李庆芳
- 作品数：29 被引量：35H指数：4
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Tet-off调控bcr/abl基因表达的细胞系293pT2-P210的建立
- 2007年
- 慢性髓系白血病(CML)是一种以髓系细胞受累为主的克隆性疾病。目前认为CML的主要分子发病基础为:位于9q34的abl基因与位于22q11的bcr基因相互易位形成bcr/abl融合基因,并编码具有很强蛋白酪氨酸激酶活性的P210bcr/abl融合蛋白,该蛋白通过多种信号通路抑制细胞凋亡而导致细胞转化。本研究为构建能由Tet-off诱导表达系统调控bcr/abl融合基因表达的细胞系,为深入研究bcr/abl融合基因功能及其调控机制提供一种有价值的细胞模型。将bcr/abl融合基因亚克隆到pTRE2hyg载体构建重组质粒pT2-P210,同时将Tet-off质粒转染293细胞并筛选出单克隆,然后进一步转染pTRE2hyg-LUC质粒,通过荧光素酶活性检测选出能有效诱导目的基因表达的293Tet-off细胞,然后将重组质粒pT2-P210转染到293Tet-off细胞中。结果表明:筛选出了bcr/abl融合基因能被强力霉素有效调控的293pT2-P210单克隆细胞。结论:本研究筛选的293pT2-P210细胞为bcr/abl基因表达能被Tet-off诱导表达系统调控的细胞系,它们适用于bcr/abl融合基因功能及其信号调控机制的深入研究。
- 黄文荣鲁茁壮王立生王华段海峰李庆芳高春记达万明
- 关键词：BCR/ABL融合基因293细胞
- SPK-S1P信号调节多发性骨髓瘤细胞凋亡的作用及机理研究
- 多发性骨髓瘤(multiplemyeloma，MM)是一种源于晚期B细胞的恶性肿瘤，其特征为骨髓中单克隆浆细胞无限增生及血清或尿中出现单克隆的免疫球蛋白。由于该病的发病机理还不十分清楚，目前一直缺乏根治的有效手段。因此，...
- 李庆芳
- 关键词：骨髓瘤多发性骨髓瘤细胞凋亡
- 文献传递
- 1-磷酸鞘氨醇对淋巴管内皮细胞生物学特性调节作用的研究
- 2009年
- 目的:研究1-磷酸鞘氨醇(S1P)对淋巴管内皮细胞(HDLEC)的生物学特性的调节作用及其调节机制。方法:应用RT-PCR方法检测HDLEC是否表达SPK及S1P受体,应用MTT法、细胞扩散盒技术检测S1P对HDLEC增殖、迁移特性的影响,并用Western印迹方法检测S1P对HDLEC的MAPK信号通路的调节。结果:HDLEC表达SPK及S1P受体,包括S1P1,S1P2,S1P3和S1P4。外源性S1P对HDLEC没有促增殖作用,但可促进其迁移,并可通过S1P1和S1P2诱导MAPK快速磷酸化。结论:初步研究结果提示,S1P可以影响淋巴管内皮细胞的生物学特性,有可能成为调控淋巴管生成及其功能的新靶点。
- 肖秀斌王华李庆芳严俊杨月峰徐尹张伟京王立生
- 关键词：1-磷酸鞘氨醇淋巴管内皮细胞细胞增殖迁移
- 低氧条件下白藜芦醇对HepG2细胞增殖及自噬的调节作用及初步机制被引量：4
- 2011年
- 白藜芦醇(resveratrol)是天然存在于葡萄、红酒及花生等中的一种多酚类化合物,具有抗癌、抗氧化等作用.目前针对resveratrol抗癌作用的研究大多侧重于常氧状态,而对于更接近体内肿瘤生长环境即低氧状态的研究相对匮乏.本文以肝癌细胞HepG2为模型,探讨了低氧(1%O2)条件下resveratrol抑癌的相关功能和机制.结果表明,在低氧状态下resveratrol不仅抑制HepG2细胞的活性,而且也促进了低氧诱导的自噬保护机制;进一步研究发现,去乙酰化酶Sirt1和鞘氨醇激酶SPK1也参与上述过程.本文初步揭示了低氧状态下癌细胞对resveratrol敏感性低的可能机制,更加明确resveratrol在实体瘤中的抗癌作用,并为resveratrol的药物研发提供了借鉴.
