李少华
- 作品数：74 被引量：101H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SELEX技术及Aptamer研究的新进展被引量：26
- 2006年
- 综述了近几年指数富集的配体系统进化(SELEX)技术的改良与寡核苷酸配基(aptamer)研究应用方面的新进展.Aptamer是指利用SELEX(systematicevolutionofligandsbyexponentialenrichment)技术,从随机寡核苷酸文库中筛选获得的能够与靶分子特异结合的短单链寡核苷酸配基,通常具有纳摩尔到皮摩尔的亲和力.高通量筛选的技术特点与aptamer精确识别、易体外合成与修饰等特性,使得aptamer在分析化学与生物医药研究方面具有广阔的应用前景.
- 邵宁生李少华黄燕苹
- 关键词：高通量筛选
- 一种基于mRNA质核比变化的miRNA靶基因鉴定方法和应用
- 本发明属于生物技术领域，涉及一种基于mRNA质核比变化的miRNA靶基因快速、准确鉴定方法；涉及该方法在生物医学领域中的应用。本发明通过以下技术方案实现：首先通过现有的miRNA靶标预测生物信息学软件，如Targetsc...
- 邵宁生李洁黄宝春夏伟陈留存李少华苏雪婷王芳丁红梅
- 文献传递
- 一种特异识别Vasorin(VASN)蛋白的寡核苷酸配基V4-2的序列和应用
- 本发明公开了属于分子生物医学技术领域的一种特异识别Vasorin(VASN)蛋白的寡核苷酸配基V4-2的序列和应用。本发明设计V4-2特异性的序列，采用5’端或3’端修饰、标记(如FITC、生物素或者地高辛)的方法检测V...
- 邵宁生李少华李慧王玮丁红梅李洁黄皑雪赵强
- 人vasorin蛋白的基因克隆、表达及纯化被引量：3
- 2014年
- 目的:克隆、表达人vasorin(VASN)蛋白。方法:利用PCR方法从HepG2细胞的cDNA中扩增获得目的基因,并插入带有6×His标签的原核高效可溶性表达载体pET28a中,构建重组表达质粒pET28a-VASN,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后目的基因获得表达,对融合目的蛋白进行Ni2+金属螯合柱纯化。结果:内切酶鉴定及基因序列测定证实重组表达质粒构建成功;对目的蛋白进行了原核表达,SDS-PAGE显示相对分子质量为61×103的特异表达条带;Western印迹证实目的蛋白为VASN,且主要以包涵体形式存在;对经尿素变性的表达产物进行了亲和层析纯化,有利于以后的变性、复性过程。结论:获得了人VASN融合蛋白,为其进一步的生物学功能研究奠定了基础。
- 丁红梅赵强王玮李慧刘农乐李洁苏雪婷黄皑雪房涛李少华邵宁生
- 关键词：原核表达纯化
- H1299细胞中miR-138的功能性靶标动态变化与mRNA核／质比一致性研究
- 2013年
- 目的确定miRNA功能性靶基因的动态变化与mRNA核／质比的一致性。方法利用质／核比基因表达谱芯片和实时荧光定量PCR技术．研究转染miR-138的H1299细胞饥饿不同时间后生物信息学预测的miR-138靶基因变化与其相应基因核／质比的关系。结果H1299细胞中miR-138的功能性靶标动态变化规律与mRNA核／质比一致性较好。结论miRNA的功能性靶标是随着细胞的状态不同而发生动态变化。
- 苏雪婷夏伟李少华丁红梅赵强李慧黄皑雪秦性良侯绿滨房涛李洁邵宁生
- 关键词：MICRORNAMIR
- RAP结合肽-hFcγ1融合蛋白的表达与初步活性鉴定
- 2004年
