马登旭
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
- 供职机构：浙江理工大学生命科学学院生物工程研究所更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 水稻端粒酶RNA候选序列的克隆及特征解析被引量：2
- 2013年
- 端粒酶是由端粒酶反转录酶和端粒酶RNA构成,端粒酶RNA中含有端粒合成所需的模板序列。现仅获得了拟南芥的端粒酶RNA序列。为了建立快速有效的富集植物端粒酶的方法并克隆水稻的端粒酶RNA序列,研究中使用不同浓度的PEG6000选择性的沉淀端粒酶萃取液中的杂蛋白。结果表明当PEG6000浓度为4%时,端粒酶活力最高,并可以有效降低核糖体28SrRNA和18SrRNA的干扰。从端粒酶蛋白液中提取RNA,并在其3′端连接接头,在模板区设计上游引物,PCR扩增获得一条292bp的未知片段,其中含有端粒模板序列5′-AAACCCTAA-3′。将该片段及拟南芥端粒酶RNA的转录调控区进行序列比对分析发现,两者具有类似的转录调控元件。因此,初步判定292bp的目的片段为水稻端粒酶RNA的模板下游序列。
- 马登旭杨力媛马国兴郑洁应畅刘小川
- 关键词：水稻PEG6000
- 水稻单个端粒长度定量测定及分析被引量：3
- 2013年
- 端粒是真核生物线性染色体末端的特殊结构,一定长度的端粒在维持真核生物遗传信息完整性和染色体结构稳定性中起重要作用。建立一种简单快捷定量测定水稻单个端粒绝对长度的方法对研究水稻各个染色体端粒具有积极的意义。研究将特殊接头连接到水稻染色体端粒的G-overhang末端,并利用近端粒区域的特定引物以及下游接头引物,通过PCR技术,获得所需鉴定的端粒,结合DNA凝胶电泳成像分析系统,定量检测水稻单个端粒的长度。结果显示本方法可以通过少量水稻基因组DNA有效测定单个端的粒长度。
- 马国兴马登旭杨力媛郑洁韦敬航刘小川
- 关键词：水稻PCR技术端粒长度
- 水稻端粒酶RNA模板基因序列鉴定体系的建立被引量：1
- 2013年
- 利用水稻端粒酶对端粒序列的合成作用,对模板基因序列进行定点突变,构建了pCambia1301-T突变型、pCambia1301-Y野生型载体。经农杆菌介导,选用水稻不同品种和组织,探索候选序列的鉴定体系。结果显示,不同水稻品种诱导愈伤,差异显著,其中中花11号可快速诱导愈伤,比广陆矮4诱导时间缩短一半,用成熟胚和幼胚分别诱导愈伤,无明显差异;对突变型、野生型、正常组织进行基因组DNA端粒鉴定和端粒酶活性分析,发现突变型端粒酶活性明显高于对照。这些均表明该鉴定体系完整、可靠,为端粒酶RNA模板基因序列的鉴定建立了有效的方法。
- 杨力媛郑洁马登旭马国兴刘小川
- 关键词：水稻端粒酶RNA定点突变
- 玉米端粒酶RNA模板基因候选序列的转基因鉴定体系研究
- 2013年
- 研究采用pCAMBIA 1301穿梭质粒和LBA 4404菌株,侵染不同品种玉米成熟胚诱导的愈伤组织,以构建玉米端粒酶RNA候选序列的转基因鉴定体系。构建了两个含有玉米端粒酶RNA的pCAMBIA 1301穿梭质粒,一个携带模板区正常的玉米端粒酶RNA候选序列(野生型),另一个携带模板区定点突变处理的端粒酶RNA候选序列(突变型),然后分别侵染甜玉米成熟胚诱导的愈伤组织,也同样分别侵染糯玉米成熟胚诱导的愈伤组织。结果表明:在愈伤组织培养中,甜玉米的愈伤诱导率在40%左右,而糯玉米的愈伤诱导率高达80%;在抗性筛选培养基上已成功获得抗性愈伤组织,经PCR鉴定愈伤组织基因组中分别含有正常和突变的目的片段,这表明成功构建了玉米端粒酶RNA候选序列的转基因鉴定体系,为进一步鉴定相关候选序列提供有效的技术方法。
- 郑洁杨力媛马国兴马登旭刘小川
- 关键词：甜玉米糯玉米农杆菌介导法抗性愈伤组织
- 水稻端粒酶RNA候选序列的克隆及特征研究
- 端粒酶是一种由端粒酶反转录酶(TERT)和端粒酶RNA(TER)构成的核糖核蛋白复合体，端粒酶RNA中有一段端粒合成时所需要的模板区。传统的DNA复制机制无法完成端粒序列的完整复制，随着细胞的持续分裂，端粒长度会逐渐缩短...
- 马登旭
- 关键词：水稻端粒酶RNA克隆方法转录调控机制
- 植物端粒酶活性的检测方法
- 本发明公开了一种植物端粒酶活性的检测方法，依次包括以下步骤：1)植物端粒酶初提取液制备；2)植物端粒酶的富集：每10ml初提液中加入0.9～11克经DEPC处理的PEG6000；3)蛋白含量的测定：取步骤2)所得富集上清...
- 刘小川刘红彦马登旭
- 文献传递