- 严俊李晓姝孙慧燕王华肖凤君李庆芳杨月峰王立生吴祖泽
- 关键词：白藜芦醇自噬去乙酰化酶鞘氨醇激酶
- 重组质粒pUDK-PmL-IR-GM的体内免疫激活作用
- 2011年
- 目的构建携带融合蛋白基因PSA-IZ-mCD40L(PmL)和GM-CSF基因的重组质粒载体pUDK-PmL-IR-GM,并评价其小鼠体内免疫激活作用。方法采用类似基因合成的方法将前列腺特异性抗原基因、异亮氨酸拉链基因和鼠源性CD40配体基因连接并扩增获得融合蛋白基因PmL。将GM-CSF、PmL和核糖体内部进入位点基因依次克隆到pUDK载体,获得重组质粒pUDK-PmL-IR-GM。分别于第1、11、21和35天免疫小鼠,末次免疫后10d分离小鼠脾脏T淋巴细胞。采用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群;MTT法检测前列腺特异性抗原刺激下的T淋巴细胞增殖效应;非放射性细胞杀伤检测试剂盒检测对LNCaP细胞的特异性杀伤作用。结果 PCR成功扩增GM-CSF基因和融合蛋白基因PmL,并将其克隆至pUDK载体上,以核糖体内部进入位点连接,得到重组质粒pUDK-PmL-IR-GM。pUDK-PmL-IR-GM免疫小鼠后,T淋巴细胞性能检测显示:CD4+T淋巴细胞与CD8+T淋巴细胞的比值较对照组明显升高(P<0.05);前列腺特异性抗原刺激后,其增殖能力明显增强(与阴性对照相比,P<0.01),且明显高于其他免疫组(P<0.01);其对LNCaP细胞杀伤效率大于25%,且明显强于pUDK免疫组(P<0.05)。结论成功构建重组质粒载体pUDK-PmL-IR-GM,并证实其能在一定程度激活小鼠T淋巴细胞的特异性免疫反应。
- 杨月峰王华肖凤君徐洁李庆芳严俊王立生
- 关键词：前列腺特异抗原CD40配体T淋巴细胞亚群
- SPK1介导BCR/ABL上调Mcl-1
- 目的：慢性粒细胞白血病(chronic myeloge- nous leukemia,CML)是一种以髓系细胞受累为主的多能造血干细胞的克隆性疾病。目前认为 CML 的主要分子发病基础为：位于9q34的 abl 基因与位...
- 李庆芳黄文荣段海峰吴祖泽王立生
- 文献传递
- 鞘氨醇激酶调节细胞凋亡的研究进展被引量：10
- 2005年
- 鞘磷脂衍生物神经酰胺(Cer)、鞘氨醇(Sp)及 1 磷酸鞘氨醇(S1P)在调控细胞增殖、存活及凋亡中发挥着重要作用。鞘氨醇激酶(SPK1)是调控细胞内Cer、Sp、S1P代谢平衡的关键酶。SPK1磷酸化Sp生成S1P,S1P通过细胞内和细胞外作用机制调节细胞生长和凋亡。SPK1参与细胞因子的信号传递。高表达SPK1抑制半胱天冬酶的裂解并上调Bcl- 2基因的表达。本文综述了SPK的结构、调控及对细胞凋亡的调节作用。
- 李庆芳王立生
- 关键词：1-磷酸鞘氨醇鞘氨醇激酶细胞凋亡信号转导基因表达
- 恶性血液病的基础及临床研究
- 于力王立生高晓宁黄文荣窦立萍李永辉李庆芳靖彧王立新王华王莉莉徐诚望王蔚高丽赵瑜
- 该项目属于医疗卫生领域，血液病学科(3202430)。随着化疗方案、靶向药物和造血干细胞移植等综合治疗措施的进步，恶性血液病总体疗效虽有提高，但仍不满意。因此，深入研究恶性血液病机制，优化临床诊治措施，对于改善恶性血液病...
- 关键词：
- 关键词：恶性血液病造血干细胞移植治疗
- 胰腺癌新的生物学标志物探讨被引量：1
- 2015年
- 胰腺癌以胰头部多见,其次为胰腺体部和尾部,是常见消化道恶性肿瘤之一,早期患者多不表现临床症状,当累及胰周组织或发生转移时才有所表现,症状缺乏特异性,确诊时多失去手术根治时机,中位生存期不足1年。目前,胰腺癌的早期诊断率低于20%,影像学技术对于微小胰腺癌或胰腺上皮内瘤变、非侵袭性导管内黏液性肿瘤、黏液性囊性肿瘤等胰腺癌前病变的诊断效果并不理想;而血液学标本容易获得,对机体损伤小,因此,寻找高效的血液学标志物实现早期诊断已成为研究热点。
- 王欢李庆芳印凡
- 关键词：胰腺癌生物标志物
- 慢性髓系白血病细胞中SphK-1/S1P信号通路的初步研究被引量：2
- 2008年
- 慢性髓系白血病(CML)是一种以髓系细胞受累为主的多能造血干细胞的克隆性疾病。为探讨SphK-1/S1P信号通路元件在CML细胞中的表达情况,研究P210bcr/abl是否涉及到SphK-1/S1P信号通路,首先采用RT-PCR检测bcr/abl阳性的K562细胞和bcr/abl阳性的原代CML细胞中SphK-1和S1P受体mRNA的表达。进一步利用P210bcr/abl特异抑制剂甲磺酸伊马替尼处理bcr/abl阳性的K562细胞和CML原代细胞,然后通过32P-ATP掺入法测定细胞内SphK-1的酶活性。结果表明:K562细胞经2.5μmol/L甲磺酸伊马替尼处理0.5、2、6、24和48小时后,对SphK-1活性抑制强度分别为0.007%、38.9%、34.6%、28.1%和76.1%;CML原代细胞在使用2.5μmol/L甲磺酸伊马替尼处理后SphK-1活性较对照下降(16.8-41.9)%。结论:CML细胞中存在SphK-1和S1P的表达,P210bcr/abl具有激活SphK-1的作用。
- 黄文荣王立生王华段海峰李庆芳高春记达万明
- 关键词：慢性髓系白血病鞘氨醇激酶-1
