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高效快速提取股骨头中总RNA的方法被引量：1: 2011年; 背景:从骨组织中有效提取总RNA是进行骨科相关实验的基础,目前所知方法的提取效果不理想。目的:探寻一种高效、快速的骨组织总RNA提取方法。方法:取健康大耳白兔股骨头迅速置于用液氮预冷过的研钵中,液氮中反复研磨至粉末状,再将其移至预冷的匀浆器内,加入Trizol,充分匀浆后4℃离心,取上清,加入氯仿离心,使RNA与细胞DNA、蛋白质及其他成分分离从而得到总RNA。另取兔股骨头,按传统方法取材后保存,无匀浆过程,传统Trizol法提取总RNA作为对照。紫外分光光度计测定RNA样品浓度、纯度及产率。甲醛变性胶电泳观察RNA的28S,18S条带是否清晰,有无降解和DNA污染。结果与结论:实验方法提取的总RNA浓度在0.80～0.90g/L,A260/A280在1.90～2.00之间,A260/A230在1.4～1.6之间,明显高于传统方法提取的RNA各指标,说明实验方法提取的总RNA纯度高,无DNA、蛋白质污染。甲醛变性胶电泳可清晰显示28S,18S两条带,大体观察其比例大约为1:1,证实RNA提取完整,没有降解。由此可见,实验方法提取的骨组织总RNA质量高,提取方法方便、快捷,可用于骨组织分子生物学研究。; 柳铭李章华陈颖王芳夏伟陈友浩潘峰; 关键词：股骨头抽提总RNA

人肿瘤坏死因子α抑制肽-抗炎酸性尾巴融合蛋白的原核表达及纯化被引量：1: 2011年; 目的:表达和纯化人肿瘤坏死因子α抑制肽-抗炎酸性尾巴融合蛋白。方法:利用PCR搭接方法及基因合成方法获得目的基因,插入带有6×His标签的原核高效可溶性表达载体pET32a中,构建重组表达质粒pET32a-T9-ac-9,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导目的基因表达;对融合蛋白进行Ni2+金属螯合柱纯化。结果:构建的重组表达质粒经PCR、内切酶鉴定及基因序列测定证实;目的蛋白在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE显示相对分子质量为22.917×103;对表达产物进行了亲和层析纯化,从上清中获得了纯度较高的人肿瘤坏死因子α抑制肽-抗炎酸性尾巴融合蛋白。结论:获得了可溶性的人肿瘤坏死因子α抑制肽-抗炎酸性尾巴融合蛋白,为其生物学功能研究奠定了基础。; 丁红梅赵强王玮刘农乐郭彦梅李慧李洁夏伟苏雪婷陈颖邵宁生高波李少华; 关键词：人肿瘤坏死因子Α 基因克隆

低氧对间充质干细胞成骨相关基因表达的影响被引量：2: 2012年; 目的:观察低氧对间充质干细胞(MSC)成骨相关基因表达的影响。方法:取第2代MSC,分别在常氧和3%氧浓度下培养,采用real-time RT-PCR检测骨桥蛋白(OPN)、核心结合因子α1(Cbfa1)、骨形态发生蛋白(BMP)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达。结果:2种氧浓度下MSC的形态无明显差异,但3%氧浓度下MSC集落形成能力增强。常氧下MSC中Cbfa1和BMP mRNA的表达高于3%氧浓度,差异有显著性(P<0.05);而OPN和VEGFmRNA的表达虽高于3%氧浓度,但差异无显著性(P>0.05)。结论:3%氧浓度对MSC的形态没有明显影响,但增强其增殖能力,抑制其成骨分化能力。; 赵强廖文柳铭夏伟丁红梅陈颖李章华; 关键词：间充质干细胞低氧成骨分化

