李文蓉 作品数:47 被引量:158 H指数:6 供职机构: 新疆畜牧科学院 更多>> 发文基金: 新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 化学工程 更多>>
供核细胞对体细胞核移植效率的影响 被引量:3 2006年 利用体细胞核移植技术克隆动物、生产转基因家畜具有极大的应用潜力。然而,核移植效率低下、克隆后代形态异常等问题仍然制约着体细胞核移植技术的产业化进展。影响体细胞核移植效率的因素很多,该文着重从供核细胞的类型、细胞体外培养、细胞凋亡及转基因操作等方面阐述其对体细胞核移植效率的影响。 胡艳秋 李文蓉 罗淑萍关键词:供核细胞 体细胞核移植 细胞凋亡 细胞类型 细胞培养 制苗用鸡大肠杆菌培养基及培养方法 被引量:3 2001年 采用通气搅拌培养方法对鸡大肠杆菌用 MM培养基和改良 MM培养基进行了对比试验 ,并用改良MM培养基对鸡大肠杆菌进行了静止培养、通气搅拌培养和连续通气搅拌培养的对比试验。结果显示 ,改良MM培养基培养的鸡大肠杆菌菌数和光密度 ( D)值明显高于 MM培养基 ;连续通气搅拌培养和通气搅拌培养的方法明显优于静止培养方法。 成进 谷文喜 沙依然古丽 依米提 李文蓉关键词:鸡大肠杆菌 灭活疫苗 培养基 IRF2BP2基因在绵羊育种中的应用 本发明属于遗传育种技术领域,公开了IRF2BP2基因在绵羊育种中的应用。所述IRF2BP2基因位于绵羊基因组oar3.1版25号染色体,所述IRF2BP2基因的突变影响绵羊毛的生长情况,包括asEIF2S2片段插入突变和... 于丽娟 狄江 李文蓉 李忠慧 谢梦婉 张艳花 田月珍 唐丽苹 郑培宇 张彦威 阿米妮古丽·阿不来孜 宋楠楠新疆地区鸡伤寒白痢沙门氏菌病的流行病学调查 对新疆地区鸡沙门氏菌病进行了病原学和血清学的流行病学调查,结果表明分离的246株细菌与鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌诊断血清呈阳性反应;对15株鸡沙门氏菌进行抗原结构分析,表明8株为标准型鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌株,7株为中间型鸡沙门... 沙依染古丽 成进 谷文喜 依米提 李文蓉文献传递 绵羊Noggin基因的克隆、序列分析与原核表达 2012年 根据同源序列克隆原理设计一对引物,以绵羊脑组织总RNA的反转录产物为模板,利用RT-PCR扩增绵羊Noggin基因cDNA全长编码区,克隆到pMD-18T载体。测序验证后,提取pT-Noggin质粒经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切回收目的条带,亚克隆到pET41a原核表达载体,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。序列分析表明,绵羊Noggin基因的cDNA全长编码区(GenBank登录号为FJ751853)为699bp,编码232个氨基酸,与其他哺乳动物氨基酸序列同源性达到95%以上。SDS-PAGE结果显示,诱导表达的融合蛋白大小为60ku,与预期蛋白大小一致。Western blot检测结果显示,该蛋白为His融合蛋白。说明成功克隆了绵羊Noggin基因的编码区序列,构建了原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白。 贺三刚 张宁 张雪梅 刘明军 李文蓉关键词:绵羊 原核表达 羊BLG基因5′和3′调控区克隆及其调控GFP基因在乳腺细胞的表达 被引量:5 2002年 and 3′ flanking region of ovine BLG were amplified from sheep genomic DNA according to the published whole sequence of ovine BLG and cloned to pGEM-T vector correspondently.By partially sequencing,the sequences of BLG 5′ and 3′ flanking were the same as that of publication completely.The recombinant structure used to direct exogenous gene especially to express in mammary gland was constructed by joining 4.2kb 5′ flanking with 2.1kb 3′ flanking.In order to assess the efficiency of BLG regulatory elements,green fluorescent protein (GFP) gene as