徐敏锐
- 作品数：7 被引量：15H指数：2
- 供职机构：安徽大学金种子酒业产业技术研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>
- 用大肠杆菌制备O157多糖-菌毛蛋白结合物的研究被引量：2
- 2013年
- 目的以大肠杆菌O157型多糖与菌毛蛋白PilE为模型,在大肠杆菌中重构脑膜炎奈瑟球菌的O-糖基化修饰系统,为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗技术提供基础。方法用Red重组技术敲除大肠杆菌W3110的O抗原连接酶基因waaL,构建CLM24菌株。在该菌株中共表达脑膜炎奈瑟球菌菌毛蛋白基因pilE、寡糖转移酶基因pglL,构建O-糖基化修饰系统。分别转化大肠杆菌鼠李糖转移酶基因wbbL与大肠杆菌O157型多糖表达载体于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,再利用Western印迹检测菌毛蛋白PilE的修饰情况。结果利用抗His-tag单抗进行Western印迹检测,16℃IPTG诱导条件下,转化大肠杆菌鼠李糖转移酶基因wbbL于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,重组菌CLM24/pMMB66EH-pilE-his/pETtac28-wbbL-pglL与其他对照菌相比,不仅在相对分子质量为19×103处有特异性条带,而且在相对分子质量(40～60)×103处也出现了特异的梯状条带;转化大肠杆菌O157的O多糖基因簇克隆载体于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,重组菌CLM24/pMMB66EHpilE-his/pETtac28-pglL/pACYC184-O157用抗O157多抗和抗His-tag单抗进行Western印迹检测,在相对分子质量(40～60)×103处均产生特异的梯状条带。结论在大肠杆菌中重建的O-糖基化修饰系统可以利用自身的O16型O多糖或异源的O157型O多糖修饰菌毛蛋白PilE,获得多糖-蛋白结合物。本研究为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗提供了技术基础。
- 徐敏锐孙鹏张部昌刘波吴军
- 关键词：PILE大肠杆菌
- 内标法和外标法在测定己酸菌发酵液己酸含量中的应用被引量：2
- 2016年
- 采用气相色谱内标法和外标法测定己酸菌发酵液的己酸含量,并进行比较分析。结果表明,内、外标法的定量方法在线性范围内呈线性关系,可决系数R2>0.99,且具有良好的精密度和稳定性,RSD<5%。两种方法均满足己酸发酵液中己酸检测的要求,但内标法的R2、精密度和稳定性方面均优于外标法,外标法在样品处理和进样中操作要求更高。将内、外标法应用于己酸菌发酵液中己酸含量的检测,经F检验和t检验,两种方法测得结果并无显著性差异。
- 杨牢记宾艳南徐敏锐陈兴杰谢国排张宝年程伟黄训端张部昌
- 关键词：己酸菌己酸内标法外标法白酒
- 窖泥己酸菌和丁酸菌联合接种发酵液有机酸检测与分析被引量：9
- 2017年
- 研究以窖泥己酸菌与丁酸菌为菌种联合接种培养,采用气相色谱仪对发酵液中有机酸含量进行定量检测,分析不同接种比例下的产酸特点,为两菌种在酿酒生产中合理利用提供依据。结果表明:不同接种比例的发酵液中的己酸、丁酸及丙酸含量均呈现先增加后降低的变化规律、乙酸含量则呈现不断增加趋势,其中己酸和丁酸积累量在9天时均达到峰值;将己酸菌、丁酸菌按配比1∶1联合接种发酵,第6天时菌体密度值最大,第9天时发酵液有机酸总含量最高(7.0mg/mL),四大酸己酸、丁酸、丙酸及乙酸的比例结构为:1∶0.6∶0.2∶0.3。结论:己酸菌与丁酸菌联合接种时,适宜配比1∶1,菌体生长密度高,发酵液中总有机酸度最大,丁酸、丙酸、乙酸含量高,己酸含量较高,四种有机酸比例较为协调。
- 陈兴杰吴攀攀徐敏锐彭兵程伟高佳佳李彬汪焰胜黄训端张部昌
- 关键词：己酸菌有机酸
- 病原菌多糖基因簇在大肠杆菌中的克隆
- 2014年
