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RIFO杂交和限制性片段长度多态性检测耐利福平和异烟肼的结核分枝杆菌被引量：2: 2007年; 目的评价利福平寡核苷酸探针杂交技术(RIFO 杂交)和 PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)在结核分枝杆菌(MTB)耐利福平(RIF)和异烟肼(INH)快速检测中的应用价值。方法选取121株北京地区 MTB 菌株,分别采用 RIFO 杂交技术和 PCR-RFLP 检测 RIF 耐药相关基因 rpoB 核心区和 INH 耐药相关基因 katG315位点突变,并对所有菌株的 rpoB 基因核心区进行测序验证。结果 RIFO 杂交检测发现,91.5%(65/71)的 RIF 耐药株和92.9%(52/56)的耐多药菌株(至少对 RIF 和 INH 耐药)存在 rpoB 基因核心区突变,而 RIF 敏感株中未发现突变;RIFO 杂交与测序结果完全一致,测序结果中有突变的位点在 RIFO 杂交中均有相应的野生型杂交信号缺失;PCR-RFLP 结果显示,INH 耐药株中 katG315突变率为60.6%(40/66)。结论 rpoB 基因核心区可作为 RIF 耐药检测的分子标志及耐多药的筛选指标;RIFO 杂交技术是检测 MTB 耐 RIF 的快速、准确的实验方法,具有推广及潜在的临床应用价值;PCR-RFLP 可检测出大部分 INH 耐药株,可作为临床 INH 耐药性检测的辅助手段。; 焦伟伟Igor Mokmusov孙桂芝李墨刘佳文Olga Narvskaya申阿东; 关键词：分枝杆菌结核利福平异烟肼

Trustline结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测试剂盒(胶体金法)的临床应用评价被引量：4: 2013年; 目的评价Trustline结核抗体IgG/IgM检测试剂盒临床应用效果。方法选用3家医院的1009份血清标本,其中628份为结核病患者血清(308例菌阳病例,320例菌阴病例);对照组381份非结核病血清。采用Trustline试剂盒及一种已上市的试剂盒(对照试剂盒)分别检测1009份血清,计算多项检测指标,从而评价试剂盒的检测效果。结果通过检测1009份临床血清标本,Trustline试剂盒检测血清抗体(IgG+IgM)的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、Youden指数分别为61.3%、79.8%、83.3%、55.6%和0.411,对照试剂盒检测血清抗体(IgG)的结果分别为53.7%、89.0%、88.9%、53.8%和0.426。经统计分析表明Trustline试剂盒的灵敏度显著优于对照试剂盒(P<0.01),特异度低于对照试剂盒(P<0.01),但阳性诊断效率和阴性诊断效率方面差异无统计学意义,Youden指数相接近。进一步分析显示Trustline试剂盒对菌阳样本及菌阴样本的检出率分别77.6%和44.7%,对照试剂盒则为67.9%和40.0%,对菌阳样本检出率的差异有统计学意义。检测1009份标本,Trustline试剂盒共得IgM阳性35例,其中结核组阳性30例(4.8%),非结核组阳性5例(1.3%)。结论 Trustline试剂盒检测结核抗体的灵敏度显著优于对照结核抗体试剂盒,并可同时用于检测IgG/IgM抗体,可以应用于结核病的快速诊断。; 吕冰万李潘其林孙桂芝杨宝财王金峰刘姣万康林; 关键词：血清学诊断

应用多重聚合酶链反应技术快速鉴定牛分支杆菌卡介苗株被引量：4: 2003年; 目的　建立快速鉴定牛分支杆菌卡介苗 (BCG)菌株的方法。方法　依据最近研究发现的牛分支杆菌BCG菌株不存在命名为缺失区 1(deletedregion 1,RD1)的基因区 ,而其他牛分支杆菌菌株和其他结核分支杆菌复合群 (MTC)菌种 (结核分支杆菌、非洲分支杆菌和田鼠分支杆菌 )存在RD1基因区的遗传学信息 ,应用多重聚合酶链反应 (PCR)检测RD1基因区存在与否 ,以鉴别BCG菌株与其他牛分支杆菌菌株及其他MTC菌种。结果　所试 5株BCG疫苗生产用标准菌株和近期国内发生的 1例小儿BCG接种后全身播散性感染致死病例的 2株BCG分离菌株 ,均缺失RD1基因区 ;其他牛分支杆菌菌株 ,包括 3株牛分支杆菌标准菌株、5株分别从结核病牛或鹿分离的牛分支杆菌菌株 ,1株从结核病患者痰标本分离的牛分支杆菌菌株 ,以及其他MTC菌种 ,包括结核分支杆菌H3 7Rv和H3 7Ra标准菌株、48株从结核病患者痰标本分离的结核分支杆菌菌株、3株非洲分支杆菌标准菌株 ,均存在RD1区。结论　多重PCR技术用于牛分支杆菌BCG菌株的鉴定简便、快速、特异 ,适于在临床实验室应用。; 李国利陈保文庄玉辉王国治赵铭沈小兵孙桂芝; 关键词：结核分支杆菌 BCG 多重聚合酶链反应卡介苗结核病

