王健伟
- 作品数：210 被引量：923H指数：16
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院病原生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 酵母朊蛋白Sup35NM体外淀粉样纤维的形成动态研究被引量：1
- 2006年
- 目的研究酵母朊蛋白Sup35在近似于生理环境的体外条件下淀粉样纤维形成的动态过程,为阐明淀粉样纤维的形成机制提供材料和线索。方法在E.coli中表达Sup35蛋白的NM段,并用Ni2+螯合层析对重组蛋白在变性条件下进行纯化,在不同的时间点用透射电子显微镜观察、圆二色谱检测以及蛋白酶K消化试验,同时利用硫黄素(thioflavin T,ThT)结合试验对淀粉样纤维形成的动态过程进行检测。结果在变性条件下成功纯化出Sup35NM重组蛋白。利用透射电子显微镜观察到了Sup35NM蛋白在PBS(pH7·4)缓冲液中发生聚集时的形态变化,圆二色谱检测显示该过程伴随蛋白结构由α-螺旋到β-折叠的转变。纤维具有较强的抗蛋白酶K消化的特性。ThT结合试验提示淀粉样纤维的形成在经过了一个快速的上升阶段后达到平台期,纤维形成的速率会随着蛋白浓度的提高而加快。结论酵母朊蛋白Sup35NM在接近生理环境的体外条件下极易发生聚集,聚集物具有淀粉样纤维性质,Sup35NM淀粉样纤维形成的动态过程为淀粉样变成核聚集模型的研究提供了依据。
- 魏海燕刘英霞王健伟屈建国赵蔚明于修平洪涛
- 关键词：淀粉样蛋白朊病毒酵母菌
- 中国轮状病毒非结构蛋白NSP4基因变异特征的分析被引量：8
- 2003年
- 目的 研究我国轮状病毒流行株NSP4基因的变异特点。方法 对近年来从我国不同地区获得的 2 7份人轮状病毒流行株的NSP4基因用RT PCR进行扩增 ,克隆后进行全长cDNA序列分析 ,并利用Clustal× 1.8,TreeView3 2及DNAStar软件与参比株Wa、KUN、AU 1、EW及来自GenBank的OSU、SA11、Hochi、US2 44、Bristol株的NSP4序列进行分析比较。采用PCR分型方法对VP7血清型进行鉴定 ,确定轮状病毒G型与NSP4基因型的关系。结果 氨基酸同源性比较表明 ,我国轮状病毒不同流行株NSP4之间同源性为 81.7%～ 99.4% ,据此可将 2 7株RVNSP4分为 2组 ,分别以Wa株和KUN株为代表 ,其中以Wa组为主。组内同源性分别为 92 .0 %～ 99.4%和 92 .0 %～ 98.9% ,组内变异率分别为 0～ 8 5 %及 1 2 %～ 8 5 %。两组间变异率达 16 6%～ 2 1 0 %。氨基酸进化树提示在Wa组内包括 3个亚组。轮状病毒G血清型与NSP4基因型之间的联系不确定。结论 我国流行株NSP4基因主要可分为Wa组和KUN组 ,在Wa组内可形成三个亚组 ,并且在高变区有特征性的氨基酸位点。
- 王大燕王健伟徐倏燊温乐英毛宇荣于修平洪涛
- 关键词：轮状病毒属蛋白质构象基因转变
- 生物药和可食用疫苗:一个兴旺的开发领域(综述)
- 近年来,在分子生物学里,出现了一个崭新的领域,即以转基因植物技术为平台的生物制药,正在成为现代基因工程中一支兴旺发达的生力军.因为在植物上容易开展转基因操作和提供廉价而丰富的蛋白质来源,因而具有生物制药方面的巨大潜力.本...
- 洪涛王健伟
- 关键词：转基因植物生物制药基因工程
- 文献传递
- 1株表达人轮状病毒VP7的重组腺病毒的生物学特性鉴定被引量：2
- 2002年
- 目的 对表达轮状病毒VP7基因的 1株重组腺病毒rvAdG1VP7(G)的生物学特性进行鉴定 ,为进一步免疫学研究打下基础。方法 用rvAdG1VP7(G)感染 2 93细胞 ,并分别应用电子显微镜技术以及Southernblot、PCR、RT PCR和Westernblot等分子生物学方法了解rvAdG1VP7(G)的形态、VP7基因整合、遗传稳定性、VP7基因在细胞内转录及表达等有关生物学特性。结果 电子显微镜观察表明 :rvAdG1VP7(G)具有典型的腺病毒形态 ;Southernblot、PCR、RT PCR和Westernblot等分子生物学方法分析显示 :rvAdG1VP7(G)中确有特异性的VP7基因稳定整合 ,有较好的遗传稳定性 ,感染 2 93细胞后能有效转录 ,可表达轮状病毒主要结构蛋白VP7。结论 rvAdG1VP7(G)具有良好的生物学性质 ,为进行体内实验研究提供了必要条件。
- 何金生王健伟温乐英屈建国姜秀丽董京芳洪涛
- 关键词：重组腺病毒生物学特性遗传学
- HIV-1Vpr基因在肿瘤细胞中诱导G2期停滞、细胞致死效应及其核定位功能研究被引量：8
- 2000年
- 目的 通过研究HIV - 1Vpr基因在宫颈癌细胞HeLa中诱导细胞周期G2停滞、细胞致死效应及其核定位功能 ,探讨将Vpr用于肿瘤治疗的可能性。方法 用脂质体转染的方法 ,将携带Vpr或其突变体VprX基因的质粒转入HeLa细胞内 ,用流式细胞仪分析Vpr诱导的G2停滞和细胞致死性 ;用荧光显微镜观察GFP -Vpr融合蛋白的荧光确定其核定位功能。结果 Vpr具有核定位功能。Vpr和VprX蛋白都具有细胞致死性 ,但是VprX蛋白不能使细胞停滞到G2期。结论 首次报道了Vpr的G2期停滞和细胞致死功能在哺乳动物细胞中是互相独立的。
