李新艳
- 作品数：12 被引量：12H指数：2
- 供职机构：复旦大学附属华山医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划上海市基础研究重大（重点）项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 一种新乙型肝炎病毒表型耐药分析方法的建立
- 2014年
- 目的 建立一种新的、简便的HBV表型耐药分析方法,通过置换完整的反转录酶（RT）区研究药物敏感性.方法 首先全基因扩增未经核苷（酸）类似物治疗患者的HBV DNA,构建含HBV野毒株全基因组表达质粒PHY536207（B基因型）及PHY97（C基因型）,继而在RT区上、下游设计限制酶切位点,改造后的质粒分别命名为mPHY536207及mPHY97.以CHB患者血清中分离到的拉米夫定（LAM）耐药变异株和阿德福韦酯（ADV）耐药变异株为骨架,分别构建LAM耐药株质粒PHY634和ADV耐药株质粒PHY6923,再用耐药株的RT区段取代mPHY536207中的RT区构建重组质粒,命名为RT634（LAM耐药）及RT6923（ADV耐药）.分别用RT区置换前、后的质粒转染Huh7细胞,用ELISA法检测分泌到细胞上清液中的HBsAg水平,用实时PCR和Southern印迹法检测细胞内HBVDNA水平.结果 成功构建B型和C型野毒株表达质粒PHY536207和PHY97,经转染Huh7细胞证实有HBV复制能力,6孔细胞培养板中每孔细胞所抽提的HBV DNA均＞1＆#215;107拷贝/mL;在RT区上游设计的Pst Ⅰ酶切位点不影响HBV的表型（HBsAg的表达及HBV DNA的复制）.在PHY634及RT634转染实验中,HBV DNA水平却并未随LAM浓度的升高而明显下降,50％抑制浓度（IC50）＞100 μmol/L,mPHY536207仅为0.18 μmol/L;PHY6923及RT6923转染实验中,HBV DNA对外加的ADV不敏感,IC50＞100 μmol/L,明显高于mPHY536207（1.2 μmol/L）.结论 本研究建立了一种新的HBV表型耐药分析方法,可通过RT区置换来研究RT区变异对药物敏感性的影响.
- 李新艳陈良马张妹毛日成黄玉仙张继明
- 关键词：抗药性表型
- 肝移植后丙型肝炎复发的防治
- 2007年
- 虽然肝移植为慢性丙型肝炎所致的终末期肝脏疾病患者带来了曙光,但是移植后丙型肝炎的复发极为常见,本文对肝移植后复发性丙型肝炎的自然史、影响因素、预防措施及治疗作一介绍。
- 李新艳尹有宽张继明
- 关键词：丙型肝炎复发
- 地摊羊肉串带来的戊肝
- 2008年
- 前段时间，小王突然出现发热、全身乏力、食欲不振、恶心、呕吐等症状，自己吃了点退热和止吐药后症状略有好转，小王也就没当回事。谁知，一周以后，小王发现自己小便颜色跟平常不一样，呈深黄色，而且眼睛也变黄了，于是急忙去医院诊治。化验显示，小王的转氨酶比正常升高，总胆红素也升高，被诊断为“急性黄疸型肝炎”，遂住院。进一步检查发现，血清病毒学检测结果仅抗HEV IgM阳性，其他肝炎病毒检测均阴性，于是小王被确谈为“急性戊型肝炎”。经过一个多月的治疗，小王康复出院。医生了解到，小王在患病前，曾在地摊上吃过羊肉串，当时肉有点生，但因味香并未太在意。
- 李新艳尹有宽
- 关键词：羊肉串急性黄疸型肝炎戊肝急性戊型肝炎血清病毒学IGM阳性
- 乙肝病毒阿德福韦耐药变异株的检测探针及其应用方法
- 本发明属医学领域，涉及乙肝病毒阿德福韦耐药变异株的检测探针及其应用方法。本发明的乙肝病毒阿德福韦耐药变异株的检测探针，是SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO 9、SE...
