万瑛
- 作品数：104 被引量：382H指数：10
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术文化科学更多>>
- SARS病毒基因组所编码的E蛋白的二级结构和B细胞表位预测被引量：58
- 2003年
- 目的 预测SARS病毒E蛋白的B细胞表位和二级结构。方法 以SARS病毒基因组序列为基础 ,采用Gar nier Robson方法、Chou Fasman方法和Karplus Schultz方法预测E蛋白质的二级结构 ;用Kyte Doolittle方案预测蛋白质的亲水性 ;用Emini方案预测蛋白质的表面可能性 ;用Jameson Wolf方案预测氨基酸的抗原性指数。综合评判 ,预测SARS病毒E蛋白的B细胞表位。结果 在SARS病毒E蛋白N 端的第 1～ 6、13～ 19、39～ 4 3、4 7～ 6 4区段和第 73～ 76区段有 β 折叠中心 ;第 6～ 12区段和第 6 7～ 6 9区段可能形成转角或无规则卷曲 ,是柔性区域。E蛋白N端第 2～ 13区段和第 6 1～ 74区段为B细胞优势表位区域。结论 用多参数预测SARS病毒E蛋白的二级结构和B细胞表位 。
- 吕燕波万瑛吴玉章
- 关键词：SARS病毒E蛋白B细胞表位严重急性呼吸综合征
- β2M-绿色荧光蛋白在MHC-Ⅰ肽亲和力实验中的应用被引量：2
- 2009年
- 目的构建并表达β2微球蛋白-绿色荧光蛋白融合蛋白,并应用该蛋白建立一种全新的MHC-Ⅰ肽亲和力实验方法。方法构建β2M-ZsGreen-6×His标签的融合蛋白真核表达质粒,转染293FT细胞表达,并以镍亲和层析法纯化,将该融合蛋白与表位肽共同与T2细胞反应,通过流式细胞术检测T2细胞标记绿色荧光的情况鉴定表位。结果构建了β2微球蛋白-绿色荧光蛋白真核表达质粒并表达、纯化得到融合蛋白,该蛋白可应用于亲和力实验,进行表位鉴定。结论β2微球蛋白-绿色荧光融合蛋白应用于亲和力实验鉴定CTL表位方法可行,步骤简便,适用于大通量表位鉴定。
- 熊锐华王昊亮邹丽云李景怡张晋宇张荣华万瑛
- 关键词：绿色荧光蛋白融合蛋白T细胞表位
- 噬菌体呈现疫苗诱导乙型肝炎病毒特异性细胞毒性T细胞反应被引量：1
- 2000年
- 目的 研究噬菌体呈现颗粒作为亚单位疫苗是否能在体诱导乙型肝炎特异性细胞毒性T细胞反应。方法 构建呈现MHCI类分子 (H 2 d)限制性表位HBs2 8～ 39的噬菌体颗粒 ,小剂量、无佐剂接种BALB/c(H 2 d)小鼠。结果 重组噬菌体呈现颗粒在体诱导H 2 d 限制的HBs2 8～ 39特异性细胞毒性T细胞反应。结论 丝状噬菌体呈现疫苗有效诱导细胞毒性T细胞反应 。
- 万瑛吴玉章边疆王祥智周伟贾正才唐燕周丽芸
- 关键词：丝状噬菌体CTL表位
- Rab4蛋白参与DC细胞内源性抗原递呈被引量：4
- 2007年
- 目的建立稳定表达卵白蛋白的DC细胞株DC-OVA,研究Rab蛋白对DC内源抗原递呈的影响。方法首先构建含OVA蛋白基因慢病毒表达质粒pLentimycOVA;以DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT细胞制备慢病毒,用病毒感染DC2.4细胞及杀稻瘟毒素(Blasticidin)筛选方法建立稳定表达OVA的细胞株,Western blot鉴定DC-OVA细胞中OVA蛋白表达;然后用识别MHC I类分子-OVA肽复合物的T细胞杂交瘤B3Z细胞以及针对该复合物的单抗25D1.16检测DC-OVA细胞表面MHC-OVA肽复合物的形成情况,建立内源性抗原呈递的检测方法;最后采用脂质体法转染化学合成的Rab4、Rab5A、Rab7、Rab11的siRNA于DC-OVA中,B3Z检测DC内源抗原递呈的变化。