张锦前
- 作品数：78 被引量：222H指数：9
- 供职机构：广东省第二人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养项目艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 丙型肝炎病毒感染与脂肪性肝病被引量：5
- 2009年
- HCV除引起肝脏损害外，还与肝细胞癌（HCC）以及某些肝外组织的损害表现密切相关。大量研究报道，HCV慢性感染与2型糖尿病、脂肪肝等代谢性疾病的发生、发展密切相关。肝脏脂肪变性是慢性丙型肝炎（chronic hepatitis C，CHC）的发病机制之一，CHC合并脂肪肝和糖尿病有着极高的发病率，提示CHC也是。种代谢性疾病。HCV与代谢综合征（metabolism syndrome，MS）密切相关，肝脏脂肪变性及胰岛素抵抗可能是HCV引发MS的中心环节，其分子生物学机制是病毒导致脂代谢紊乱。
- 成军张锦前
- 关键词：肝疾病脂肪肝代谢综合征
- NS5 ATP9抑制血清饥饿诱导的HepG2细胞凋亡被引量：2
- 2012年
- 目的探讨HCV NS5A反式激活基因NS5ATP9对肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的影响。方法将NS5ATP9基因表达质粒、NS5ATP9干扰RNA质粒及各自的对照空质粒转染到HepG2细胞中,48h后换无血清培养基培养24h诱导细胞凋亡,采用实时荧光定量PCR验证转染后NS5ATP9mRNA表达水平的变化,采用Annexin V/7-AAD流式细胞术检测细胞凋亡情况,JC-1检测线粒体膜电位,Western blot检测Bax蛋白表达,综合观察NS5ATP9对HepG2细胞血清饥饿诱导凋亡的影响。结果 Annexin V/7-AAD检测结果显示,和对照组细胞相比NS5ATP9过表达组早期凋亡和总凋亡率显著减少(P<0.05);而NS5ATP9干扰RNA组细胞的早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡率均显著增加(P<0.05)。JC-1检测结果显示,和对照组相比NS5ATP9过表达组细胞线粒体膜电位保持正常形式的比例增加,而出现去极化电位形式的比例显著减少(P<0.05);而NS5ATP9干扰RNA组线粒体膜电位保持正常形式的比例显著减少(P<0.05)。Western blot检测结果显示,NS5ATP9干扰RNA组促凋亡分子Bax表达量显著升高(P<0.05),NS5ATP9过表达组Bax表达量则有下降趋势。结论 NS5ATP9基因抑制血清饥饿诱导的HepG2细胞凋亡,其机制可能是通过线粒体途径实现。
- 赵崇山刘顺爱王琦张锦前赵龙凤成军
- 关键词：细胞凋亡线粒体
- 糖尿病对肝硬化患者伴发细菌性自发性腹膜炎
- 目的:探讨是否存在糖尿病对肝硬化合并SBP(spontaneous Bacterial Peritonitis,细菌性自发性腹膜炎)患者的影响。方法:以我院2000年至2004年收治确诊肝硬化的病人共504例为观察对象;...
