吴婷
- 作品数：12 被引量：38H指数：4
- 供职机构：南方医科大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 以hURAT1为靶点的排尿酸药物体外细胞筛选模型的建立和应用被引量：7
- 2016年
- 人尿酸盐阴离子转运体1(human urate anion transporter 1,hURAT1)是人肾小管重吸收尿酸的主要转运蛋白,以hURAT1为靶点,筛选hURAT1抑制剂是近年来降尿酸药物开发的热点,因此建立hURAT1抑制剂体外细胞筛选模型具有重要的意义与实用价值。本实验首先构建了表达SLC22A1 2(hURAT1编码基因)的慢病毒载体,感染MDCK细胞后,通过G41 8筛选出稳转细胞株(稳转株);随后采用W estern-blot及免疫荧光方法检测目的蛋白的表达,并通过液闪计数仪检测hURAT1稳转株对[^(14)C]尿酸的摄取作用及hURAT1抑制剂苯溴马隆、丙磺舒对[^(14)C]尿酸摄取的抑制效果。实验结果显示,hURAT1稳转株目的蛋白表达量为对照稳转株的两倍,并且吸收尿酸的量明显大于对照细胞(P>0.001)。此外,实验中测得hURAT1稳转株对尿酸吸收的Km值为365.4μmol/L,苯溴马隆及丙磺舒对尿酸吸收的IC_(50)分别为0.1 8μmol/L和66.82μmol/L。以上结果表明,本实验成功构建了稳定表达hURAT1的MDCK细胞株,并建立了一套hURAT1抑制剂体外准确筛选和评价的方法体系。
- 陈嘉盛吴婷丘玉昌曹莹庞建新
- 关键词：尿酸慢病毒载体抑制剂
- 橄榄果汁冻干粉的降尿酸与抗痛风作用被引量：4
- 2021年
- 采用高尿酸血症大鼠与痛风性关节炎大鼠模型,考察橄榄果汁冻干粉(Hidrox;12%)的降尿酸与抗痛风作用及机制。通过腹腔注射氧嗪酸钾(Potassium oxazinate,PO)建立高尿酸血症大鼠动物模型,灌胃相应药物,检测血清尿酸(Uric Acid,UA)、肌酐(Creatinine,CR)、尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)含量和血清与肝脏黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase, XOD)活性水平,检测肾皮质尿酸转运蛋白1(Recombinant Urate Transporter 1,URAT1)表达水平。通过给大鼠踝关节腔注射尿酸钠晶体(Monosodium Urate,MSU)建立痛风性关节炎大鼠模型,评价橄榄果汁冻干粉对痛风性关节炎大鼠关节肿胀、血清肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)与白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)水平的影响。通过UPLC-ESI-MS/MS法分离与鉴定降尿酸的有效成分。结果显示,与模型组相比,橄榄果汁冻干粉(80 mg/kg)能极显著降低大鼠血清尿酸水平(P<0.01),极显著改善高尿酸导致的血清CR与BUN升高(P<0.01)。橄榄果汁冻干粉降尿酸的机制可能与其降低血清和肝脏XOD活性、下调URAT1表达等有关。在痛风性关节炎模型中,橄榄果汁冻干粉(80 mg/kg)能高度显著改善MSU导致的关节肿胀(P<0.001),显著降低血清TNF-α与IL-1β水平(P<0.05)。进一步研究发现,橄榄果汁冻干粉成分中胡椒碱与木犀草素能有效抑制HEK-293T细胞URAT1的尿酸转运,可能是其降尿酸的活性成分。综上,橄榄果汁冻干粉能有效降低腹腔注射PO导致的高尿酸血症大鼠的尿酸水平,改善大鼠踝关节注射MSU晶体引起的痛风关节炎症状,其机制可能是降低肝脏XOD活性、下调URAT1表达以及改善炎症水平。
- 张炳森赵泽安李咏梅李璐蓝群盛庞建新吴婷
- 关键词：高尿酸血症痛风黄嘌呤氧化酶
- 木犀草素通过抑制URAT1与调节Nrf2/HO-1通路改善尿酸诱导的肾脏损伤被引量：1
- 2022年
- 为了探讨木犀草素改善尿酸性肾病(hyperuricemic nephropathy,HN)的可能机制,通过14C尿酸摄取实验测定木犀草素对尿酸转运体1(uric acid transporter 1,URAT1)尿酸转运活性的影响;采用MTT法评价木犀草素对高尿酸诱导的小鼠肾小管上皮细胞损伤的保护作用;采用氧嗪酸钾联合腺嘌呤制备小鼠HN模型,测定血清尿酸、肌酐(creatinine,CR)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)与谷胱甘肽(glutathione,GSH)的水平;借助H&E染色与Masson染色分别观察小鼠肾组织的病理学变化与纤维化情况;通过qRT-PCR检测肾脏URAT1、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、E-cadherin、核因子E2-相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的mRNA表达水平;通过蛋白质免疫印迹法检测肾脏URAT1、Nrf2和HO-1的蛋白质表达水平。