结果酶切和测序分析证实转移质粒克隆成功,Western blot可在DC-OVA细胞中检测到OVA蛋白,B3Z细胞和25D1.16单抗可检测到DC-OVA细胞表面存在MHC I类分子-OVA表位多肽复合物,表明内源性抗原呈递系统成功建立。在此基础上,发现下调DC细胞中Rab4蛋白的表达,DC-OVA细胞刺激B3Z生成IL-2(白细胞介素2)的量明显下降。结论成功构建了OVA蛋白的慢病毒表达载体,获得了表达内源OVA蛋白的DC细胞株,建立了内源性抗原呈递系统,初步证实下调Rab4蛋白可抑制DC细胞的内源性抗原递呈,为病毒感染和肿瘤等疾病的治疗奠定了基础。
- 柴琳琳万瑛邹丽云张晋宇李娜刘婷李景怡吴玉章
- 关键词：OVA内源抗原递呈
- 噬菌体呈现颗粒疫苗诱导抗肿瘤细胞毒性T细胞反应被引量：1
- 2000年
- 目的 构建呈现肿瘤相关抗原P815A的噬菌体颗粒 ,在体诱导针对肥大细胞瘤P815的特异性细胞毒性T细胞 (CTL)反应。方法 构建呈现CTL表位P1A35～ 4 3 的噬菌粒载体 ,大量制备呈现此表位的重组噬菌体颗粒 ,小剂量、无佐剂皮下免疫DBA/2小鼠 (H 2 d) ,采用51Cr释放法、ELISPOT观察针对肥大细胞瘤P815的CTL反应。结果 重组噬菌体呈现颗粒疫苗在体诱导了针对弱抗原P815A的CTL反应。结论 丝状噬菌体呈现疫苗增强肿瘤相关抗原的免疫原性 。
- 万瑛吴玉章边疆赵建平王祥智周伟周丽芸唐燕贾正才
- 关键词：肿瘤丝状噬菌体免疫治疗CTL
- 小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原P1A的克隆与表达被引量：5
- 2000年
- 目的 克隆小鼠肥大细胞瘤P815细胞株的P1A基因以制备肿瘤DNA疫苗。方法 用RT PCR方法制备P1A基因 ,以哺乳细胞高效表达质粒pCI neo为载体 ,构建重组DNA疫苗。重组体用克隆位点上游和下游的T7和T3启动子序列为测序引物 ,用自动测序仪测序鉴定克隆的正确性。再将鉴定过的重组质粒用磷酸钙法转化 2 93细胞 ,用RT PCR法鉴定转化细胞中P1A基因的表达。结果 正确构建了P1A/pCI neo重组质粒 ,并且在转化此质粒的 2 93细胞中检测出了P1A的表达。结论 成功地构建了重组P1A/pCI neo肿瘤疫苗 。
- 倪兵吴玉章唐艳邹丽云万瑛赵建平
- 关键词：RT-PCR肥大细胞瘤克隆DNA疫苗
- 含CpG寡聚脱氧核苷酸对肿瘤抗原肽P815AB的免疫佐剂效应研究被引量：11
- 2000年
- 目的 以肿瘤抗原P815AB抗原肽为模式抗原 ,研究CpG寡聚脱氧核苷酸 (CpGODN)对该肿瘤抗原表位肽的免疫佐剂效应。方法 用 [3H ] TdR掺入法研究CpGODN体外刺激小鼠脾细胞增殖效应 ,用ELISPOT和 [3H] TdR释放法检测不同构成形式的疫苗在体诱发特异性CTL应答的效应。结果 ODN182 6在体外可刺激小鼠脾细胞显著增殖。经 4次免疫 ,在“肽 +ODN182 6 +IFA”组中 ,4/6的小鼠体内出现了特异性CTL应答 ;在“肽 +ODN182 6 +PBS”组 ,有 3只小鼠在完成 4次免疫前先后死亡 ,余 3只中有 1只体内也可检测到相应CTL反应 ;而对照“肽 +IFA”组 ,6只小鼠体内均未诱发出特异性CTL应答。结论 CpGODN对P815AB表位肽有较为理想的免疫佐剂效应 ,但疫苗构成形式对其免疫效果有着决定性的作用 ,“肽 +ODN182 6 +IFA”是本研究中最有效的疫苗形式 。