结核分枝杆茵耐药性快速检测及基因分型研究: 目的:研究北京地区结核分枝杆菌利福平(RIF)和异烟肼(INH)耐药特点,寻找理想的基因位点作为耐药检测分子标志;了解北京地区结核分枝杆菌的基因型分布特点;评价改进的利福平寡核昔酸探针杂交技术(RIFO杂交)在结核分枝杆...; 申阿东焦伟伟Igor Mokrousov李墨孙桂芝刘佳文Olga Narvskaya; 文献传递

耐异烟肼结核分枝杆菌临床分离株耐药基因突变及其分子流行病学调查研究被引量：4: 2007年; 目的阐明结核分枝杆菌耐异烟肼临床分离株katG基因突变特点以及Spoligotyping分型和结核病流行关系。方法对123株结核分枝杆菌临床分离株,其中有药敏结果的98株,(耐异烟肼菌株45株;异烟肼敏感株53株)的katG基因进行DNA片断扩增然后进行SSCP分析;同时对其中的121株菌株进行Spoligotyping分型。结果45株耐INH结核杆菌株中,27株(60%)第315位点突变,低耐药菌株(1mg/L)第315位点突变率显著高于高耐药菌株(10mg/L;53株敏感株中无KatG基因315位密码子突变。对121株临床株的SpoligotypingDNA指纹分析,1型,(北京型)103株占84%(103/121),其它基因型18株,分散在13种基因型中。结论本项研究进一步证实了结核分枝杆菌耐异烟肼与katG基因突变之间的关系;北京型感染是北京地区结核病流行的重要原因。; 刘佳文申阿东孙桂芝; 关键词：异烟肼 KATG基因

耐吡嗪酰胺结核分枝杆菌基因突变研究被引量：4: 2008年; 目的研究吡嗪酰胺酶编码基因pncA突变与结核分枝杆菌吡嗪酰胺（pyrazinamide，PZA）耐药的关系。方法将临床分离的36株结核分枝杆菌进行常规PZA药敏试验和pncA基因序列分析。采用绝对浓度法进行PZA药敏试验；PCR扩增pncA基因及其上游、下游碱基序列，纯化回收PCR产物克隆到T载体并进行全自动测序。结果36株临床分离株中25株PZA耐药，11株PZA敏感。5株高耐PZA（PZA浓度为250μg／ml）临床分离株4株pncA基因突变；20株低耐PZA（PZA浓度为50μg／ml）6株pncA基因突变；25株耐PZA结核分枝杆菌pncA基因突变率为40．0％。3株PZA敏感临床分离株pncA基因出现突变、其中2株为同义突变。11株耐PZA结核分枝杆菌pncA基因上游调控序列突变，其中5株同时有pncA基因突变；2株PZA敏感结核分枝杆菌pncA基因上游序列突变。结论pncA基因突变可引起结核分枝杆菌对PZA耐药，但pncA基因突变只是结核分枝杆菌耐PZA的一种机制，可能还存在PZA的其他耐药机制。; 何秀云庄玉辉李国利王艳军黄香玉孙桂芝; 关键词：吡嗪酰胺突变微生物敏感性试验

