王艳娇
- 作品数：10 被引量：25H指数：3
- 供职机构：西南大学更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 柑橘脉突病毒实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立与应用被引量：16
- 2016年
- 为了快速、灵敏地检测柑橘脉突病毒(Citrus vein enation virus,CVEV),通过设计特异性引物(EVq F4/EVq R4),优化反应条件,建立了CVEV的实时荧光定量RT-PCR检测体系。该方法特异性良好;检测灵敏度比常规RT-PCR高100倍;标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数为0.992,扩增效率101.8%;检测组内和组间变异系数均小于2.85%,重复性较好。利用所建立的实时荧光定量方法对柑橘植株进行检测发现,‘代代酸橙’和‘象山红’植株中CVEV分布不均匀,其中根部病毒滴度最高,分别为162.52和45.32拷贝·ng^(-1) RNA,皮及叶部病毒滴度相对较低。
- 王艳娇崔甜甜黄爱军陈洪明李中安周常勇宋震
- 关键词：实时荧光定量RT-PCR
- 柑橘黄化脉明病毒基因组的长链RT-PCR扩增、克隆及序列分析被引量：3
- 2017年
- 为了建立柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)基因组长链RT-PCR扩增体系,构建其全长cDNA克隆,为深入了解CYVCV分子特性及其致病机理奠定基础。根据GenBank中CYVCV基因组序列和5′RACE扩增结果设计引物。以感染CYVCV的代代酸橙(Citrus aurantium‘Daidai’)植株总RNA为模板进行长链RT-PCR扩增,得到CYVCV全基因组cDNA,克隆至pGEM-Teasy载体,并进行序列测定与分析。结果显示,建立了一步扩增CYVCV全基因组的长链RT-PCR方法,扩增出约7.5 kb的目标片段;所获得的4个CYVCV全基因组cDNA序列与GenBank中已登录的相关毒株的核苷酸序列同源性为93%~99%。
- 崔甜甜王艳娇宾羽李中安周常勇宋震
- 关键词：全长CDNA
- 柑橘脉突病毒基因组全长cDNA克隆及其侵染性鉴定被引量：1
- 2020年
- 【目的】构建柑橘脉突病毒(citrus vein enation virus,CVEV)侵染性克隆,为从分子水平解析其致病机理打下基础。【方法】利用SMARTer®RACE(rapid amplification of cDNA ends)试剂盒对CVEV的5′序列进行RACE,并依据序列分析结果及CVEV分离株VE-1保守序列,设计CVEV基因组全长cDNA扩增引物。以CVEV毒源植株的总RNA为模板,通过EV25-F/EV5983-R引物扩增CVEV基因组全长cDNA。利用In-Fusion重组连接线性化pXT1和CVEV全长cDNA。通过菌液PCR及测序分析鉴定CVEV基因组全长cDNA克隆。通过农杆菌介导的真空浸润接种摩洛哥酸橙(Citrus aurantium)、邓肯葡萄柚(C.paradisi)、尤力克柠檬(C.limon)、枳柚(C.paradisi×Poncirus trifoliata)、Rusk枳橙(P.trifoliata×C.sinensis)、枣阳小叶枳(P.trifoliata),进一步通过RT-PCR检测、症状观察鉴定所构建CVEV全长cDNA克隆的侵染性。【结果】建立了CVEV的基因组全长RT-PCR扩增体系,获得基于双元载体pXT1的CVEV基因组全长cDNA克隆10个。随机选取的6个全长cDNA克隆CVEV1901—CVEV1906的序列一致性为99.35%。其中,CVEV1901基因组全长5983 nt,由5个开放阅读框、5′端207 nt和3′端198 nt的两个非翻译区、以及ORF2和ORF3之间122 nt的基因间隔区组成。序列分析结果显示,CVEV1901与浙江分离株XZG及四川SM分离株的序列一致性分别为99.98%和99.11%;与西班牙VE-1分离株、美国加州VE701分离株和日本IBK分离株基因组序列一致性在96.89%—98.61%;与同属中豌豆耳突花叶病毒(pea enation mosaic virus)和紫花苜蓿耳突病毒(alfalfa enamovirus)的序列一致性约90%。通过农杆菌介导的真空浸润将CVEV1901接种至6个不同的柑橘品种,接种后120 d的RT-PCR检测结果表明摩洛哥酸橙、邓肯葡萄柚、尤力克柠檬、枳柚、Rusk枳橙和枣阳小叶枳阳性植株/接种植株(阳性率)分别为16/17(94.12%)、12/14(85.71%)、16/21(76.19%)、15/19(78.95%)、13/14(92.86%)和0/18(0)。其中,部分摩洛哥酸橙出�
- 许建建王艳娇段玉马志敏宾羽周常勇宋震
- 关键词：侵染性克隆
- 一种快速鉴定柑橘脉突病毒侵染植株的方法
- 本发明提供一种快速鉴定柑橘脉突病毒侵染植株的方法，包括如下步骤：（1）取待测植株根部，提取总RNA；（2）以提取的总RNA为模板，利用柑橘脉突病毒的特异性下游引物EVqR4进行逆转录反应，获得cDNA；（3）以步骤（2）...
