金洁
- 作品数：46 被引量：183H指数：8
- 供职机构：江苏大学临床医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学哲学宗教更多>>
- 慢病毒介导干扰LSD1基因的卵巢癌稳转细胞株的构建及鉴定被引量：3
- 2016年
- 目的构建并鉴定慢病毒介导干扰赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)基因的卵巢癌稳转细胞株,为深入研究以LSD1为靶点的表观遗传学抗肿瘤治疗奠定基础。方法扩增并抽提所需质粒,紫外分光光度计检测质粒纯度,计算A260/A280。采用Lipofectamine 2000脂质体转染法将质粒转染入人肾上皮细胞293T,取转染THM质粒后的293T细胞,在倒置荧光显微镜下观察转染情况;分别取转染目的质粒和PLKO空载体质粒后的293T细胞,收集病毒上清液,感染人卵巢癌SKOV3细胞(分别记为观察组和对照组),筛选出稳转细胞株。观察组经浓度梯度(0、1、10、100、1 000 ng/m L)多西环素诱导,以及两组均经100 ng/m L多西环素诱导后,采用Western blotting法检测LSD1及其特异性反应底物H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量。结果目的质粒A260/A280在2.0左右,说明纯度较高;THM质粒转染293T细胞呈绿色荧光,为真核载体表达的绿色荧光蛋白,表明成功转染。随着多西环素浓度的升高,观察组诱导后LSD1蛋白相对表达量均逐渐降低,H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量逐渐升高,各浓度间比较有统计学差异(P均<0.01)。观察组经100 ng/m L多西环素诱导后LSD1蛋白相对表达量均明显低于同组诱导前及对照组诱导后,H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量明显高于同组诱导前及对照组诱导后(P均<0.01)。结论成功构建慢病毒干扰下调LSD1基因表达的卵巢癌稳转细胞株,并经不同浓度多西环素诱导鉴定;该细胞株可用于以LSD1为靶点的表观遗传学抗肿瘤治疗研究。
- 万晓蕾赖文升邵根宝李袁霞刘秀雯金洁吴朝阳
- 关键词：RNA干扰人卵巢癌SKOV3细胞
- PBL教学模式引入留学生医学细胞生物学教学的探讨被引量：5
- 2017年
- 针对医学留学生这个特殊的授课群体,探索更有效的教学模式,提高教学质量意义深远。文章探讨了在医学细胞生物学教学中引入基于问题的教学模式(problem-based learning,PBL)的优势、实施过程以及存在问题和对策,以提高教学质量。
- 邵根宝金洁龚爱华张柳平杜凤移彭婉昕
- 关键词：医学细胞生物学PBL教学模式留学生教育
- Tet-off诱导表达Egr-1HEK293稳定细胞株的建立和鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的:利用大肠埃希菌Tet-off诱导表达调控系统构建多西环素调控的稳定细胞株。方法:以pEGFPEgr-1质粒为模板,扩增含早期生长反应蛋白(early growth response-1,Egr-1)完整开放阅读框的DNA序列,经酶切后插入含四环素反应元件(tetracycline responsive element,TRE)序列的表达载体pTRE2hyg,获得重组质粒pTRE2hyg-Egr-1,将其转染293Tet-off细胞株,并用G418和多西环素筛选稳定表达Egr-1的细胞株。蛋白质印迹法检测多西环素诱导表达Egr-1情况;流式细胞术检测细胞增殖能力。结果:蛋白质印迹结果显示,外源性Egr-1蛋白表达受细胞培养液中多西环素调控,当从细胞培养液中去除多西环素后,Egr-1表达量明显升高。流式细胞检测结果显示Egr-1高表达细胞的增殖能力明显高于Egr-1低表达细胞。结论:利用Tet-off体系成功构建Egr-1诱导表达的细胞株,细胞的增殖能力受Egr-1表达水平的影响。