- 张锦前范小玲
- 文献传递
- 人类肝脏cDNA文库的构建及hHGF基因的筛选、克隆与表达被引量：2
- 2006年
- 目的构建人类肝脏的cDNA文库,从中筛选hHGF基因并进行克隆与表达。方法从人类胎儿肝脏中快速分离提取出mRNA;将已提取出的mRNA构建成cDNA文库;从中筛选出hHGF(hepatocyte growth factor)基因后,进行克隆并测序确定;构建表达质粒pBV221-hHGF后转化大肠杆菌BL21(DE3α),以异丙基硫代-B-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,收集菌体后提取蛋白样品并对其进行SDS-PAGE电泳及蛋白免疫印迹检测。结果成功地构建了人类肝脏的cDNA文库;经筛选得到约2200bp的hHGF基因;对其进行测序确认;成功地构建该基因的表达型质粒,并对表达蛋白进行蛋白免疫印迹检测,检测出其表达产生的蛋白质相对分子量在100000左右。结论人类肝脏cDNA文库成功地构建后可用于筛选获取完整的cDNA基因,从中筛选、克隆hHGF基因,并测序确认,进行表达蛋白质检测,结果正确,以上工作为进一步深入地进行与人类肝脏cDNA文库及hHGF相关的实验研究奠定了一定的基础。
- 张锦前牛俊奇王峰
- 人胰腺细胞cDNA文库中丙型肝炎病毒NS4B结合蛋白基因的筛选被引量：4
- 2011年
- 目的从人胰腺细胞cDNA文库中,采用酵母双杂交方法筛选HCV NS4B包膜蛋白的相互作用蛋白。方法人胰腺细胞cDNA文库先进行扩增,随后纯化及鉴定,然后将鉴定好的人胰腺细胞cDNA文库质粒转化入酵母菌株Y187。构建pGBKT7-NS4B作为诱饵质粒,随之转化酵母菌株AH109,用色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)筛选阳性菌落。配合两种重组酵母菌株AH109与Y187,用四缺培养基及X-α-gal筛选蓝色酵母菌落,提取相应质粒,电转化感受态菌DH5α后再提取质粒,测序仪测序,结果使用PUBMED进行序列比对。结果成功构建pGBKT7-HCV NS4B重组质粒,并从人胰腺cDNA文库中筛选出7种与HCV NS4B蛋白相结合的蛋白基因,包括CDK5RAP3、辅脂肪酶、胰石蛋白、凝乳蛋白、弹性蛋白酶2A、糜蛋白酶和胆盐刺激酯酶。结论 HCV NS4B蛋白可能通过与所筛选出前述蛋白中参与代谢过程的相关蛋白结合,影响糖、脂类代谢过程。
- 温少芳张锦前孙荣华李卓高萍王琦刘顺爱成军
- 关键词：肝炎病毒属基因文库载体蛋白质类双杂交系统技术NS4B
- HBV相关糖基转移酶Glt25D2的核苷酸单糖结合活性分析被引量：2
- 2011年
- 目的体外克隆表达人类糖基转移酶Glt25D2,利用Biacore分析系统对其活化单糖及钙离子结合活性进行分析。方法构建Glt25D2原核表达载体pET32a-Glt25D2,转化大肠埃希菌BL21,克隆表达糖基转移酶Glt25D2。离心集菌,制备蛋白样品,进行SDS-PAGE电泳分析;融合蛋白线性梯度洗脱,Ni-NTA柱纯化,后做Western blot鉴定。用纯化后的Glt25D2融合蛋白包被CM5芯片,分别用不同浓度的活性单糖及钙离子灌注芯片,利用Biacore生物分子相互作用分析仪分析Glt25D2的活化单糖及钙离子结合活性。结果体外成功表达人类糖基转移酶Glt25D2融合蛋白。Biacore分析显示,该糖基转移酶与400、200、100、50μg/ml唾液酸的结合活性分别为108、71、50和20 RU,与200、100、50、0μg/ml钙离子的结合活性分别为37、20、10和0 RU。结论人类糖基转移酶Glt25D2重组蛋白具有较强的钙离子及唾液酸结合活性。
- 董芳张锦前肖凡朱新宇成军魏红山
- 关键词：糖基转移酶原核表达
- HBV pre-X转染HepG2细胞后差异表达基因的筛选被引量：2
- 2008年
- 目的:检测HBV pre-X在真核表达载体pcDNA3.1-myc-his-HBV pre-X转染的HepG2细胞中的表达,并筛选其中的代谢相关差异表达基因.方法:将构建的真核表达载体pcDNA3.1-myc-his-HBV pre-X转染HepG2细胞后蛋白免疫印迹检测;将pcDNA3.1-myc-his-HBV pre-X和pcDNA3.1-myc-his载体分别转染HepG2细胞后,提取mRNA后逆转录为cDNA,运用基因表达谱芯片技术分析差异表达基因.结果:构建的真核表达载体经ApaⅠ、BstⅪ双酶切鉴定,转染HepG2细胞后HBV pre-X表达经蛋白免疫印迹证实;经基因表达谱芯片分析发现,其中基因表达水平显著上调和下调的分别是200个和62个.结论:筛选HBV pre-X转染HepG2细胞后的代谢相关差异表达基因,从而为乙型肝炎病毒合并糖尿病、脂肪肝等代谢性疾病的分子生物学机制的研究提供了重要依据.
