刘国阳
- 作品数：16 被引量：33H指数：4
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- 发文基金：江苏省农业科技自主创新基金公益性行业(农业)科研专项江苏省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 一株猪源乙型脑炎病毒的分离及鉴定
- 从江苏某发病猪场采集的母猪流产胎儿脑组织样本中成功分离到一株猪源乙型脑炎病毒毒株，并对该毒株的相关生物学特性进行了鉴定。利用BHK-21细胞传代和脑内接种小鼠方法，对疑似阳性病料做病毒分离。
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- 关键词：生物特性
- 猪伪狂犬病毒Real-time PCR检测方法的建立和弱毒疫苗病毒含量的检测被引量：6
- 2019年
- 根据伪狂犬病毒的gB基因设计引物,将含gB基因的质粒作为标准品,绘制标准曲线,建立了伪狂犬病毒PRV的荧光定量PCR检测方法。该检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,不与PCV2、PPV、CSFV、JEV和PRRSV发生反应。用该方法对不同滴度病毒液的基因拷贝数进行检测,发现病毒滴度和病毒拷贝数之间存在较好的相关性。采用该方法对7种商品化PRV弱毒疫苗进行病毒含量检测,结果显示不同商品化弱毒疫苗的病毒含量存在显著差异,与说明书标注的病毒含量基本一致。
- 华涛唐波唐波常晨刘国阳常晨侯继波刘国阳
- 关键词：猪伪狂犬病毒GB基因病毒滴度基因拷贝数
- 猪圆环病毒2型与猪细小病毒混合感染对仔猪致病性的研究被引量：4
- 2019年
- 对35日龄健康仔猪进行人工单独或混合感染猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2),采用临床症状、组织病理学变化和血清学检测等手段,比较了不同实验组攻毒后仔猪的症状差异。实验结果显示:PPV和PCV2混合感染能够引起更加严重的断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)症状,并加重PCV2引起的间质性肺炎和仔猪消瘦的严重程度;混合感染后,仔猪病毒血症出现更早,持续时间更长,且病毒含量明显高于单独感染组;混合感染组仔猪的PCV2 ELISA抗体水平和血清抗体水平均显著高于PCV2单独感染组的。说明PPV能够明显增强PCV2的临床症状,加重PMWS的发病程度。
- 刘国阳唐波唐波华涛常晨张道华
- 关键词：猪圆环病毒猪细小病毒
- 提高猪圆环病毒2型产量的方法比较
- 2015年
- 为了获得较高的病毒滴度,降低疫苗成本,选用4种刺激剂:二磷酸氯喹(CQ)、刀豆素(Con A)、D-氨基葡萄糖(D-G)和β-甲基-环糊精(MβCD),采用单独刺激和联合刺激感染PCV2的PK-15细胞,研究PCV2增殖情况。结果显示,MβCD和D-G单独作用均能显著促进PCV2的感染和复制,且效果优于另外2种单独作用;采用3 mmol/L D-氨基葡萄糖和2.5 mmol/L MβCD联合作用方法,在病毒5次传代期间病毒滴度显著高于单独作用组,最高滴度达到107.3TCID50/m L,该法有助于提高PCV2复制效率,提高疫苗的产量。
- 华涛张雪花唐波常晨刘国阳冯磊吴培培张道华侯继波
- 关键词：PCV2病毒滴度D-氨基葡萄糖
- 猪伪狂犬病病毒野毒SYBR-Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立被引量：2
- 2017年
- 根据猪伪狂犬病病毒(PRV)g I/g E基因序列,设计一对特异性引物,建立了鉴别PRV野毒感染的荧光定量PCR方法。该方法灵敏度达到102拷贝/μL,与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、乙脑病毒(JEV)不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性;用PRV强毒攻毒仔猪,荧光定量PCR比普通PCR能更灵敏检出组织带毒量。该方法可以用于猪的组织样品,如脑、肺、扁桃体、淋巴结等样品中伪狂犬野毒的定量,可用于临床伪狂犬野毒感染的早期检测和定量分析猪伪狂犬病毒感染程度。
- 常晨张道华唐波刘国阳华涛侯继波
- 关键词：猪伪狂犬病病毒荧光定量PCR野毒
- 1株猪源乙型脑炎病毒株的免疫原性研究被引量：2