^(14)C尿酸摄取实验结果显示,木犀草素能剂量依赖性地抑制URAT1转运14C尿酸,其IC50值为23.42μmol/L;MTT实验结果显示,木犀草素能明显改善高尿酸诱导的细胞损伤;体内实验中,与模型组相比,木犀草素能降低模型小鼠血清尿酸、CR、BUN水平,下调肾脏URAT1的mRNA与蛋白质表达水平,并通过影响TGF-β、α-SMA、E-cadherin改善肾脏纤维化,通过上调Nrf2/HO-1通路降低肾脏氧化应激水平。总之,木犀草素可通过抑制URAT1降低血清尿酸,并通过Nrf2/HO-1通路依赖的抗氧化应激反应显著改善肾损伤和纤维化。
- 严采馨田锦鸿李璐庞建新吴婷
- 关键词：木犀草素肾脏保护
- 黄芩素对慢性高尿酸小鼠模型心肾功能的影响研究被引量：2
- 2022年
- 高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)是心脏和肾脏疾病发生与发展的重要危险因素,降尿酸治疗是应对HUA的首要处理方案。课题组前期发现,天然产物黄芩素(baicalein,BAL)具有降尿酸作用。本研究使用氧嗪酸钾联合次黄嘌呤构建持续8周的慢性HUA小鼠模型,考察BAL对心脏和肾脏的影响,实验过程中使用别嘌醇(allopurinol,AP)作为阳性对照药物。结果显示,BAL可以改善HUA下的心肌肥厚、心肌细胞排列紊乱及心肌间质纤维化等现象,其趋势与AP一致;BAL无法改善HUA造成的肾功能下降,以及肾小球基膜增厚、肾小管扩张等现象,与AP相悖。综上所述,BAL在慢性HUA下对心脏具有保护作用,而对肾脏作用不显著。本研究为BAL在HUA合并心肾疾病的研究提供了有效信息。
- 杨阳严采馨林翠婷黄清华张乐琦郑强吴婷吴婷
- 稳定表达ABCG2细胞模型的建立及其在筛选ABCG2抑制剂中的应用被引量：1
- 2022年
- 本研究构建了一种稳定表达ATP结合盒转运蛋白2(ATPbinding cassette subfamilyGmember 2,ABCG2)并可用于筛选ABCG2抑制剂的细胞模型。首先,利用脂质体lipo3000将表达载体pcDNA3.1(+)-ABCG2转染至HEK293细胞,经G418筛选阳性克隆株后,采用qRT-PCR与Western-blot方法进行ABCG2稳转细胞株(稳转株)的鉴定;随后,利用差速离心法提取膜囊泡,通过14C-尿酸同位素摄取实验筛选ABCG2抑制剂。结果表明,ABCG2稳转株的mRNA及蛋白质表达水平分别为野生型的1717.5倍和2.64倍;经其提取的囊泡摄取14C-尿酸的能力为对照囊泡的3.73倍。利用上述工具细胞,研究评价了临床常用的降尿酸药物对ABCG2的抑制活性。结果显示,苯溴马隆抑制ABCG2的IC50值为(3.45±1.09)μmol/L,RDEA3170抑制ABCG2的IC50为(9.90±2.11)μmol/L。综上所述,本实验成功构建了ABCG2抑制剂体外筛选模型,并首次发现RDEA3170具有ABCG2抑制作用。
- 郑凤欣赵泽安林雪曼吴婷庞建新
- 关键词：转运体
- 不同方法建立长期慢性高尿酸血症模型及对相关并发症影响的研究进展被引量：5
- 2022年
- 高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)在人类中具有较高的发病率,且其与痛风性关节炎、Ⅱ型糖尿病、心血管疾病以及肝肾功能损伤等多种疾病的进程密切相关。实验动物研究显示,HUA相关并发症需要长期稳定的诱导过程。与人类不同的是,常用模式动物具有较高的尿酸酶表达,可迅速将尿酸分解成可溶性尿囊素排泄出体外,该特点易造成造模期间高尿酸日均暴露时间不足。因此,HUA相关并发症的观察对实验模型在模式动物、诱导方式、高尿酸暴露时间等方面均有较高的要求。本文对HUA动物模型造模方法以及不同造模方法对慢性并发症的影响进行综述,重点从主流药物造模方法的优劣分析、模式动物的选择、基因干预造模3个方面展开,为HUA长期并发症研究的造模方法选择提供参考依据。
- 张乐琦林翠婷黄清华吴婷杨阳
- 关键词：造模并发症
- HCN通道稳定细胞系的功能鉴定
- 目的:超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(HCN)参与心脏起搏,疼痛,癫痫等生理病理活动.在人类的窦房结(SAN),HCN4是HCN家族的中最丰富的亚型,而且自2003年起,对HCN4基因几个失去功能的突变体的研究表明,H...