等位基因特异多重PCR快速检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性研究被引量：1: 2009年; 了解北京地区异烟肼(INH)耐药结核分枝杆菌(MTB)的分子特点,评价等位基因特异多重PCR在INH耐药性快速检测中的应用价值。选取102株北京地区MTB临床分离株,首先分别采用PCR-RFLP和反向线性杂交技术(RLB)检测耐药相关基因katG和inhA突变,然后运用等位基因特异多重PCR方法同时检测katG和inhA基因突变,并与PCR-RFLP和RLB分别检测的结果进行比较。采用等位基因特异多重PCR检测发现,INH耐药株中60.3%(35/58)存在katG315突变,13.8%(8/58)发生了inhA突变,两者同时突变率为6.9%(4/58),INH敏感株中没有发现katG315突变,而inhA突变率为18.2%(8/44)。上述检测结果与PCR-RFLP和RLB分别检测的结果完全一致,且等于两种方法结果之和,提示等位基因特异多重PCR可完全取代PCR-RFLP和RLB。北京地区INH耐药菌株以katG315 AGC→ACC突变为主;联合检测katG315和inhA基因可提高INH耐药株的检出率。等位基因特异多重PCR操作简便,结果易于判断,可作为临床MTB菌株中INH耐药性快速检测的辅助手段。; 焦伟伟孙琳李兆娜顾艺孙桂芝申阿东; 关键词：结核分枝杆菌抗药性异烟肼 PCR-RFLP

旋转式荧光定量PCR在临床应用中的价值: 2010年; 目的:探讨旋转式荧光定量PCR仪在检测临床标本中的应用价值。方法:通过旋转荧光定量-PCR技术鉴定1132株临床分离株,进行结核分枝杆菌的菌种鉴定和定量分析,同时进行抗酸染色和培养法。结果:总阳性检出率为48.64%,其中菌阳检出率为96.56%(253/262),阴性符合率为77.85%(369/474),菌种鉴定特异性实验符合率为100%。结论:旋转氏荧光定量PCR仪改进后更加快速、敏感,与其配套使用的试剂特异性强,是在检测结核分枝杆菌复合群的同时,又能进行非结核分枝杆菌鉴定辅助诊断的好方法。; 李洪敏高华方张广宇王思贤王甦民孙桂芝赵智贤杨楠; 关键词：结核分支杆菌菌种鉴定

国内外结核菌聚合酶链反应试剂盒的临床检测结果比较: 2005年; 目的用相同标本比较国内外结核菌聚合酶链反应诊断试剂盒的临床检测效果,并初步探讨结核菌聚合酶链反应荧光诊断试剂盒在临床应用中定量检测结核菌数量的可行性。方法用聚合酶链反应技术,荧光探针杂交技术、酶联免疫反应技术以及常规细菌学方法检测并经双盲编号的84份临床痰标本和8份含痰结核菌标准品。结果在59例结核病患者痰标本中,国产PCR-酶联免疫检测试剂盒与PCR荧光试剂盒分别检出26例阳性和24例阳性,国外试剂盒检出24例阳性;在25例非结核病患者痰标本中,国产PCR-酶联免疫检测试剂盒与PCR荧光试剂盒分别检出21例真阴性和24例真阴性,国外试剂盒检出23例真阴性;细菌学各级别检查结果与PCR荧光检测CT值不呈递减关系。结论国内外结核菌聚合酶链反应诊断试剂盒对临床标本的检测结果无显著性差异;结核菌聚合酶链反应荧光诊断试剂盒尚不能定量检测痰标本中的结核菌数量,有待更多的临床数据加以证实。; 沈小兵陈保文王国治孙桂芝王苏民夏颐; 关键词：结核菌聚合酶链反应试剂盒痰标本荧光定量

应用反向线性杂交技术快速检测结核分枝杆菌利福平耐药性研究被引量：4: 2007年; 探讨反向线性杂交技术(reverse line blot assay,RLB)在结核分枝杆菌利福平(RFP)耐药性快速检测中的应用价值。采用RLB将包含rpoB基因核心区的扩增产物与标记特异性探针的膜进行杂交,共对121株结核分枝杆菌进行RFP耐药性检测,并将结果与常规药敏实验进行比较。结果发现,121株中有71株对RFP耐药,56株为多重耐药株;采用RLB共检测到65株RFP耐药株rpoB基因核心区存在突变,其灵敏度为91.5%(65/71);50株RFP敏感株中均未检测到突变,则特异性为100%(51/51);56株多耐药菌株中,92.9%(52/56)存在rpoB基因核心区突变。因此,用RLB检测结核分枝杆菌RFP耐药株具有快速,高效,特异性和灵敏度高的优点,且可用于多耐药菌株的筛选,具有推广和潜在的临床应用价值。; 焦伟伟李墨Igor Mokrousov孙桂芝刘佳文Olga Narvskaya申阿东; 关键词：分枝杆菌利福平耐药 RPOB基因

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孙桂芝

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