- 彭琬昕孟凡力金洁龚爱华
- 关键词：多西环素
- 医学遗传学教学中学生学习动机激发初探
- 2008年
- 现从实施启发式教学、激发学习成就感、妥善组织学习竞赛、运用多媒体课件等方面进行阐述，并结合教学实践经验探索激发学生学习动机的有效途径。
- 邵根宝金洁龚爱华张柳平
- 关键词：医学遗传学教学学习动机
- 腺病毒介导的IL-24基因抑制人脑胶质瘤细胞增殖的机制研究
- 2010年
- 目的:探讨IL-24抑制人脑胶质瘤细胞增殖的可能机制。方法:用腺病毒介导的IL-24(Ad.IL-24)及腺病毒空载体感染人脑胶质瘤细胞U251,通过荧光显微镜观察腺病毒的感染效率,RT-PCR法检测IL-24的转录水平;用MTT法、流式细胞仪检测IL-24对U251细胞增殖的影响;用蛋白质印迹方法检测神经生长因子(NGF)、酪氨酸激酶受体A(tyrosine kinase A,TrkA)的表达水平,并分析其相关性。结果:Ad.IL-24及腺病毒空载体转染U251后,RT-PCR结果显示Ad.IL-24组出现高表达电泳条带,而腺病毒空载体组则未出现电泳条带;MTT结果显示Ad.IL-24明显抑制了U251细胞的增殖,且流式细胞仪细胞周期检测发现Ad.IL-24处理组较对照组G2/M期明显延长,蛋白质印迹结果显示过表达IL-24的U251细胞中NGF及TrkA表达降低。结论:IL-24可能通过减少细胞中TrkA和NGF的表达来抑制肿瘤细胞的增殖。
- 张铁军袁志诚张严赵婷婷王青叶思思李巧玉湛利平杨勇金洁邵根宝彭琬昕龚爱华
- 关键词：白细胞介素24神经生长因子胶质瘤细胞
- 成人急性淋巴细胞白血病患者p73基因异常表达及临床意义被引量：2
- 2008年
- 目的研究p73基因在成人急性淋巴细胞性白血病(ALL)发病机制中的作用及其异常表达的临床意义。方法30例ALL患者及15例正常人骨髓样本,DNA和RNA抽提后用RT-PCR检测p73基因的表达、甲基化特异性PCR(MSP)检测p73基因第一外显子甲基化状态,并结合临床资料进行分析。结果9例(30%)ALL患者为p73基因阴性表达,且均存在甲基化,而ALL阳性表达者仅1例存在甲基化;正常对照骨髓均为阳性表达。p73基因的阴性表达与ALL患者的高年龄(≥60岁)、高白细胞数(≥30×109/L)及对治疗反应延迟(>4周取得完全缓解)有关。结论p73基因异常表达可能在成人ALL的发病机制中起一定作用,有一定的预后意义;其甲基化可能是p73基因在ALL中表达沉默的主要机制。
- 吴朝阳金洁季勇慧钱震杨小飞盛晓静张永宁钱军
- 关键词：P73基因淋巴细胞白血病
- 组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA影响U251细胞中p21稳定性的机制
- 2013年
- 目前已开发的组蛋白去乙酰化酶抑制剂如SAHA表现出了广泛的临床应用前景。然而,其作用机制有待进一步阐明。该研究旨在探明SAHA对p21蛋白稳定性的影响。运用Real-time PCR、免疫共沉淀、泛素化降解实验、免疫印迹和流式细胞技术分析了SAHA对p21 mRNA和蛋白水平、稳定性和泛素化水平的影响;并分析了SAHA通过调节GSK-3β的活性影响p21蛋白稳定性及细胞周期的进程。结果发现,SAHA不但可以上调p21 mRNA水平,还可以稳定其蛋白水平;而且SAHA通过影响GSK-3β的活性降低p21蛋白泛素化水平,从而抑制其降解,并因此改变细胞周期进程,这表明SAHA可以通过抑制GSK-3β的活性增加p21蛋白的稳定性,维持其蛋白水平从而发挥SAHA的生物学效应。该研究结果将为脑胶质瘤的临床研究提供实验依据。
- 龚爱华熊二梦张严杜凤移彭琬昕邵根宝金洁程建军