- 宋震王艳娇崔甜甜陈洪明李中安周常勇
- 文献传递
- 一种快速鉴定柑橘脉突病毒侵染植株的方法
- 本发明提供一种快速鉴定柑橘脉突病毒侵染植株的方法，包括如下步骤：（1）取待测植株根部，提取总RNA；（2）以提取的总RNA为模板，利用柑橘脉突病毒的特异性下游引物EVqR4进行逆转录反应，获得cDNA；（3）以步骤（2）...
- 宋震王艳娇崔甜甜陈洪明李中安周常勇
- 文献传递
- 柑橘黄化脉明病毒的TGB基因生物信息学分析及亚细胞定位被引量：3
- 2017年
- 柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)是一种正义单链RNA病毒。其基因组含有6个开放阅读框(ORF),其中ORF2、ORF3和ORF4组成了三基因连锁结构(triple gene block,TGB)。以感染CYVCV的尤力克柠檬[Citrus limon(L.)Burm.f.]植株的总RNA为模板,扩增和克隆了CYVCV的TGB基因,并开展了其编码蛋白的理化性质和分子特性等生物信息学分析;进而通过In-Fusion~?技术构建了TGB各基因的亚细胞定位载体,经农杆菌介导转化洋葱表皮细胞并在荧光显微镜下进行亚细胞定位观察。生物信息学分析结果表明,CYVCV-TGB具有与Potexvirus属病毒TGB相似的理化性质和分子特性,可能参与病毒在寄主中的运动且需要外壳蛋白的参与。亚细胞定位结果显示,TGBp1定位于细胞壁(膜)上,TGBp2和TGBp3主要定位于细胞壁(膜),少量呈星点状定位于细胞内。研究结果为揭示CYVCV在寄主中的运动机理奠定了基础。
- 崔甜甜王艳娇李中安周常勇宋震
- 关键词：柑橘亚细胞定位
- 柑橘黄化脉明病毒一步法RT-qPCR检测体系的建立及应用被引量：3
- 2017年
- 柑橘黄脉病是由柑橘黄化脉明病毒（Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV）引起的一种新发病害,对柑橘产业尤其是柠檬产业危害较重。我国于2009年首次在云南省瑞丽市发现该病,四川、重庆、江西等省市也陆续发现并呈快速传播趋势。
- 宋震刘科宏陈洪明王艳娇李中安周常勇
- 关键词：脉明柑橘产业酶联免疫吸附法CITRUS
- 柑橘脉突病毒基因沉默抑制子鉴定
- 柑橘脉突病毒(Citrus vein enation virus,CVEV)是一种世界范围内分布较广的柑橘病毒,主要引起柑橘脉突病及木瘤病.植物病毒通过抑制寄主的RNA 沉默反应从而达到侵染寄主的目的.为初步筛选鉴定CV...
- 王艳娇崔甜甜宋震
- 柑橘脉突病毒侵染性克隆构建及其基因沉默抑制子鉴定
- 柑橘脉突病毒（Citrus vein enation virus，CVEV）是黄矮病毒科（Luteoviridae）豌豆耳突花叶病毒属（Enamovirus）的一种正义单链RNA病毒，引起柑橘脉突病及木瘤病。目前，CVE...
- 王艳娇
- 关键词：侵染性克隆分子生物学致病机理
- 文献传递
- CYVCV-TGB基因的生物信息学分析及亚细胞定位研究
- 柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)是印度柑橘病毒属(Mandarivirus)的一种正义单链RNA病毒,其基因组含有6个开放阅读框(ORF)。其中,ORF2...
- 崔甜甜王艳娇李中安周常勇宋震
- 关键词：生物信息学分析
- 文献传递