- 柴艳云张锦前赵龙凤王琪成军
- 关键词：HEPG2细胞基因芯片差异表达基因
- HBsAg结合胰腺细胞蛋白基因的酵母双杂交技术筛选被引量：1
- 2009年
- 目的应用酵母双杂交技术筛选胰腺细胞cDNA文库中与HBsAg相互作用的结合蛋白的基因。方法扩增人胰腺cDNA文库并纯化鉴定,将其转入酵母菌Y187;诱饵质粒PGBKT7-HBSAg转入酵母菌AH109。将以上二者进行配合,在SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade和X-α-Gal培养基上进行双重菌落筛选;提取阳性质粒转化大肠埃希菌DH5α并测序,在GenBank中进行生物信息学分析。结果获得了6个与HBsAg相结合的蛋白,包括顺乌头酸酶、CDK5RAP3、羧肽酶B1、胰脂肪酶、辅脂肪酶、弹性蛋白酶。结论筛选出的胰腺细胞蛋白与2型糖尿病等代谢性疾病有较密切关系,为进一步研究并阐明乙肝病毒(HBV)感染引发糖脂代谢紊乱机制提供了新的思路。
- 王晓春张锦前张晨宇成军王琦李朝品
- 关键词：基因HBSAG酵母双杂交
- 人肝细胞生长因子真核表达载体的构建及在COS_7细胞中的表达
- 2007年
- 目的：构建人肝细胞生长因子（HGF）的真核表达载体,并在COS7细胞中进行表达。方法：利用PCR技术扩增HGF基因,与PCI-Neo载体连接,构建成重组真核表达载体PCI-neo-HGF,应用限制性内切酶法及测序方法进行鉴定。利用脂质体将PCI-HGF转入COS7细胞系中,用ELISA法检测培养液上清中的HGF的表达水平。结果：重组真核表达载体PCI-neo-HGF经限制性内切酶分析,片段与理论值相符,测序结果与GenBank对比,HGFcDNA序列同源性99%,插入正确;将重组真核表达载体PCI-neo-HGF转染COS7细胞,于转染12 h开始有表达,36-72 h表达量较高（约2000 ng·L^-1）,以后逐渐下降。结论：成功构建了带有HGF基因真核表达载体,并能在转染细胞中表达。
- 李玉香王峰牛俊奇闫红青张锦前姜艳芳
- 关键词：肝细胞生长因子基因表达COS细胞
- SIRT1基因敲低增强HepG2细胞对单壁碳纳米角的敏感性
- 2017年
- 目的:探讨SIRT1基因敲低增强HepG2细胞对单壁碳纳米角(Single-Walled Carbon Nanohorns,SWNHs)的敏感性。方法:通过在HepG2细胞中建立过表达和敲低SIRT1的细胞株,流式细胞检测不同SIRT1表达水平对HepG2细胞周期的影响;采用不同浓度SWNHs对HepG2细胞进行处理,CCK-8法评估HepG2细胞对SWNHs的敏感性;采用Western blotting探索SIRT1影响HepG2细胞凋亡的机制。结果:获得低表达si-SIRT1和高表达p LV-SIRT1细胞株,发现si-SIRT1组细胞周期阻滞,并且有(14.94±1.22)%细胞出现凋亡,HepG2组和p LV-SIRT1组细胞凋亡率分别为(5.43±0.34)%和(4.49±0.34)%,si-SIRT1组与之相比,差异具有统计学意义(P<0.05);SIRT1基因敲低增强HepG2细胞对SWNHs的敏感性,低表达si-SIRT1组的数据显示,低浓度SWNHs10在24 h后si-SIRT1-HepG2细胞的活性下降到(43.22±2.21)%,而最大剂量SWNHs40在48 h后si-SIRT1-HepG2细胞的活性下降到(2.02±0.13)%,与对照组(HepG2组)相比差异具有统计学意义(P<0.05);通过Western-blotting验证,si-SIRT1组的P53表达增高,其相关下游凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-7也出现高表达。结论:通过敲低SIRT1后HepG2细胞周期阻滞,对SWNHs的敏感性显著增强,SWNHs有望成为一种有效的生物治疗肝癌的新方法。
- 贺轲黄睿夏正林段小鹏何景亮李伯伟张锦前向国安
- 关键词：SIRT1HEPG2
