沈琦
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 人黑色素瘤相关抗原Restin的克隆和表达
- 2009年
- 目的:通过对原核表达载体、表达条件和宿主菌的优化,利用原核表达系统有效表达可溶性的人Restin融合蛋白。方法:应用PCR方法扩增获得Restin编码区,克隆入原核表达载体pET44a(+),分别转化E.coli BL21(DE3)和E.coli Rosetta-gamiTM2(DE3),不同的IPTG浓度诱导表达Restin重组融合蛋白,SDS-PAGE和Western Blot分析表达产物。结果:成功构建了重组载体pET44a(+)-Restin,并在E.coli Rosetta-gamiTM2(DE3)中获得了可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的8.9%。结论:可溶性Restin融合蛋白的获得为后续的功能研究、蛋白制备及其抗体研制奠定了基础。
- 王卫华路凡沈琦
- 关键词：RESTIN原核表达重组融合蛋白
- TFR和VEGF基因双启动子调控的慢病毒载体构建及其表达研究被引量：2
- 2011年
- 目的:构建含有转铁蛋白受体(TFR)和血管内皮生长因子(VEGF)的双启动子慢病毒载体,体外转染中华小型猪骨髓间充质细胞并检测其表达。方法:PCR法分别扩增TFR和VEGF基因,分别克隆入pLenti-GFP-Neo慢病毒载体的CMV启动子和SV40启动子后,构建出双启动子调控的慢病毒表达载体pLenti-TG-VEGF。利用Lipofectin2000试剂将pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G共转染293T细胞进行慢病毒包装,72 h后收集病毒上清,感染中华小型猪骨髓间充质细胞,并通过Western blot法检测TFR和VEGF的表达情况。结果:成功构建了含有TFR和VEGF基因的双启动子慢病毒载体;包装好的慢病毒颗粒可成功感染中华小型猪骨髓间充质细胞;Western blot法检测TFR和VEGF高水平的表达。结论:成功构建了双启动子调控的慢病毒载体pLenti-TG-VEGF,并建立其慢病毒表达系统,从而为进一步探讨活体内观察移植细胞携带治疗基因的MRI基因成像应用的可行性奠定了基础。
- 魏梦绮沈琦罗颖宦怡刘莹杨勇张劲松路凡郑敏文
- 关键词：慢病毒载体转铁蛋白受体
- 高校分子生物学实验室环境保护探讨被引量：2
- 2010年
- 针对高校分子生物学实验室存在的污染问题,从废气、废水、固体废弃物及辐射这四个方面进行分析,阐明实验室污染种类和危害,提出了应从培养环保意识、健全规章制度、改进教学实验方法和完善实验室建设方面解决实验室的污染问题,并进行详细阐述。呼吁广大科研人员积极加入环保行列,为维护人类的居住环境贡献一份力量。
- 沈琦吴有盛路凡王卫华
- 关键词：分子生物学实验室环境保护
