序结果分析显示,HDW可影响细胞周期相关基因以及控制细胞生长的转录因子E2F和Myc靶基因的表达,并激活p53信号通路;HDW可显著下调ACHN细胞中RAP1GAP、RASGRP2、RAPGEF3、MAGI1及GNAI1 mRNA(P值均<0.000 1)和p-JNK蛋白的表达水平。结论 :HDW可能通过抑制RAP1-JNK信号通路来选择�
- 邹寒冰周雁张元亮何小珍刘培峰刘永忠
- 关键词：肾肿瘤白花蛇舌草上皮-间质转化细胞运动
- 基于3D打印技术的微芯片用于模拟肠绒毛和肿瘤表面形貌被引量：3
- 2019年
- 目的·提出一种基于3D打印技术的器官芯片的制作方法并研究其表面细胞生长与各因素之间的关系。方法·通过3D打印技术与表面微结构转移方法,在聚二甲基硅氧烷(polydimethylsiloxane,PDMS)芯片上制作出类肠绒毛和模拟肿瘤表面的类溃疡、类隆起微结构。结合荧光染色和激光共聚焦显微镜成像技术,测定了芯片表面修饰、微结构的形状及高度、培养时间等条件对芯片上的结肠腺癌细胞株Caco-2细胞表面覆盖率和细胞密度的影响。结果·相对于3D打印的树脂芯片,PDMS芯片更易使细胞黏附生长。在PDMS芯片立体结构表面,使用鼠尾胶原蛋白Ⅰ进行修饰后,细胞覆盖率、细胞密度均显著提高(均P<0.05)。芯片表面结构高度越高,其表面的细胞密度越低(P=0.000)。经表面修饰后,相同高度的不同立体结构上细胞密度无明显差异(均P>0.05)。结论·3D打印技术与表面微结构转移方法可用于制作模拟肠绒毛和肿瘤表面结构的器官芯片,表面修饰、微结构的高度均会对其表面细胞的生长产生影响。
- 张忆恒杜静夏安越崔金辉甘明哲刘培峰
- 关键词：聚二甲基硅氧烷肠绒毛肿瘤表面形貌
- 靶向阳离子脂质体递送乳腺癌抑制作用的研究miRNA对三阴性被引量：1
- 2017年
- 目的探讨靶向阳离子脂质体(CLPs)递送miRNA对三阴性乳腺癌(TNBC)相关特异性抑瘤基因的作用。方法通过薄膜分散法评估理化性质对阳离子脂质成分进行优化,制备具有理想表征性质的新型透明质酸(HA)CLP,表征CLPs的粒径和zeta电位。对CLPs进行表面HA靶向修饰,并通过激光共聚焦观察和流式细胞术的荧光检测评估HA-CLPs进入细胞的能力。利用EdU细胞增殖检测和细胞划痕实验对负载miRNA的HA-CLPs对细胞产生的生物学效应进行研究。结果薄膜分散法制备的CLPs纳米颗粒分散性良好、形态均一,呈中空球形结构,CLPs平均粒径为(180.6±3.4)nm、平均zeta电位为(43.4±2.8)mV。经过HA修饰后的纳米颗粒及运载miR-205后的纳米颗粒平均粒径分别为(236.65±6.9)nm、(205.6±2.2)nm,平均电位分别为(29.1±5.4)mV、(11.2±1.1)mV。经过激光共聚焦检测和流式细胞术荧光检测,验证了HA-CLPs能够顺利将miR-205运送至细胞内而分布在细胞核附近,且HA的靶向作用显著。EdU实验和细胞划痕实验验证了运载入TNBC细胞内的miR-205和miR-34a对其增殖和迁移的抑制作用。结论制备的靶向阳离子脂质体对TNBC细胞具有较强的靶向特异性,且通过靶向递送miR-205和miR-34a对TNBC细胞的增殖和迁移起到了一定的抑制作用。
- 徐枫刘婷赵亚男陆森陈园园叶园园刘培峰韩宝三
- 关键词：脂质体透明质酸乳腺肿瘤
- 磁性纳米四氧化三铁协同表柔比星逆转MCF-7/ADR细胞多药耐药研究
- 2015年
- 目的探讨磁性纳米四氧化三铁(MgNPs-Fe3O4)联合表柔比星(epirubicin,EPI)逆转人源乳腺癌细胞MCF-7/ADR耐药性的机制。方法将乳腺癌细胞株MCF-7/ADR分为对照组、MgNPs-Fe3O4组、EPI组和EPI+MgNPsFe3O4组,CCK8法检测MgNPs-Fe3O4和EPI对MCF-7/ADR细胞增殖的抑制作用;Hoechst33342法检测细胞凋亡;RT-PCR检测耐药基因ABCB1和ABCG2mRNA表达水平变化;蛋白质印迹法分析耐药蛋白P-gp、BCRP及其表达率。结果 CCK8法检测结果显示,EPI和EPI+MgNPs-Fe3O4对MCF-7/ADR细胞增殖抑制作用呈浓度依赖性,5μmol/L的EPI对MCF-7/ADR细胞增殖抑制率为(27.59±2.32)%,5μmol/L EPI+20μg/mL MgNPs-Fe3O4对MCF-7/ADR细胞增殖抑制率为(49.70±3.60)%,P=0.002。Hoechst33342荧光结果显示,EPI+MgNPs-Fe3O4组与其他3组相比,细胞凋亡率为(69.34±1.53)%,细胞凋亡的形态变化更加明显,高于对照组(3.33±0.58)%、MgNPs-Fe3O4组(4.33±0.58)%和EPI组(33.33±2.08)%。实时定量PCR结果显示,EPI+MgNPs-Fe3O4组ABCB1mRNA的相对表达量为0.347±0.012,低于对照组(1.001±0.072)、MgNPs-Fe3O4组(0.971±0.015)和EPI组(0.622±0.043);EPI+MgNPs-Fe3O4组的ABCG2mRNA的相对表达量为0.528±0.068,低于对照组(1.002±0.073)、MgNPs-Fe3O4组(0.949±0.026)和EPI组(0.785±0.083)。蛋白质印迹法结果显示,EPI+MgNPs-Fe3O4组的P-gp蛋白的相对表达量为0.363±0.025,低于对照组(0.957±0.031)、MgNPs-Fe3O4组(0.887±0.038)和EPI组(0.680±0.056);EPI+MgNPs-Fe3O4组BCRP蛋白的相对表达量为0.387±0.035,低于对照组(0.947±0.015)、MgNPs-Fe3O4组(0.933±0.040)和EPI组(0.633±0.050)。结论MgNPs-Fe3O4可能通过下调耐药基因ABCB1、ABCG2和耐药蛋白P-gp、BCRP的表达,逆转乳腺癌细胞对EPI的耐受性,增强化疗药物敏感度。
- 叶园园陈园园徐枫刘颖斌刘培峰韩宝三
- 关键词：表柔比星乳腺肿瘤耐药逆转
