王晓
- 作品数：3 被引量：16H指数：2
- 供职机构：解放军第三○二医院更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项北京市自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 各种恩替卡韦耐药HBV株鉴定及替诺福韦酯对其抑制力分析被引量：7
- 2013年
- 目的分析临床分离的不同形式恩替卡韦(ETV)耐药HBV株的病毒复制力并探讨替诺福韦酯(TDF)对其的抑制力。方法从4例ETV治疗失败的慢性乙型肝炎患者血清中提取并扩增HBV反转录酶(reverse transcriptase,RT)基因,克隆测序分析其基因型耐药变异特点。选取代表性野生型和ETV耐药型HBV克隆株,构建pTriEx-HBV(C)1.1倍重组表达载体。提纯质粒转染HepG2细胞系,5d后检测上清中HBVDNA产生量,分析不同变异形式ETV耐药变异株体外复制力水平及TDF对其抑制力。结果 4份血清中共得到16种含不同HBVRT区变异形式的克隆株,10种与ETV耐药有关,另有6种与拉米夫定耐药有关。表型分析显示:与野生株相比,ETV耐药变异株复制力水平均有所下降,其中rtT184I+M204I变异株复制力最低,是野生株的19.3%,rtM204I+M250L基础上出现补偿突变(rtL80I、rtV173L和rtL180M)的变异株复制力较高,存在相同补偿突变的前提下,rtM204I基础上的耐药变异较rtM204V基础上的复制力低。TDF对各种类型ETV耐药变异病毒的复制力均有较强抑制作用(96.11%～99.90%)。结论与野生株相比,不同变异形式的ETV耐药变异株体外复制力均下降,TDF可有效抑制ETV耐药变异株复制,将是治疗ETV耐药患者的一种很好的选择。
- 李艳乐刘妍许智慧王晓陈丽戴久增姚增涛江玲张连峰徐东平炎研究室
- 关键词：乙型肝炎病毒突变抗病毒药抗药性
- 阿德福韦酯治疗失败的慢性乙型肝炎患者HBV反转录酶区新变异rtN236V的表型耐药特点分析被引量：9
- 2013年
- 目的鉴定1例阿德福韦酯(ADV)治疗失败的慢性乙型肝炎患者HBV反转录酶(RT)区的新变异rtN236V,并分析其表型耐药特点。方法从1例ADV治疗失败患者的血清中提取HBV DNA,采用巢式PCR扩增HBV RT区,将PCR产物克隆到pGEM-Teasy载体,转化JM109细胞。挑选34个阳性克隆进行DNA测序并分析耐药相关突变。构建1.1倍HBV野生株和耐药株重组载体,转染人肝癌细胞系HepG2细胞。转染4h后分别加入不同浓度的拉米夫定(LAM)、ADV、恩替卡韦(ETV)和替诺福韦(TDF),转染后第4天收集细胞培养液,采用实时荧光定量PCR法检测不同药物浓度作用下细胞培养上清中HBV DNA的产量,并分析其表型耐药特点。结果该例患者在接受ADV治疗15个月后出现病毒学突破和生化学突破,测序结果显示34个克隆中,20个(58.8%)为rtN236V变异株,11个(32.4%)为rtN236T变异株,2个(5.9%)为野生株,1个(2.9%)为rtA181V+N236V变异株。rtN236T、rtN236V和rtA181V+N236V变异株的相对病毒复制力分别为野生株的89.43%、83.60%和75.44%。表型耐药分析显示:rtN236T株、rtN236V株和rtA181V+N236V株对ADV的敏感性分别为野生株的1/4.75、1/3.10和1/5.10,但对LAM、ETV和TDF均敏感。结论在ADV长期治疗失败的慢性乙型肝炎患者血清病毒池中鉴定了新的变异形式rtN236V,并与rtN236T和rtA181V株伴随存在,该变异降低了病毒的复制力及对ADV的敏感性,可能是一个新的ADV耐药相关变异。
- 王晓刘妍思兰兰陈丽白文林刘立明王嫣许智慧戴久增姚增涛徐东平
- 关键词：肝炎病毒乙型病毒
- 替诺福韦酯对临床分离的各种恩替卡韦耐药HBV株的抑制作用分析
- 刘妍许智慧李艳乐王晓陈丽辛绍杰徐东平