重组人肿瘤坏死因子α抑制肽-抗炎酸性尾巴融合蛋白的生物学活性检测: 2012年; 目的:评价原核表达、纯化的6×His-硫氧还蛋白(TRX)-人肿瘤坏死因子α(TNFα)抑制肽-C端抗炎酸性尾巴融合蛋白的生物学功能。方法:在大肠杆菌中分别表达带His标签的TRX对照蛋白及TRX蛋白融合的人TNFα抑制肽-抗炎酸性尾巴融合蛋白,并对2种蛋白进行N2+金属螯合层析纯化,采用MTT法检测纯化后的蛋白及化学合成多肽抑制TNFα标准品对L929细胞的细胞毒活性。结果:与对照蛋白相比,融合蛋白人TNFα抑制肽-C端抗炎酸性尾巴及合成多肽均能拮抗TNFα标准品对L929细胞的细胞毒作用。结论:融合蛋白人TNFα抑制肽-C端抗炎酸性尾巴及合成肽均能有效拮抗TNFα的生物学作用,为今后发展抑制TNFα为主的抗炎生物药物奠定了基础。; 王玮丁红梅李慧赵强李洁夏伟苏雪婷陈颖黄皑雪高波李少华邵宁生; 关键词：人肿瘤坏死因子Α 融合蛋白细胞毒作用

体内转录的多聚腺苷酸加速外源基因mRNA的出核转运: 2012年; 目的:探索体内转录的短多聚腺苷酸[poly(A)]对外源基因mRNA的表达及出核转运的影响。方法:构建依赖于H1启动子体内转录的poly(A)载体,用脂质体转染方法将其与外源绿色荧光蛋白(GFP)基因表达质粒导入MCF-7细胞,采用qPCR和Western印迹分别检测GFP在mRNA和蛋白水平的表达情况,并通过体外实验检测体内转录的poly(A)对GFP mRNA的加尾影响;采用qPCR法考察16种内源基因的mRNA水平;将其与p53表达质粒共转染MCF-7细胞后,采用MTT法检测细胞增殖情况。结果:在MCF-7细胞中,依赖于H1启动子转录的poly(A)能够加速外源GFP mRNA的poly(A)加尾,促进其从细胞核向细胞质输出,从而提高12 h内GFP的表达量,对内源基因mRNA水平没有影响;它还能加速外源p53基因的表达。结论:建立了通过体内转录poly(A)从而加速外源基因表达的策略,可能对基因治疗或快速研究某个特异基因的功能具有重要的应用价值。; 陈颖刘舒云夏伟李少华丁红梅王玮李慧苏雪婷黄皑雪李洁邵宁生; 关键词：外源基因

miR-30a和miR-30b靶向GW182的生物学功能研究被引量：3: 2013年; 目的:通过证明miR-30a、miR-30b靶向GW182,探索HeLa细胞中miR-30a、miR-30b及GW182的生物学功能。方法:生物信息学预测分析表明GW182的3'UTR区存在4个保守的miR-30a、miR-30b靶位点,将含有靶位点的序列片段构建到萤光素酶报告载体中,检测miR-30a、miR-30b与靶位点的结合情况;用阳离子脂质体转染GW182siRNA和miR-30a、miR-30b mimics,检测GW182下游功能的变化。结果:miR-30a、miR-30b能够靶向GW182;qPCR及Western印迹证明miR-30a、miR-30b可以在mRNA与蛋白水平上降低GW182的表达,同时影响GW182所参与的miRNA/siRNA对靶基因的抑制作用。结论:GW182是miR-30a、miR-30b的靶基因,揭示了miR-30a、miR-30b通过靶向GW182影响miRNA/siRNA作用途径的新功能。; 苏雪婷夏伟陈颖李少华丁红梅李慧黄皑雪赵强李洁邵宁生; 关键词：靶点

miR-138靶向RMND5A及其生物学功能初步研究: miRNA为一类非编码小RNA，约22nt的单链核苷酸，能够通过转录后调控抑制靶基因的表达，进而参与各种生命活动。在细胞核中，miRNA最初由RNA聚合酶Ⅱ或Ⅲ转录生成原初转录物pri-miRNA，然后由核糖核酸酶Ⅲ D...; 陈颖; 关键词：微小RNA 靶基因外源基因; 文献传递网络资源链接

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陈颖