a reporter was fused with BLG construct and transfected the mammary epithelial cells (TD47).Through observation under UV microscope and detection by fluorometer,it is demonstrated that the GFP has been successfully expressed in TD47 cell line.By virtue of direct observation and quantitative analysis,the BLG-GFP construct can be served as a model for the quick assessment of mammary gland expression construct. 刘明军 李文蓉 武坚 黄俊成 郭志勤 曲新勇 Paul Kroon关键词:GFP基因 基因克隆 绿色荧光蛋白 牛杀菌/通透性增加蛋白对脂多糖介导的炎性细胞因子表达的影响 被引量:3 2015年 杀菌/通透性增加蛋白(Bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)能结合并特异地中和来自革兰氏阴性菌外膜的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)。为了研究牛源BPI蛋白及其N端结构域在LPS介导的免疫应答中的作用,本文将BPI全长1 449 bp编码区序列(BPI)和其N端714 bp的编码区序列(BPI714)分别导入m HEK293细胞,分析了稳定表达的BPI或BPI714对LPS介导的炎性细胞因子表达的影响。首先将构建的p LEX-BPI/p LEX-BPI714载体分别转染m HEK293细胞,获得稳定表达牛源BPI或BPI714的m HEK293细胞;然后用LPS刺激上述细胞,分别收集刺激前、刺激后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、36 h和48 h的细胞,并同时收集未表达BPI或BPI714的m HEK293细胞在各时间点的样品作为对照;采用定量RT-PCR检测上述细胞中炎性细胞因子IL-8、IL-1β、TNF-α、NF-κB-1、NF-κB-2的相对表达水平,比较LPS刺激前后表达BPI/BPI714和对照细胞中上述基因转录水平的变化规律。研究表明,LPS刺激后,对照细胞中IL-8、IL-1β、TNF-α、NF-κB-2表达水平在不同时间点均显著提高(P<0.05),并呈现规律性变化;而稳定表达BPI/BPI714的细胞在同样刺激条件下,IL-8、IL-1β、TNF-α、NF-κB-2基因的转录水平均未发生显著变化(P>0.05)。根据我们的实验结果,在m HKE293细胞模型中BPI或BPI714均能显著降低LPS介导的炎性细胞因子表达,抑制LPS介导的免疫应答。这不仅为进一步研究BPI抑菌机制和利用其抑菌功能提供了可靠的实验依据,也为分析抗菌蛋白的抗菌效果提供了一种可靠的实验方法。 姚楠 白杰 张雪梅 张宁 吴卫东 李文蓉关键词:脂多糖 免疫应答 炎性细胞因子 建立高效的转基因动物鉴定技术体系 被引量:4 2001年 转基因动物的鉴定是转基因动物研究领域的重要内容。本文简要回顾了相关鉴定技术的研究进展 ,建立和完善了特异性PCR扩增及其产物酶切的转基因动物鉴定体系 ,在引物设计、PCR参数优化、设立内源性标记等方面作了进一步的改进 ,提高了PCR的特异性和可靠性。实验表明 ,PCR扩增及其产物酶切是一种准确、灵敏、简便。 李文蓉 武坚 刘明军 黄俊成 杨冬梅 郭志勤关键词:PCR 酶切 精子载体介导法生产转基因绵羊的研究 被引量:21 2001年 采用精子载体介导法先后对 1 952只绵羊进行转基因试验 ,经PCR和South ern检测 1 592只后代中 ,转基因羊 1 0 3只 ,最高转基因效率达 9.86 % ;其中 2只转基因母羊乳汁中人胰岛素原基因表达量分别达 1 99.97mg/L和 1 83.6 2mg/L。荧光原位PCR结果证实牛、山羊和绵羊的精子经处理能携带外源基因 ,精子携带外源DNA的比率分别为 :绵羊 2 7.1 2 %、山羊 30 .57%、牛 31 .1 6 % ;同时外源基因进入到精子细胞并定位于核及其外周区域。研究还提示使用精子载体介导法时必须充分洗涤精液以除去精清 。 武坚 刘明军 李文蓉 黄俊成 史洪才 郭志勤关键词:转基因 乳腺表达 转Noggin基因生产促毛囊生长细毛羊的研究 毛囊的性状和皮肤组织结构决定了羊毛的品质和产量。本研究目的是获得转noggin基因的细毛羊,观察其对细毛羊毛囊生长的影响,进而培育出促进毛囊生长的转基因细毛羊品系。 贺三刚 张雪梅 张宁 刘晨曦 汪立芹 陈童 黄俊成 李文蓉 刘明军