- 膀胱癌靶向肽NYZL1生物学作用及其特异性鉴定
- 目的： 1.体外实验验证NYZL1对膀胱癌细胞的增殖、迁移、凋亡等生物学行为的影响，为寻找靶向肽的受体提供参考信息。 2.利用免疫荧光技术，检测 FITC-NYZL1分子探针与膀胱癌细胞结合的特异性，为膀胱癌的靶向性...
- 罗芳
- 关键词：膀胱癌生物学特性特异性鉴定
- 利用体内噬菌体展示技术筛选膀胱癌特异性结合肽被引量：12
- 2015年
- 目的:利用体内噬菌体展示技术筛选与人膀胱移行细胞癌特异性结合的小分子多肽。方法:将人膀胱移行细胞癌细胞BIU87接种于裸鼠体内,制备膀胱癌荷瘤小鼠模型,尾静脉注射噬菌体展示环七肽库,然后筛选与膀胱移行细胞癌特异性结合的含外源多肽的噬菌体,经过3轮体内筛选后,免疫组织化学法及ELISA法鉴定单克隆噬菌体对BIU87的亲和力。提取阳性单克隆噬菌体单链DNA进行测序,并推导出外源多肽氨基酸序列,化学合成多肽、制备分子探针后采用激光扫描共聚焦显微镜术及流式细胞术鉴定多肽对膀胱癌细胞和组织的特异性。结果:3轮体内筛选后,噬菌体富集率达到4.334×102倍。免疫组化结果显示,肿瘤组织中噬菌体肽的含量随着每一轮筛选呈增长趋势,且结合逐渐增强,同时由于噬菌体经肝、肾代谢,可见肝脏结合大量非特异性的噬菌体。ELISA结果显示,随机挑选的30个单克隆噬菌体斑中,有24个阳性噬菌体,其中10个噬菌体对BIU87有较强的亲和力,对其测序并推导出3种多肽序列,重复率最高的序列CSSPIGRHC(8/10)命名为NYZL1。化学合成FITC-C6-NYZL1,通过激光扫描共聚焦显微镜术、流式细胞术均证明多肽NYZL1可以特异性结合膀胱癌细胞。结论:利用体内噬菌体展示技术筛选出了与人膀胱移行细胞癌特异性结合的小分子多肽NYZL1,为膀胱癌早期诊断和靶向治疗提供一定的理论依据。
- 罗俊茜张帆杨晓峰罗芳刘杰昊庞建智闫三华张小雷
- 关键词：噬菌体展示技术膀胱癌特异性结合肽
- 膀胱癌BIU-87细胞靶向超声纳米脂质微泡造影剂的制备及体外超声成像被引量：3
- 2016年
- 目的制备具有膀胱癌BIU-87细胞靶向结合的超声纳米脂质微泡造影剂,并观察体外靶向能力、检测其对细胞增殖的影响和体外超声成像效果。方法通过机械振动法制备纳米脂质微泡,用生物素-亲和素桥接法将NYZL1连接到纳米脂质微泡的表面制备靶向纳米脂质微泡造影剂,利用倒置显微镜观察其一般特性,Zate检测仪检测粒径大小和表面电荷,使用倒置显微镜来观察其体外靶向效果,用MTT法检测其不同浓度对细胞增殖的影响,使用超声诊断仪观察体外显影效果。结果膀胱癌BIU-87细胞靶向超声纳米脂质微泡呈圆形,分布均匀,无聚集;在体外靶向实验中,靶向纳米脂质微泡造影剂能高效特异性的结合在膀胱癌BIU-87细胞表面并沿细胞表面规则排列;不同浓度下两种微泡对细胞增殖无明显变化(P>0.05);体外超声成像实验中,靶向纳米微泡呈点状细密高回声。结论本实验成功制备膀胱癌BIU-87细胞超声纳米脂质微泡造影剂,能够在体外与膀胱癌BIU-87细胞特异性地靶向结合,两种微泡对细胞生长无明显影响且体外超声显像效果良好。
- 苏西西杨晓峰张帆罗芳贾凡李宏州潘佐
- 关键词：膀胱癌靶向超声造影剂
- 膀胱癌BIU-87细胞株导向肽NYZL1靶向性的实验研究被引量：2
- 2015年
- 目的 验证导向肽NYZL1与膀胱癌BIU-87细胞株及其移植瘤结合的靶向特异性.方法 2014年4-12月固相合成导向肽NYZL1及阴性对照肽svNYZL1,采用异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）标记,制备实验组荧光分子探针FITC-氨基己酸-CSSPIGRHC（FITC-NYZL1）和对照组荧光分子探针FITC-氨基己酸-CRIGSPHSC（FITC-svNYZL1）.向膀胱癌BIU-87细胞株悬液中分别加入两种探针孵育,用流式细胞仪检测细胞平均荧光强度值,明确探针的亲和作用.将膀胱癌BIU-87细胞株爬片,分别加入两种探针孵育,用激光共聚焦显微镜（laser scanning confocal microscope,LSCM）观察探针与细胞结合的荧光图像,明确其亲和作用的特异性.选取16只SPF级BALB/c-nu雄性裸鼠.3～4周龄.体质量15 ～ 18 g.成功构建膀胱癌BIU-87细胞荷瘤裸鼠模型.采用完全随机分组法分为2组,每组8只,经尾静脉分别注入两种探针.4h后,实验组和对照组各取5只,剖取肿瘤组织、心、肝、脾、肺、肾、膀胱和胆囊,光学分子成像系统观察肿瘤及各组织的荧光图像;24 h后,实验组和对照组各取3只荷瘤裸鼠,剖取肿瘤组织、心、肝、脾、肺、肾和膀胱,制作冷冻切片,LSCM下观察肿瘤及各组织的荧光图像.结果 流式细胞仪检查实验组和对照组的平均荧光强度值分别为50.34±3.63和17.72±1.57,差异有统计学意义（P＜0.05）.LSCM观察实验组细胞可见明显的绿色荧光,对照组细胞未见明显的绿色荧光.体内研究发现,光学分子成像系统观察肿瘤组织、胆囊及膀胱可见明显荧光,其余器官如心、肝、脾、肺和肾等未见明显荧光.LSCM观察下实验组的肿瘤组织中可见明显绿色荧光,而实验组其他器官（心、肝、脾、肺、肾和膀胱）和对照组肿瘤组织及器官中未见绿色荧光.结论 膀胱肿瘤导向肽NYZL1能够与膀胱癌BIU-87细胞株及其移植瘤靶向性结合,并可携带荧光素标记肿瘤组织.