- 杨军Steve Yi王健伟洪涛赵玉琪
- 关键词：HIV-1VPR基因肿瘤细胞
- 复制缺陷型重组腺病毒rvAdG1VP7免疫学效果的研究被引量：6
- 2002年
- 目的 对 1株可表达A组轮状病毒主要结构抗原VP7的重组腺病毒rvAdG1VP7的体内免疫学效果进行研究。方法 通过灌胃和滴鼻 2种途径对BALB/c小鼠进行免疫 ,并对免疫后小鼠体液和黏膜免疫进行分析。结果 初次免疫后 ,2组小鼠均有应答 ,但血清IgG抗体滴度及阳转率不同。再次免疫后 ,显示出明显的加强效果。除了血清IgG外 ,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA。滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到SIgA ,灌胃组仅在肠道检测到SIgA。滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组。对滴鼻组小鼠肺灌洗液IgG/SIgA的阳转率进行了比较 ,发现IgG的应答水平明显高于SIgA。免疫后小鼠血清中IgG的动态观察表明 ,抗体可长期持续至少半年以上。 结论 重组腺病毒载体rvAdG1VP7所取得的良好免疫学效果 ,为我国具有自主知识产权的新型轮状病毒基因工程疫苗的进一步研制奠定了基础。
- 何金生王健伟姜秀丽王大燕温乐英董京芳屈建国洪涛
- 关键词：缺陷型重组腺病毒轮状病毒属遗传学VP7基因
- 小鼠轮状病毒EW株VP7基因的克隆及其在重组腺病毒中的表达
- 2003年
- 目的:构建表达小鼠轮状病毒(EDIM)EW株VP7基因的重组腺病毒,以在小鼠模型上研究轮状病毒的免疫保护机制。方法:用RT-PCR方法扩增EDIMVP7全长cDNA并进行基因序列分析,将所得的VP7基因片段插入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,获得重组质粒pShuttleCMV-EVP7,将该质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183获得重组腺病毒质粒pAdCMV-EVP7,将该质粒线性化后转染293细胞包装重组腺病毒rvAdEVP7。以rvAdEVP7感染293细胞,并分别应用电子显微镜、PCR、RT-PCR和Westernblot等方法观察rvAdEVP7的形态、VP7基因整合、遗传稳定性、VP7基因在细胞内转录及表达等有关生物学特性。结果:获得了小鼠轮状病毒的全长cDNA,重组腺病毒rvAdEVP7具有典型的腺病毒形态,PCR、RT-PCR和Westernblot等分子生物学方法分析显示:rvAdEVP7中确有特异性的VP7基因稳定整合;有较好的遗传稳定性;感染293细胞后能有效转录;可表达轮状病毒主要结构蛋白VP7。结论:成功构建含VP7基因的重组腺病毒rvAdEVP7,为进一步研究轮状病毒的免疫保护机制打下了基础。
- 李勇王健伟屈建国于修平王大燕姜秀丽洪涛
- 关键词：重组腺病毒轮状病毒VP7基因克隆
- 电镜观察从非典型肺炎患者尸检标本中发现衣原体样和冠状病毒样颗粒被引量：73
- 2003年
- 目的 探索 2 0 0 2年末暴发于广东等地的非典型肺炎的病原。方法 对来自广东、山西、四川省和北京市的 7例非典型肺炎死亡病人的尸体解剖标本进行超薄切片电镜观察 ,将病人肺组织提取物接种于 2 93细胞 (人胚肾转化细胞系 ) ,分离病原 ,对病人组织中和分离的病原进行免疫学鉴定。结果 超薄切片电镜观察 ,在死亡患者的肺 ( 7例 )、脾 ( 2例 )、肝 ( 2例 )、肾 ( 3例 )和淋巴结 ( 1例 )中均观察到衣原体样包涵体和网质小体、中间体、原生小体颗粒的存在 ,并在 3例病人肺组织中同时见到了冠状病毒样颗粒和未知的基质样结构。用RT PCR方法从 2例病人肺组织中扩增出冠状病毒RNA聚合酶基因片段。将病人肺组织提取物接种于 2 93细胞进行培养 ,取第 2代细胞作电镜观察 ,也发现衣原体样颗粒和包涵体的存在。在病人组织和培养细胞中见到的衣原体样颗粒均不能与衣原体属特异性抗体和抗肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体抗体反应 ,提示可能为新的衣原体样因子。结论在死亡病人组织和培养细胞中发现的衣原体样和冠状病毒样颗粒 ,可能是广东等地暴发的非典型肺炎的主要病原。
- 洪涛王健伟孙异临段淑敏陈良标屈建国倪安平梁国栋任丽丽杨仁全郭岚周为民陈杰李德新许文波徐红郭元吉戴淑玲毕胜利董小平阮力
- 关键词：电镜观察非典型肺炎衣原体科冠状病毒科
- 肠道黏膜免疫系统的研究进展被引量：11
- 2007年
- 束弋王健伟
- 关键词：黏膜免疫系统肠道黏膜病原体感染体内环境营养吸收复杂网络
- 人腺病毒和博卡病毒荧光定量PCR检测方法及其应用
- 本发明提供了可用于人腺病毒和博卡病毒所致疾病检测的荧光定量PCR的引物和探针；在一个实施方案中，所述引物和探针的序列如SEQ ID NOs：1‑3所示或如SEQ ID NOs：4‑6所示。本发明还提供了所述引物和探针或其...
- 王健伟任丽丽肖艳郭丽李建国
- 文献传递