- 赵建平吴玉章万瑛贾正才周伟邹丽云刘月明
- 关键词：CPG寡聚脱氧核苷酸肿瘤抗原肽
- 特异性细胞毒性T细胞活化的研究进展被引量：2
- 2000年
- 万瑛吴玉章
- 关键词：CTL活化抗原递呈
- 小鼠肝素酶H-2Kb限制性CTL表位的实验鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的实验鉴定H-2Kb限制性小鼠肝素酶(mHpa)CTL表位。方法5条mHpa表位分别负载C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞,并进一步诱导产生表位特异性的效应细胞,采用标准4 h51Cr释放试验检测效应细胞对不同靶细胞的免疫杀伤效应;采用ELISPOT检测效应细胞分泌IFN-γ的能力。结果5条mHpa CTL表位中,仅mHpa398-405和mHpa519-526可以诱导小鼠产生特异性CTL,对同来源的B16黑色素瘤细胞、Lewis肺癌细胞和EL-4淋巴瘤细胞具有明显的免疫杀伤效应,而对H-2Kb阴性的P815肥大细胞瘤细胞不具有免疫杀伤效应,进一步研究发现,上述多肽特异性CTL对自体淋巴细胞和DC细胞不具有杀伤效应,另一方面,mHpa398-405和mHpa519-526还可促进效应细胞分泌IFN-γ的能力。结论mH-pa398-405、mHpa519-526为小鼠肝素酶来源且受H-2Kb限制性CTL表位,小鼠体内可以诱导产生表位特异性的CTL反应。
- 汤旭东万瑛房殿春陈陵熊震余松涛师红磊郭军杨仕明
- 关键词：肝素酶抗原表位肿瘤疫苗细胞毒T淋巴细胞
- 树突状细胞中Rab40b/c相互作用蛋白质的鉴定研究
- 2016年
- 目的改进串联亲和纯化质谱(TAP-MS)技术,鉴定并验证Rab40b和Rab40c在树突状细胞中的相互作用蛋白质。方法用分子克隆技术构建融合蛋白基因e Xact-6×His-EYFP-Rab40b和e Xact-6×His-EYFP-Rab40c的表达载体,采用慢病毒感染建立融合蛋白e Xact-6×His-EYFP-Rab40b和e Xact-6×His-EYFP-Rab40c稳定表达的树突状细胞系。改进串联亲和纯化技术,通过e Xact-6×His标签进行新型串联亲和纯化和q TOF液质检测,运用Comp PASS算法过滤和GO富集分析,鉴定Rab40b和Rab40c的相互作用蛋白,并采用免疫共沉淀验证。结果成功构建e Xact-6×His-EYFP-Rab40b和e Xact-6×His-EYFP-Rab40c融合蛋白稳定表达的树突状细胞系。采用新型串联亲和纯化方法,鉴定获得26个Rab40b高可信相互作用蛋白和16个Rab40c高可信相互作用蛋白。Rab40b、Rab40c分别与Elongin B、Elongin C、Cullin5具有相互作用。结论成功建立新型串联亲和纯化方法。Elongin B、Elongin C、Cullin5是Rab40b、Rab40c的相互作用蛋白。
- 张立群李园园万瑛
- 关键词：串联亲和纯化