- 目的 :将肽库筛选到的正调控金黄色葡萄球菌 (金葡菌 )外毒素分泌的关键分子RAP(RNAⅢactivatingpro tein)的结合肽与人IgG1抗体Fc片段 (hFcγ1)融合表达 ,检测其干扰金葡菌外分泌毒素产生的活性。方法 :根据噬菌体肽库筛选到的RAP结合肽序列 ,选用大肠杆菌偏爱的密码子合成基因片段 ,将其融合在人IgG1抗体Fc片段基因序列的 5′端 ,构建pET rapbp fc融合表达载体 ,转化大肠杆菌并诱导表达。以包涵体形式存在的目的蛋白经变性、复性后 ,ELISA实验分别证实其与抗人IgG抗体及纯化RAP的结合活性。以MDBK细胞株为模型 ,MTT实验观察融合蛋白对金葡菌 196菌株外分泌毒素水平的影响。结果与结论 :融合基因在大肠杆菌中获得表达。复性后 ,融合蛋白的Fc片段及结合肽部分分别能够与抗人IgG抗体及RAP结合 ,且能在一定程度上降低金葡菌 196株上清中的毒素水平。
- 李少华杨光李洁丁红梅柳川沈倍奋邵宁生
- 关键词：RAP结合肽融合蛋白毒素
- 人肿瘤坏死因子α特异性结合miR-146b的新生物学特性研究
- 2016年
- 目的:探讨人肿瘤坏死因子α(TNF-α)作为micro RNA(mi RNA)结合蛋白的生物学特性。方法:Western印迹检测LPS激活的U937细胞中TNF-α蛋白表达水平,RT-PCR检测几种炎症相关的mi RNA在激活前后表达水平的变化;用RNA结合蛋白免疫共沉淀(RIP)技术钓取U937细胞中TNF-α结合的mi RNA,RT-PCR检测RIP产物中上述几种mi RNA的含量;用凝胶阻滞实验检测TNF-α与mi RNA是否直接结合。结果:LPS激活的U937细胞中能检测到膜结合型和可溶性2种形式的TNF-α,细胞激活前后mi R-16和mi R-21的表达水平在检测的几种mi RNA中最高,mi R-146b和mi R155次之;而RIP产物中mi R-146b的水平在实验组和对照组中有显著差异,其他mi RNA差异不明显;凝胶阻滞实验结果显示mi R-146b能与人TNF-α直接结合。结论:首次证实人TNF-α能够直接特异地结合mi R-146b,提示TNF-α可能作为mi RNA结合蛋白发挥生物学功能。
- 沈雪莲李洁黄皑雪王超男孙乐桥李少华丁红梅李慧郭晓华郑伟董洁邵宁生
- 关键词：人肿瘤坏死因子ΑMICRORNARNA结合蛋白
- 一种特异识别异质性核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)的寡核苷酸适配体C6‑8的序列和应用
- 本发明公开了属于分子生物医学技术领域的一种特异识别异质性核糖核蛋白A2／B1(hnRNPA2／B1)的寡核苷酸适配体C6‑8的序列和应用。通过针对多种肿瘤细胞的SELEX技术获得了单链DNA寡核苷酸适配体C6‑8，标记F...
- 邵宁生李慧李少华黄皑雪丁红梅李洁苏雪婷赵强
- 文献传递
- 特异识别肿瘤细胞的寡核苷酸配基BC15的应用
- 本发明属于生物技术领域，涉及特异识别上皮源性肿瘤细胞的寡核苷酸配基BC15的序列和应用。通过针对癌组织切片的SELEX技术获得了BC15单链DNA寡核苷酸配基，标记FITC后，经荧光染色证明该配基能够特异识别多种上皮源性...
- 李少华邵宁生丁红梅黄艳萍徐华曹晓晓王芳沈倍奋
- 文献传递
- 临床膀胱癌组织中miRNA的差异表达研究被引量：5
- 2010年
- 目的寻找并鉴定在膀胱癌及癌旁组织中差异表达的微RNA(miRNA)。方法结合miRNA芯片技术寻找膀胱癌及癌旁组织中差异表达的miRNA,并通过荧光定量PCR进行验证。结果在癌与癌旁组织中共检测到115条存在显著性差异的miRNA,其中膀胱癌组织中下调42条,上调73条。结论膀胱癌组织与癌旁组织中miRNA表达谱存在较大差异,miRNA与膀胱癌的发生发展存在一定的相关性。
- 夏伟宋涛李洁黄宝春李少华丁红梅王天有邵宁生
- 关键词：膀胱肿瘤微RNA聚合酶链反应