- 2015年
- 将从江苏地区筛选出的1株增殖性能稳定猪源JEV JS01毒株作为疫苗,用毒株制备灭活疫苗进行免疫原性研究。试验采用经过细胞传代获得JEV JS01病毒液(1×10^(7.5)TCID50/m L),以甲醛灭活后加入油佐剂,制备猪源乙型脑炎灭活疫苗。腹腔免疫9~12 g小鼠,攻毒保护结果显示对照组小鼠全部死亡,免疫组90%以上健活。分别肌肉注射免疫仔猪及后备母猪,不同时间采集血清测定JEV ELISA抗体。检测结果显示,免疫后试验猪血清抗体效价较免疫前均有显著提高,后备母猪免疫8个月后抗体仍全部为阳性,抗体水平与免疫剂量呈正相关性。试验表明该猪源乙脑病毒JS01毒株具有良好的免疫原性,可以用作疫苗用毒株。
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- 关键词：免疫原性灭活疫苗
- 猪细小病毒在ST细胞中增殖规律的动态分析被引量：2
- 2015年
- 将猪细小病毒接种于ST细胞,于不同时间点收获病毒测定其病毒滴度与病毒拷贝数,以此分析该病毒在ST细胞上的增殖规律。细胞于感染后48 h开始出现细胞病变,84 h细胞出现脱落和崩解。TCID50结果显示,病毒感染后18 h即能检出病毒滴度,随后逐渐升高至72 h达到峰值(107.2/m L),其后逐渐下降。通过SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法测定不同时间病毒体外感染细胞后的复制动态水平,病毒含量的增长于108 h达到峰值随后逐渐下降。通过对PPV在ST细胞中的体外复制动态分析结果表明感染后96~108 h为最佳收毒时间,这为利用细胞增殖病毒生产疫苗提供重要参考。
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- 关键词：猪细小病毒ST细胞病毒复制
- 南京地区1株猪伪狂犬病毒的分离与鉴定被引量：5
- 2016年
- 于2013年从南京某猪场送检发病仔猪脏器中分离获得1株病毒。病样组织液上清经BHK细胞分离培养后,利用PCR和间接免疫荧光反应进行鉴定,PCR可以扩增出PRV gE基因的全长片段,且在间接免疫荧光检测中呈现阳性荧光反应。将命名为NJ株的分离病毒接种家兔,被接种的家兔很快出现瘙痒、死亡等伪狂犬病症状。与以往发表的伪狂犬病毒gE基因序列比对及进化树分析结果显示,分离株属于一个相对独立的分支。由中国兽药监察所提供的伪狂犬病阳性血清对分离株有一定的中和能力。根据实验结果推测,南京某猪场流行的伪狂犬病毒存在一定的抗原变异。
- 常晨张道华唐波刘国阳华涛侯继波
- 关键词：伪狂犬病病毒GE基因
- 猪细小病毒NJ株ST细胞适应性研究
- 2019年
- 为评价ST细胞代次的增高对猪细小病毒NJ株免疫原性的影响,将第10、30、60代ST细胞分别接种猪细小病毒NJ株F8 、F18代毒种进行病毒培养,通过检测其病毒含量、血凝价以及制备疫苗免疫机体的抗体水平等指标来进行评价。结果表明,各代次病毒含量为10 7.2 ~10 7.5 TCID 50 /mL,血凝价为2 9~2 10;制苗后免疫阴性豚鼠与后备母猪,免疫28 d后均出现抗体反应,HI效价分别为2 7~2 9和2 8~2 9。不同代次毒种接种不同代次ST细胞培养的病毒含量、血凝价及疫苗免疫效力均符合要求。各代次细胞增殖性能稳定,培养的PPV NJ株均能满足兽用生物制品的生产要求。
- 唐波刘国阳刘国阳华涛常晨
- 关键词：猪细小病毒ST细胞适应性
- PK-15细胞在微载体悬浮放大培养及PCV2增殖工艺研究被引量：5
- 2017年
- 为建立在生物反应器内微载体逐级放大培养PK-15细胞和增殖PCV2技术。采用分批式培养方法,研究了PK-15细胞在微载体胰酶消化放大悬浮培养及猪圆环病毒2型(PCV2)增殖工艺。结果表明,5 g/L的微载体和高糖DMEM下,采用4.0×105cells/m L的初始接种密度及培养至第2天进行换液操作工艺可以获得最佳的PK-15细胞生长效能。胰酶消化转移将PK-15细胞从1 L反应器放大至3 L反应器,微载体上细胞贴附均匀、生长旺盛,培养3 d细胞密度可达34.3×105cells/m L。采用感染复数为0.1的接毒比例,细胞接毒后在微载体上传至第3代收获毒液可获得最高的PCV2增殖效价107.25TCID50/m L。为PCV2疫苗的生物反应器规模化生产奠定了基础。
- 华涛冯磊张雪花唐波常晨刘国阳吴培培陈丽张道华侯继波
- 关键词：PK-15细胞微载体猪圆环病毒2型