- 陈淑君曹莹吴婷黎海欣庞建新周平正
- 大麦叶粉防治高尿酸血症及肾脏保护作用研究被引量：7
- 2020年
- 为探究大麦叶粉(BLP)对氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠的降尿酸作用与肾脏保护作用及其作用机制,本研究通过腹腔注射氧嗪酸钾制备高尿酸血症小鼠模型,测定BLP对模型小鼠血清、尿液及粪便中的尿酸(UA)、血清肌酐(CR)及尿素氮(BUN)、血清与肝脏黄嘌呤氧化酶(XOD)肝脏活性的影响,观察HE染色后小鼠肾脏组织的病理学变化,检测各组小鼠尿酸转运蛋白mRNA的表达水平,以评估BLP的降尿酸作用与肾脏保护作用及其机制。结果显示,与模型组相比,200 mg/kg BLP能高度显著降低其血清UA水平(P<0.001),高度显著促进UA从尿液排出(P<0.001),极显著促进UA从粪便排出(P<0.01),同时高度显著降低血清与肝脏XOD活性、降低肝脏UA的生成(P<0.001)。此外,与模型组相比,200 mg/kg BLP能极显著降低高尿酸导致的血清CR水平升高(P<0.01),高度显著下调BUN水平(P<0.001),病理学分析结果也显示BLP能明显改善高尿酸导致的肾脏损伤。qRT-PCR实验结果显示,与模型组相比,200 mg/kg BLP可高度显著(P<0.001)下调肾脏尿酸重吸收蛋白URAT1、GLUT9,上调尿酸分泌蛋白OAT1的mRNA表达水平。综上,BLP的降尿酸和肾脏保护作用与其抑制XOD活性,下调URAT1、GLUT9,上调OAT1表达有关。
- 吴婷赵泽安陈演瑜李咏梅徐赫笛高尚庞建新
- 关键词：高尿酸血症黄嘌呤氧化酶肾脏保护
- 有机阴离子转运体1抑制剂筛选模型的构建及应用被引量：4
- 2017年
- 目的建立能稳定表达有机阴离子转运体1(organic anion transporter,OAT1)的马丁达比狗肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞转基因细胞模型,利用该模型初步筛选OAT1的抑制剂。方法采用脂质体转染法将质粒pcDNA3.1(+)通过Lipofectamine^(TM)2000转染试剂转染MDCK细胞,并经G418筛选获得阳性克隆。通过OAT1的经典底物6-羧基荧光素(6-carboxyfluorescein,6-CFL)在单克隆细胞内的积聚量以及中药单体存在时细胞内的积聚量来检测OAT1的活性。实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-tinle PCR)检测OAT1的mRNA的表达量。利用稳定细胞株,研究了6-CFL在MDCK-mock和MDCK-OAT1细胞中的摄取、中药单体对6-CFL摄取的抑制特性。结果 qRT-PCR结果表明,所建立的MDCK-OAT1细胞与mock细胞相比,OAT1 mRNA相对表达量为后者的4 862倍,摄取6-CFL的能力为后者的14.9倍。6-CFL在细胞株中摄取的K_m值为42.36μmol·L^(-1),部分中药单体能显著抑制MDCK-OAT1转运6-CFL的能力。结论 OAT1抑制剂筛选模型构建成功,并能快速有效地筛选出对OAT1有潜在抑制作用的中药单体,为后期的基于OAT1的植物-药物相互作用提供实验基础。
- 吴婷陈嘉盛黎海欣曹莹周平正庞建新
- 关键词：中药单体
- 我国仿制药人体生物等效性临床试验研究室建设的现状与发展路径被引量：11
- 2016年
- 我国开展仿制药一致性评价最主要的困难之一是临床试验资源不足,解决办法是考虑将生物等效性临床试验资格认定调整为备案管理。因此,对备案的医疗机构建设生物等效性试验研究室是一个潜在的挑战。文章分析了国内当前具备生物等效性/Ⅰ期临床资质的机构、分布、承担项目能力及生物等效性临床试验机构、药物分析实验室和合同研究组织之间的关系等,对仿制药生物等效性临床试验研究室的建设内容和规模展开讨论,供业内及监管部门参考。
- 庞建新吴婷许重远刘叔文
- 关键词：仿制药
