刘秀雯
- 作品数：6 被引量：10H指数：3
- 供职机构：江苏大学临床医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省博士后科研资助计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒介导干扰LSD1基因的卵巢癌稳转细胞株的构建及鉴定被引量：3
- 2016年
- 目的构建并鉴定慢病毒介导干扰赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)基因的卵巢癌稳转细胞株,为深入研究以LSD1为靶点的表观遗传学抗肿瘤治疗奠定基础。方法扩增并抽提所需质粒,紫外分光光度计检测质粒纯度,计算A260/A280。采用Lipofectamine 2000脂质体转染法将质粒转染入人肾上皮细胞293T,取转染THM质粒后的293T细胞,在倒置荧光显微镜下观察转染情况;分别取转染目的质粒和PLKO空载体质粒后的293T细胞,收集病毒上清液,感染人卵巢癌SKOV3细胞(分别记为观察组和对照组),筛选出稳转细胞株。观察组经浓度梯度(0、1、10、100、1 000 ng/m L)多西环素诱导,以及两组均经100 ng/m L多西环素诱导后,采用Western blotting法检测LSD1及其特异性反应底物H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量。结果目的质粒A260/A280在2.0左右,说明纯度较高;THM质粒转染293T细胞呈绿色荧光,为真核载体表达的绿色荧光蛋白,表明成功转染。随着多西环素浓度的升高,观察组诱导后LSD1蛋白相对表达量均逐渐降低,H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量逐渐升高,各浓度间比较有统计学差异(P均<0.01)。观察组经100 ng/m L多西环素诱导后LSD1蛋白相对表达量均明显低于同组诱导前及对照组诱导后,H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量明显高于同组诱导前及对照组诱导后(P均<0.01)。结论成功构建慢病毒干扰下调LSD1基因表达的卵巢癌稳转细胞株,并经不同浓度多西环素诱导鉴定;该细胞株可用于以LSD1为靶点的表观遗传学抗肿瘤治疗研究。
- 万晓蕾赖文升邵根宝李袁霞刘秀雯金洁吴朝阳
- 关键词：RNA干扰人卵巢癌SKOV3细胞
- 伤寒沙门菌Ⅵ型分泌系统对SopE表达影响的初步研究
- 2023年
- 为探索伤寒沙门菌Ⅵ型分泌系统(type 6 secretion system,T6SS)对SopE表达的影响,阐明其中的分子机制,本研究利用自杀质粒同源重组法构建携带sopE∷3×Flag的伤寒沙门菌野生株(WT-pBAD33)、T6SS功能分子缺陷株(ΔsciG-pBAD33)和回补株(C-ΔsciG),用构建成功的菌株感染巨噬细胞THP-1并在模拟巨噬细胞内环境(LPM培养基、微需氧)下培养,通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)与蛋白质印迹法(Western blot,WB)试验探索T6SS对SopE表达的影响,采用β-半乳糖苷酶活性检测来进一步验证sopE基因启动子的转录水平,Ni柱纯化T6SS功能蛋白SciG,电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)研究SciG蛋白对sopE基因启动子的调控作用。结果显示:ΔsciG-pBAD33中SopE表达水平较于WT-pBAD33明显降低;SciG蛋白不能直接与sopE基因启动子区域结合。本研究结果表明,伤寒沙门菌T6SS影响了SopE的表达,但是其功能蛋白SciG不能直接调控sopE基因的表达。
- 石书娟刘秀雯翁轶玮党娟娟李泽宇张盈黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌巨噬细胞
- 某高校职工体检血尿酸血糖血脂结果分析被引量：3
- 2016年
- 目的对来本院体检的教职工血尿酸、血糖、血脂(三酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇)和肝功能(谷丙转氨酶、谷草转氨酶)结果进行分析,为疾病的预防和制定合理科学的膳食结构提供依据。方法对2014年来本院参加职工体检的教职工,进行血尿酸、血糖、血脂和肝功能的测定,并对结果按性别、年龄进行分析。结果男、女各指标差异较大,同性别各年龄组之间也有一定的差异,特别是到中老年之后。同时这些生化指标的异常率也比较的高。结论本校职工体检的血尿酸、血糖、血脂的异常率比较高,特别是男性的血尿酸以及男女的血糖和低密度脂蛋白胆固醇的异常率很高。这些指标的异常将会大大增加代谢性疾病发生的危险。因此定期的体检是必要的,同时普及健康教育,提倡合理的膳食以及适当的运动,预防代谢性疾病的发生。