- 庞建智闫三华杨晓峰苏西西罗芳李宏州罗俊茜张帆张小雷王东文
- 关键词：膀胱癌靶向性
- 靶向肽NYZL1对膀胱癌细胞生物学行为的影响
- 2018年
- 目的通过体外实验来研究靶向肽NYZL1对膀胱癌BIU-87细胞增殖、侵袭和迁移、细胞凋亡等生物学行为的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法、细胞划痕实验,研究靶向肽NYZL1对BIU-87细胞的增殖、侵袭和迁移能力的影响;使用流式细胞术,研究靶向肽NYZL1对膀胱癌细胞凋亡、周期分布的影响。结果MTT实验结果显示,NYZL1对膀胱癌细胞的增殖无明显抑制作用;细胞生长曲线显示,NYZL1不直接影响肿瘤细胞的生长;损伤修复实验结果显示,BIU-87细胞的迁移能力不受NYZL1的影响;流式细胞仪分析结果显示,NYZL1对BIU-87细胞的周期分布与凋亡结果均无明显影响。结论靶向肽NYZL1对膀胱癌BIU-87细胞的恶性生物学行为无显著影响。
- 贾昕罗芳赵量逯晓青姚红张帆杨晓峰
- 关键词：膀胱肿瘤微生物学BIU-87细胞
- FITC-NYZL1分子探针标记膀胱癌患者尿脱落细胞特异性的研究被引量：3
- 2015年
- 目的研究FITC-NYZL1分子探针标记尿脱落细胞的特异性,探索其在诊断和监测膀胱癌的临床应用价值。方法收集2014年8月至2015年1月山西医科大学第一医院66例膀胱癌患者尿液,选取12例膀胱炎患者和24名健康人作为对照。固相合成法制备探针FITC-NYZL1,将2h内的新鲜尿液离心、滴片,加入探针孵育,扫描激光共聚焦显微镜(LSCM)观察探针与细胞的结合率,同时取新鲜尿液进行瑞-吉染色。结果 FITC-NYZL1标记膀胱癌患者尿脱落细胞的阳性率为100%(66/66);不同临床分期患者尿脱落细胞的结合率有差异。对照组结合率很低,实验组与对照组间差异有统计学意义(P<0.001)。结论 FITCNYZL1分子探针标记结合膀胱癌细胞,特异性高,可提高膀胱癌患者尿脱落细胞的阳性率;FITC-NYZL1在分期不同的癌细胞中结合率不同,分期越高,荧光探针特异性结合率越高。FITC-NYZL1标记有望成为膀胱癌无创诊断和临床监测的新技术。
- 罗芳张帆罗俊茜姚红庞建智苏西西杨晓峰
- 关键词：膀胱癌尿脱落细胞
- 膀胱肿瘤导向肽NYZL1的体内外分子动力学特征被引量：1
- 2016年
- 目的探讨膀胱肿瘤导向肽NYZL1的功能及体内外分子动力学特征。方法采用竞争性抑制法检测其与细胞结合，噻唑蓝（MTr）法确定NYZLI的抗肿瘤功能；细胞免疫荧光技术、组织免疫荧光技术和活体荧光成像技术研究NYZL1-异硫氰酸荧光素（FITC）分子探针与肿瘤细胞结合的内化作用及探针在肿瘤微循环和全身器官的动态分布的动力学特征。结果单纯加入不同浓度组NYZL1-FITC荧光值为4／6．00±13．20、966．85±20．20和1751．45±16．40，先加入NYZL1再加入NYZL1-FITC荧光值为180．45±12．40、696．30±16．30、1253．24±11．50，组间差异有统计学意义（P〈0．05）；在25μmol／L和100μmol／L浓度下NYZL1和NYZL1-FITC组的吸光度（A）值分别为0．613±0．055、0．646±0．061和0．647±0．063、0．664±0．070，计算各组相对抑制率均低于30％；探针进入细胞，5min出现绿色荧光，10-20min时细胞核显影，4h细胞内荧光强度最强；静脉注射裸鼠后，探针一部分经肝胆循环和肾脏排泄，另外一部分经血液循环向肿瘤组织靶向浓聚，4-6h肿瘤组织浓聚达高峰，但探针在组织中的分布与肿瘤的血管分布密切相关，探针能够同时标记肿瘤血管和细胞。结论NYZL1不具有抗肿瘤效应，能够携带荧光染料进行膀胱肿瘤的靶向光学分子成像。
- 苏西西杨晓峰张帆庞建智闫三华罗俊茜罗芳
- 关键词：膀胱肿瘤