- 张继明刘红艳李义良毛日成尹永喜夏佳慧范丽丽李新艳
- 文献传递
- 乙肝病毒拉米夫定耐药变异株的检测探针及其应用方法
- 本发明属医学领域，涉及乙肝病毒拉米夫定耐药变异株的检测探针及其应用方法。本发明的乙肝病毒拉米夫定耐药变异株的检测探针，是SEQ ID NO12、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15...
- 张继明刘红艳李义良毛日成尹永喜夏佳慧范丽丽李新艳
- 文献传递
- 应用滚环扩增技术检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的研究被引量：5
- 2010年
- 目的 应用滚环扩增（RCA）技术检测HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）,观察该方法的特异性和敏感性.方法 以HBV全基因质粒为模板,经酶切、连接、浓缩、胶回收纯化等步骤,构建和制备HBV cccDNA标准品.抽提7例慢性乙型肝炎患者肝组织总DNA,进行滚环扩增.用HBV cccDNA标准品、3.2 kb线性HBV DNA、健康肝组织总DNA及15例慢性乙型肝炎患者血清总DNA作为对照,验证此方法的特异性.将HBV cccDNA标准品进行系列稀释,了解该方法的敏感性.结果 成功构建了HBV cccDNA,并可用RCA方法进行扩增.RCA方法可从2 mg的慢性乙型肝炎患者肝组织中检测到HBV cccDNA,并可检测低至1×102拷贝/μL的HBV cccDNA.RCA方法不能检测3.2 kb线性HBV DNA,在健康肝组织及15例慢性乙型肝炎患者血清中亦检测不到HBV cccDNA.结论 RCA方法操作较方便,具有很高的特异性和敏感性.
- 赵旭刘红艳李新艳秦艳丽邬祥惠翁心华佘会元张继明
- 高复制性阿德福韦耐药及PreS1缺失变异株部分生物学特性研究
- 目的：由临床发现的耐药患者血清构建含其HBV 基因的体外复制质粒，进行行序列分析、并研究临床特殊变异株的部分生物学特性。方法：将临床上一名接受拉米夫定、阿德福韦序贯治疗产生病毒学突破且HBV 高载量的患者血清，抽提HBV...
- 汪婷秦艳丽李新艳毛日成赵卫峰张继明
- 关键词：阿德福韦酯耐药HBV复制
- 慢性丙型肝炎患者获得快速病毒学应答的预测因素分析被引量：2
- 2014年
- 目的：探讨联合应用聚乙二醇干扰素（PEG－IFN）和利巴韦林治疗的慢性丙型肝炎（CHC）患者获得快速病毒学应答（RVR）的预测因素。方法采用回顾性队列研究方法，对上海市公共卫生临床中心肝病科2010－2012年收治的127例接受PEG－IFN联合利巴韦林治疗的CHC患者进行分析，根据抗病毒治疗4周后是否获得RVR，将研究对象分为RVR组和无快速病毒学应答（NRVR）组，比较两组人口学特征及治疗前的临床特征，分析影响CHC患者获得RVR的可能因素。计数资料采用卡方检验，影响因素的分析采用两个独立样本的非参数检验即Mann－Whitney U检验，独立预测因素采用单因素及多因素Logistic回归分析，预测因素中的连续变量作ROC曲线分析。结果127例患者中，男86例，女41例，其中明确诊断为肝硬化的11例。127例中100例（78．74％）获得RVR，NRVR患者27例（21．26％）。非参数分析显示，对于患者年龄、感染时间、基线ALT水平、基线HA水平、是否合并高血压病、干扰素种类、感染途径、病毒基因型这些因素，RVR组和NRVR组差异均有统计学意义（P值均＜0．05）。Logistic回归分析显示，感染时间、是否合并高血压、HCV基因型是能否获得RVR的独立预测因子，非基因1型在RVR的OR值为0．203（95％CI：0．051～0．802， P＜0．05），感染时间在RVR的OR值为0．925（95％CI：0．868～0．987，P＜0．05），不合并高血压在RVR的OR值为0．129（95％CI：0.032～0．521，P＜0．05）。结论感染时间较短、不合并高血压病、非基因1型的患者可能更易获得RVR。
