曹春秋
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省博士后基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 抗鹅CD8α链胞外区单克隆抗体及其在检测禽类外周血中CD8<Sup>+</Sup>T淋巴细胞中的应用
- 本发明公开了抗鹅CD8α链胞外区单克隆抗体及其在检测禽类外周血中CD8<Sup>+</Sup>T淋巴细胞中的应用。本发明以携带鹅CD8α链胞外区基因的原核表达载体为模板，设计1对特异性引物扩增得到鹅CD8α链胞外区238...
- 马波曹春秋张雪莲王君伟张文龙高明春张文晶崔嘉琦
- 文献传递
- 鸭肠炎病毒gB N端(60～110aa)抗原优势区的原核表达及抗血清的制备
- 2015年
- 以本实验室已克隆的鸭肠炎病毒（DEV）C-KCE株ul27基因序列为模板,设计特异性引物,PCR扩增获得编码鸭肠炎病毒gB N端第60～110aa的目的基因片段,大小为150bp。将目的基因亚克隆至原核表达载体pET-32a（＋）中,阳性质粒被命名为pET-32a（＋）-gB-1。经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明,重组蛋白以包涵体形式表达,大小约为27ku。用Ni-NTA柱亲和层析获得纯化的重组蛋白,鸭抗DEV阳性血清经间接ELISA检测证实其具有抗原性,并以此为免疫原免疫家兔制备抗血清,经间接ELISA检测,抗血清效价为1∶25 600。应用间接免疫荧光及Western-blot分析制备的抗血清的反应性,均证实抗血清可特异性识别DEV gB蛋白。分别以重组蛋白和DEV超离病毒为检测抗原进行间接ELISA,检测DEV免疫鸭的抗体消长规律,结果显示两者的抗体变化趋势一致。以上结果表明,制备的抗血清可作为DEV检测的候选试剂,表达的重组蛋白可作为DEV抗体检测的诊断抗原。
- 曹春秋张树栋刘琪董井泉高明春张文龙许丽于长泳马波王君伟
- 关键词：鸭肠炎病毒GB原核表达抗血清
- 抗鹅CD4胞外区单克隆抗体及其在检测禽类外周血中CD4<Sup>+</Sup>T淋巴细胞中的应用
- 本发明公开了抗鹅CD4胞外区单克隆抗体及其在检测禽类外周血中CD4<Sup>+</Sup>T淋巴细胞中的应用。本发明利用携带鹅CD4胞外区的原核表达载体pET-30a-CD4ex，采用大肠杆菌Rosetta<Sup>TM...
- 王君伟曹春秋马波张雪莲高明春张文龙郝春雪崔嘉琦
- 文献传递
- 鸭肠炎病毒gB抗原优势区的表达及其多克隆抗体的反应特性被引量：4
- 2015年
- 拟制备鸭肠炎病毒(DEV)gB抗原优势区的多克隆抗体,初步应用于该病毒的检测。以本实验室克隆的DEVC-KCE株ul27基因序列为参考序列设计特异性引物,通过PCR获得DEV gB优势表位区域基因片段gB-AD(331—570bp),并在pET-32a(+)/Rosetta(DE3)pLysS系统中进行原核表达。经IPTG诱导获得与预期大小相符的重组蛋白质,以Ni-NTA柱亲和层析法纯化重组蛋白质,利用DEV阳性血清检测重组蛋白质的抗原性,并用切胶纯化的重组蛋白质免疫家兔,制备兔抗DEV gB-AD血清。结果显示,重组蛋白质可被DEV阳性血清特异性识别,制备的兔源多克隆抗体I-ELISA效价为1∶10 240,且其具有中和活性;兔源多克隆抗体在还原电泳条件下显示DEV gB的相对分子质量约为66ku,而在非还原电泳条件下DEV gB显示为相对分子质量约120和66ku的两条目的带,通过间接免疫荧光试验和中和试验进一步证实制备的兔源多克隆抗体可特异性识别鸭肠炎病毒感染细胞所合成的gB蛋白。结果表明,所制备的兔抗DEV gB-AD多克隆抗体可作为检测DEV的试剂,为DEV检测及gB的功能研究提供必要的基础数据和材料。
- 张树栋曹春秋董井泉高明春张文龙郑铁鑫马波王君伟
- 关键词：鸭肠炎病毒GB原核表达多克隆抗体
- 抗鹅CD8α链胞外区单克隆抗体及其在检测禽类外周血中CD8<sup>+</sup>T淋巴细胞中的应用
- 本发明公开了抗鹅CD8α链胞外区单克隆抗体及其在检测禽类外周血中CD8<Sup>+</Sup>T淋巴细胞中的应用。本发明以携带鹅CD8α链胞外区基因的原核表达载体为模板，设计1对特异性引物扩增得到鹅CD8α链胞外区238...
- 马波曹春秋张雪莲王君伟张文龙高明春张文晶崔嘉琦