- 刘秀雯
- 关键词：血糖肝功能试验
- 伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白SopE对晚期沙门菌液泡稳定性的影响被引量：1
- 2022年
- 为探讨伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白SopE对其入侵巨噬细胞后形成的晚期沙门菌液泡(Salmonella-containing vacuole,SCV)稳定性的影响,以伤寒沙门菌GIFU10007野生株(wild type,WT)为研究对象,利用自杀质粒pGMB151介导的同源重组法构建sopE突变株(ΔsopE);以pBAD33为载体,利用质粒回补法构建ΔsopE回补株(C-ΔsopE);利用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)原核表达质粒pET28-sfGFP构建GFP表达菌株WT/pBAD33∷pET28-sfGFP、ΔsopE/pBAD33∷pET28-sfGFP和C-ΔsopE/pET28-sfGFP。通过巨噬细胞THP-1胞内生存能力实验,研究SopE对伤寒沙门菌在巨噬细胞内生存能力的影响;利用免疫荧光和实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR),探究SopE对晚期SCV稳定性的影响;进一步采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹法探究SopE与自噬的关系。结果显示,ΔsopE/pBAD33∷pET28-sfGFP菌株在巨噬细胞内的生存能力显著低于WT/pBAD33∷pET28-sfGFP和C-ΔSopE/pET28-sfGFP菌株,sopE缺失导致晚期SCV的稳定性降低,且SopE能够抑制自噬相关基因的转录和表达。以上结果提示,SopE可能通过影响自噬而调节晚期SCV的稳定性。
- 翁轶玮刘秀雯石书娟李泽宇张盈黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌自噬
- 沉默LSD1基因的表达可抑制卵巢癌HO8910细胞的增殖并诱导其凋亡被引量：3
- 2016年
- 目的 :研究赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶(1lysine-specific demethylase 1,LSD1)表达下调及其酶活性下降对人卵巢癌HO8910细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用慢病毒感染系统将携带有特异性针对LSD1基因的LSD1-shRNA重组慢病毒载体(pLKO-Tet-On-LSD1-shRNA)转入HO8910细胞,并用嘌呤霉素(puromycin)筛选LSD1-shRNA稳定转入的HO8910细胞(HO8910-LSD1-shRNA细胞);采用不同质量浓度的多西环素(doxycycline,Dox)(1、10和100 ng/m L)处理HO8910-LSD1-shRNA细胞,并用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中LSD1 mRNA和蛋白以及组蛋白(histones)H3第4位赖氨酸的二甲基化(H3K4me2)蛋白表达的变化。分别用LSD1特异性抑制剂苯环丙胺(tranylcypromine,TCP)和Dox处理HO8910细胞和HO8910-LSD1-shRNA细胞后,用MTT法和EdU染色法检测细胞的增殖情况;FCM法检测抑制LSD1活性或沉默LSD1基因表达对HO8910细胞周期及凋亡的影响;最后,采用蛋白质印迹法检测抑制LSD1活性或沉默LSD1基因表达对HO8910细胞中p21、Bax、Bcl-2和survivin蛋白表达的影响。结果:建立了稳定沉默LSD1表达的卵巢癌HO8910细胞株;LSD1表达沉默后,H3K4me2蛋白的表达水平随着Dox浓度的增加而上调;干扰LSD1基因表达或抑制LSD1的活性,均能够显著抑制HO8910细胞的增殖,并促进细胞的凋亡(P值均<0.05)。此外,LSD1活性的抑制或LSD1表达的下调均可使细胞周期阻滞在G_1期,并下调Bcl-2和survivin蛋白的表达,以及上调p21和Bax蛋白的表达。结论 :沉默人卵巢癌细胞HO8910中LSD1基因的表达能有效抑制细胞的增殖,使细胞阻滞在G_1期,促进细胞的凋亡,提示LSD1可能是卵巢癌治疗的一个新靶点。
- 刘秀雯魏野李袁霞薛晶万晓蕾金洁邵根宝
- 关键词：卵巢肿瘤细胞增殖