- 张丹丹叶佩燕黄玉仙徐国光张毅李新艳陈良
- 关键词：病毒学应答
- 应用PCR-RFLP技术检测乙型肝炎病毒变异rtI233V
- 2009年
- 目的建立一种应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术检测乙型肝炎病毒(HBV)变异rtI233V的方法。方法参照GenBank收录的HBV基因逆转录(RT)区序列设计PCR引物,根据HBVRT区rt233位野生型和变异型的序列,分别选择Bst1107I和Bsp1407I两种内切酶。以rtI233V变异株及野毒株质粒为模板进行PCR扩增,PCR产物分别用Bst1107I和Bsp1407I两种限制性内切酶进行酶切,观察酶切产物琼脂糖凝胶电泳条带变化。并以变异型和野生型质粒的不同配比,分析该检测方法的敏感性。结果本研究建立的PCR-RFLP方法可同时检测野毒株和rtI233V变异株。PCR扩增后,野毒株和rtI233V变异株的PCR产物长度均为255bp。以Bst1107I酶切,野毒株质粒的PCR产物可以切成75bp和180bp两段,rtI233V变异株PCR产物的长度保持不变。以Bsp1407I酶切,rtI233V变异株质粒的PCR产物可以切成75bp和180bp两段,野毒株质粒的PCR产物长度保持不变,测序结果与上述结果一致。敏感性检测表明,此方法至少可检出标本中10%的变异株。应用此方法检测100例慢性乙型肝炎患者,筛选出2例rtI233V变异患者。结论应用PCR-RFLP方法可检测rtI233V变异,具有较高的敏感性,可用于HBV变异rtI233V的早期诊断。
- 郭红英李新艳毛日成尹有宽张继明
- 关键词：乙型肝炎病毒聚合酶链式反应限制性片段长度多态性
- 应用液相芯片技术检测拉米夫定耐药相关性HBV变异被引量：1
- 2009年
- 目的建立一种检测拉米夫定（LAM）耐药相关性HBV变异的检测系统。方法从血清样本中提取病毒DNA，经纯化后，与生物素标记的引物经过PCR扩增后，来自HBV开放阅读框架的、被生物素标记的DNA扩增产物与偶联在微球上的特异性寡核苷酸探针杂交，未能结合微球的DNA被洗脱，加入标记有链亲素修饰的藻红蛋白（SAPE），在Luminex分析仪上，用双色激光分别激发微球的红色荧光（定性）和SAPE的绿色荧光（定量），从而判断靶基因的突变类型和相对含量。采用液相芯片（muhi-analyte suspension array，MASA）技术构建有LAM相关耐药的HBV全基因质粒和25例LAM耐药的慢性乙型肝炎患者（CHB）的HBV逆转录区（RT）第180和204位氨基酸的变异情况；并与普通测序法相比较，以了解该方法的特异性；同时将变异株和野毒株按不同比例混合后检测，以了解该方法的敏感性。结果MASA可同时检测a180和n204氨基酸变异，并能准确判断变异的类型及混合变异；MASA对25例LAM耐药的CHB患者相关耐药，检测发现有15份患者标本中20411探针杂交信号明显升高（测序变异阴性和阳性荧光值中位数分别为5和106），有11份样本与204V探针杂交信号较高（测序变异阴性和阳性荧光值中位数分别为9和114）差异有统计学意义（z=-4．588，P〈0．05；z=-4．520，P〈0．05）；有2份发现2种探针杂交信号均很高，即有YIDD和YVDD混合变异株存在；仅有1份标本与20412探针杂交信号明显较高。同样用该方法检测20份未治疗患者的血清标本，均未发现LAM相关性变异。当病毒群中含有大于5％的LAM耐药相关HBV变异株时，即可被本方法检测到。结论MASA可用于LAM相关耐药变异株的早期检测。该方法较普通测序法灵敏，且操作简便、高通量、需要时间短，便于临床大样本检测的应用。
- 刘红艳毛日成李义良夏佳慧范丽丽尹永喜李新艳赵旭郭红英朱浩翔张继明
- 关键词：拉米夫定芯片分析技术