- 目的：构建稳定的外源病原菌多糖基因簇克隆载体，为在糖基工程大肠杆菌中利用外源性多糖O-糖基化修饰靶标蛋白奠定基础。方法：PCR扩增大肠杆菌O157、甲型副伤寒沙门菌CMCC50973和铜绿假单胞杆菌CMCC10110的O-多糖合成基因簇，将多糖基因簇与细菌人工染色体pCC1BAC连接后，分别转化O-多糖合成缺陷的大肠杆菌W3110，并用相应多糖抗血清ELISA检测重组大肠杆菌是否利用外源O-多糖生成脂多糖（LPS），从而验证外源多糖基因簇克隆载体在大肠杆菌内是否能够生成相应的O-多糖；在此基础上，将构建的3种外源多糖基因簇克隆载体分别转化表达O-寡糖转移酶和蛋白底物菌毛蛋白PilE的糖基工程大肠杆菌，用相应的抗血清进行Western印迹检测，以验证克隆的O-多糖能否修饰蛋白底物PilE。结果：与阴性对照菌相比，带有大肠杆菌O157的O-多糖合成基因簇克隆载体和带有甲型副伤寒沙门菌CMCC50973的O-多糖合成基因簇克隆载体的重组菌ELISA呈阳性，提示大肠杆菌O157和甲型副伤寒沙门菌CMCC50973的O-多糖合成基因簇在大肠杆菌中被利用生成了相应的LPS；而带有铜绿假单胞杆菌CMCC10110的O-多糖合成基因簇克隆载体的重组菌W3110/BAC-10110则ELISA呈阴性。West？ern印迹结果显示，只有带有O157型大肠杆菌O-多糖合成基因簇克隆载体的糖基工程大肠杆菌CLM24/pMMB66EH-pilE-his/pETtac28-pglL/BAC-O157在相对分子质量40×103~58×103处出现了特异条带，表明菌毛蛋白PilE被大肠杆菌O157型O-多糖O-糖基化修饰。结论：建立了大肠杆菌O157、甲型副伤寒沙门菌CMCC50973的O-多糖合成基因簇大片段的克隆载体，克隆的O157型O-多糖合成基因簇可实现O157型多糖对菌毛蛋白PilE的修饰，从而为在大肠杆菌中建立稳定的利用外源病原菌多糖修饰靶标蛋白的糖基工程大肠杆菌提供了技术基础。
- 王雯孙鹏徐敏锐徐威吴军
- 关键词：细菌人工染色体
- 浓香型酒醅发酵过程中主要酶系酶活变化规律研究被引量：2
- 2017年
- 以浓香型酒醅为材料,通过检测酒醅糖化酶、蛋白酶及酯化酶的酶活力,分析发酵过程中主要酶系酶活变化规律,为研究酿造酶学提供依据。结果表明,酒醅主要酶系在整个发酵期表现出规律性变化。酒醅糖化酶活力呈现持续下降的变化曲线,由发酵初期的高酶活到发酵期满的低酶活;酒醅蛋白酶的变化规律表现为先快速上升后下降的规律,酶活峰值出现在前期;酒醅酯化酶的变化规律是先缓慢升后平稳下降趋势,酯化酶的活性峰值点出现在中期。酒醅中淀粉酶、蛋白酶、酯化酶的规律性变化,反映了浓香型酒醅在发酵期的物质转化的内在特征,对酿酒生产具有指导意义。
- 杨牢记徐敏锐祝熙谢国排程伟施春霖李彬汪焰胜黄训端张部昌
- 关键词：酶系酶活
- 甲醇-山梨醇混合碳源诱导提高抗HER2抗体在糖基工程毕赤酵母中的表达
- 2013年
- 目的:以抗HER2抗体为模型,研究抗体在糖基工程酵母菌中的表达及工程菌发酵技术。方法:首先通过摇瓶试验分析诱导用甲醇浓度对抗体表达的影响,并用高表达HER2的SK-BR-3细胞分析抗HER2抗体的抗原结合活性。以此为基础,在5 L发酵罐中研究甲醇-山梨醇混合碳源流加诱导对抗HER2抗体表达水平的影响;收集发酵培养液,采用阳离子交换层析对目标产物进行纯化;利用SDS-PAGE、Western印迹、Lowry法对抗体的相对分子质量、浓度等进行分析。结果:摇瓶试验结果表明,甲醇浓度为0.5%时抗体表达量最高,且糖基工程毕赤酵母菌表达的抗HER2抗体具有与SK-BR-3细胞抗原结合的活性;在5 L发酵罐中,利用甲醇和山梨醇混合诱导方式发酵表达抗体,其表达量可提高至0.6 g/L,比摇瓶诱导表达的抗体产量提高了近10倍;非还原SDS-PAGE及Western印迹表明抗体相对分子质量为1.5×105,与商业化抗体Herceptin的大小一致;经过一步阳离子交换层析纯化,纯化后抗体浓度为0.365 g/L。结论:采用甲醇-山梨醇混合碳源诱导方式在5 L发酵罐中进行发酵表达,能够提高抗HER2抗体在糖基工程酵母菌中的表达量,本研究可为抗体在酵母中的规模发酵技术提供重要参考。
- 高爱荣刘波唱韶红巩新徐敏锐徐威吴军
- 关键词：毕赤酵母发酵
- 用大肠杆菌制备O157多糖-菌毛蛋白结合物的研究
- 在细菌疫苗研制领域，多糖疫苗一直以来占据了重要位置。然而，多糖作为T细胞非依赖型抗原，免疫原性较弱，对于小于2周岁的婴幼儿及有免疫性缺陷病的高危人群不能产生有效的免疫力。目前多糖疫苗的研究重点已经转向多糖-蛋白结合疫苗，...
- 徐敏锐
- 关键词：脑膜炎奈瑟球菌大肠杆菌
