王志宇
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 供职机构：卫生部更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 荧光定量RT-PCR在轮状病毒检测中的应用被引量：5
- 2006年
- 目的:建立轮状病毒的荧光定量RT-PCR检测方法,用于检测临床腹泻样本。方法:使用Taqman探针技术,建立轮状病毒VP6特异的荧光定量RT-PCR体系。与WHO推荐的轮状病毒检测方法ELISA平行检测,对该体系的检测范围、灵敏度、特异性等参数进行评价。并将该体系用于临床腹泻样本。结果:该荧光定量RT-PCR体系具有高度灵敏度和特异性,线性范围宽,最低可检出1TCID50/ml。对113份临床腹泻样本的平行检测结果显示,该荧光定量RT-PCR体系与ELISA的检出率差异无统计学意义(χ2=0.41,P>0.5),可同样用于临床样本检测。结论:成功建立了轮状病毒荧光定量RT-PCR体系,该体系灵敏、特异、重复性好,可用于临床检测。
- 王志宇王健伟何深一孟红韩金祥洪涛
- 关键词：实时逆转录聚合酶链反应轮状病毒属聚合酶链反应
- 截短型A组轮状病毒VP6在E.coli中的高效表达
- 目的 A组轮状病毒（RV）的组特异性抗原（VP6）片段,为发展RV免疫检测技术提供材料。方法以pcDNA3．1-VP6为模板,通过PCR扩增得到VP6的截短突变体编码基因VP6-1,将其插入谷胱甘肽巯基转移酶 （GST）...
- 王志宇王健伟何深一吴围屏韩金祥洪涛
- 关键词：轮状病毒原核表达
- 文献传递
- 截短型A组轮状病毒VP6在E.coli中的高效表达被引量：1
- 2006年
- 目的：研究A组轮状病毒（RV）组特异性抗原（VP6）片段的表达，为RV免疫检测技术提供材料。方法：以pcDNA3．1．VP6为模板，通过PCR扩增得到VP6的截短突变体编码基因VP6．1，将其插入谷胱甘肽巯基转移酶（GST）融合表达载体pGEX-5X，在E．coli中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（WIG）诱导表达。对表达产物进行SDS．PAGE和Western blot分析。通过改变宿主菌、培养基、IPTG浓度和培养温度等条件，提高目的蛋白的可溶性表达水平，使用GST-Sepharose 4B亲合层析进行初步纯化。结果：选定VP6氨基酸12-143片段为目的蛋白，PCR扩增其396bp的编码基因片段，构建出pGEX．5X．VP6．1。将该重组质粒转化E．coli后，SDS．PAGE和Western blotting分析均显示，含有截短VP6蛋白的重组融合蛋白GST：：VP6-1在E．coli中获得高效表达，约占菌体总蛋白的30％。该蛋白主要以包涵体形式存在，经条件优化，最终通过低浓度IPTG、低温诱导提高重组蛋白的可溶性表达水平，GST亲和层析可对其进行初步纯化。结论：VP6．1蛋白在E．coli中可被高效表达和纯化，为下一步制备抗VP6的特异性单克隆抗体并用于免疫检测打下基础。
- 王志宇王健伟何深一吴围屏韩金祥洪涛
- 关键词：轮状病毒属原核细胞基因表达
- 轮状病毒检测技术被引量：6
- 2004年
- 轮状病毒是人和动物急性腹泻的重要病原 ,对轮状病毒进行快速、准确的检测对于疾病监测和疫情控制极为重要。从病原学、免疫学以及基因检测三方面 ,总结了轮状病毒检测技术的发展状况 ,重点介绍了较为成熟的免疫学技术 ,最新发展的实时荧光定量PCR、核酸序列依赖的扩增等分子生物学新技术 。
- 王志宇王健伟何深一韩金祥洪涛
- 关键词：轮状病毒急性腹泻病原疾病监测