- 关键词：SAHA胶质瘤细胞P21GSK-3Β
- 江苏汉族人群FⅧ基因内微卫星DNA多态性研究及其在基因诊断中的应用被引量：3
- 2003年
- 为研究江苏地区汉族人群FⅧ基因内微卫星DNACA 13、CA 2 2的多态性 ,并探讨其在血友病甲基因诊断中的应用价值 ,我们用聚合酶链反应 (PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)的方法 ,分别检测了 86名 (131条X染色体 )和 74名 (10 9条X染色体 )江苏汉族人CA 13、CA 2 2的长度多态以及三个血友病甲家系成员这两个微卫星的长度变化。结果发现CA 13、CA 2 2分别有 7种、4种等位片段 ,多态信息量 (polymorphisminformationcontent,PIC)分别为 0 5 14 9、0 5 2 0 2。用这两个微卫星进行家系连锁分析 ,两个家系得到诊断 ,并检出一名携带者。本研究表明微卫星标记CA 13、CA 2 2具有高多态性 ,联合应用这两个微卫星 ,理论上可使家系完整的血友病甲携带者检出率及产前诊断率达 77%。
- 金洁吴朝阳刘木根
- 关键词：血友病甲微卫星DNA多态性基因诊断
- 全反式维甲酸协同DAPT抑制胶质瘤干细胞的自我更新被引量：1
- 2013年
- 前期研究脑表明,脑胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)是胶质瘤发生和发展的重要因素,探索靶向干预GSCs生长有可能成为脑胶质瘤治疗的有效途径之一。该研究旨在阐明两种药物ATRA和γ-分泌酶抑制剂DAPT协同抑制GSCs自我更新的生物学效应。通过用台盼蓝排染法、克隆球形成试验和免疫印迹分析了两种药物的单独使用或联用对GSC样细胞PGC1和PGC2生长、成球能力和自我更新以及干细胞标志物表达的影响。结果发现,单独使用ATRA对PGC1生长有一定的抑制作用,而对PGC2生长几乎没有影响;DAPT对PGCs的生长抑制作用明显强于ATRA。高浓度ATRA(80μmol/L)能诱导PGCs的分化,降低PGCs成球大小,且成球效率降至5%～8%,而正常对照组为32%～35%;同样,DAPT(40μmol/L)也能降低PGCs成球大小,且成球效率降至2%～3%;低浓度ATRA(20μmol/L)和DAPT(5μmol/L)对PGCs自我更新能力和干性没有明显影响,而联合使用后其明显降低PGCs的成球大小,且成球效率降至3%～5%,促进细胞凋亡,并且明显抑制了干细胞标志物Nestin、CD133、Sox2、Oct4的表达,提高了分化标志物GFAP的表达。该研究证明了低浓度的ATRA和DAPT能协同抑制脑胶质瘤干细胞PGCs的自我更新。研究结果将为脑胶质瘤的临床研究提供实验依据。
- 龚爱华熊二梦张严杜凤移彭琬昕邵根宝金洁程建军
- 关键词：DAPT脑胶质瘤干细胞自我更新
- 干扰Hmgb3表达对肺腺癌A549细胞增殖的影响
- 2014年
- 目的构建针对Hmgb3的shRNA诱导型慢病毒,检测诱导稳定感染细胞株干扰序列的干扰效率及其对A549细胞增殖的影响。方法设计Hmgb3及对照GFP shRNA序列,装入Tet-pLKO-puro质粒,进行慢病毒包装,感染A549细胞,嘌呤霉素筛选稳定株,筛选最佳诱导浓度并诱导干扰序列表达,Western blot检测干扰效率,MTT实验检测其对A549细胞增殖的影响。结果构建的Hmgb3shRNA慢病毒稳定细胞株诱导后可显著抑制Hmgb3的表达,干扰效率达73%(P<0.05),而对照组无明显干扰效果(P=0.721),对照组的增殖率为94%,实验组的增殖率下降为46%(P<0.05)。结论成功构建了针对Hmgb3的shRNA诱导型慢病毒,并有效沉默A549细胞靶基因,干扰Hmgb3对肺癌细胞的增殖有一定的抑制作用。
- 罗贤琴唐华容熊二梦王洁金洁邵根宝龚爱华吴朝阳
- 关键词：RNA干扰慢病毒A549细胞
