张树栋
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 供职机构：中国农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省博士后基金国家教育部博士点基金国家奶牛产业技术体系项目更多>>
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- 鸭肠炎病毒gB N端(60～110aa)抗原优势区的原核表达及抗血清的制备
- 2015年
- 以本实验室已克隆的鸭肠炎病毒（DEV）C-KCE株ul27基因序列为模板,设计特异性引物,PCR扩增获得编码鸭肠炎病毒gB N端第60～110aa的目的基因片段,大小为150bp。将目的基因亚克隆至原核表达载体pET-32a（＋）中,阳性质粒被命名为pET-32a（＋）-gB-1。经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明,重组蛋白以包涵体形式表达,大小约为27ku。用Ni-NTA柱亲和层析获得纯化的重组蛋白,鸭抗DEV阳性血清经间接ELISA检测证实其具有抗原性,并以此为免疫原免疫家兔制备抗血清,经间接ELISA检测,抗血清效价为1∶25 600。应用间接免疫荧光及Western-blot分析制备的抗血清的反应性,均证实抗血清可特异性识别DEV gB蛋白。分别以重组蛋白和DEV超离病毒为检测抗原进行间接ELISA,检测DEV免疫鸭的抗体消长规律,结果显示两者的抗体变化趋势一致。以上结果表明,制备的抗血清可作为DEV检测的候选试剂,表达的重组蛋白可作为DEV抗体检测的诊断抗原。
- 曹春秋张树栋刘琪董井泉高明春张文龙许丽于长泳马波王君伟
- 关键词：鸭肠炎病毒GB原核表达抗血清
- 由沙门氏菌引起的犊牛腹泻病的实验室诊断及防治被引量：9
- 2017年
- 为了探究山西某规模化奶牛场犊牛腹泻病的发病原因及相应的综合防治措施,本研究通过对该场犊牛腹泻病发病情况进行调查,同时对可疑病原轮状病毒、冠状病毒、大肠杆菌F5(K99)、小球隐孢子虫、沙门氏菌进行实验室检测,分离并培养了可疑病原菌,并对该病原菌进行形态学和血清学鉴定,选取18种常见抗生素,通过药敏试验筛选对该菌敏感的抗生素。结果显示,经临床诊断和实验室检测基本排除大肠杆菌F5(K99)、轮状病毒、冠状病毒、小球隐孢子虫和球虫感染的可能性,分离的可疑菌具有沙门氏菌的菌落特征和细菌形态,并与沙门氏菌O多价血清A-F呈现阳性反应,确诊该病原主要为沙门氏菌。药敏试验结果显示,所分离的沙门氏菌对头孢曲松、庆大霉素、头孢拉定、阿米卡星等药物高度敏感,可推荐用于临床治疗。结合以上结果,本研究提出该病的具体防治措施,并取得了较好的防治效果。本研究初步为犊牛腹泻病中沙门氏菌病的诊断和防治提供了参考,对犊牛腹泻病病原的早期诊断和治疗具有重要的临床意义。
- 张树栋李豪万强徐发荣居马别克.夏拉巴依潘保良
- 关键词：犊牛腹泻沙门氏菌诊治
- 鸭肠炎病毒gB抗原优势区的表达及其多克隆抗体的反应特性被引量：4
- 2015年
- 拟制备鸭肠炎病毒(DEV)gB抗原优势区的多克隆抗体,初步应用于该病毒的检测。以本实验室克隆的DEVC-KCE株ul27基因序列为参考序列设计特异性引物,通过PCR获得DEV gB优势表位区域基因片段gB-AD(331—570bp),并在pET-32a(+)/Rosetta(DE3)pLysS系统中进行原核表达。经IPTG诱导获得与预期大小相符的重组蛋白质,以Ni-NTA柱亲和层析法纯化重组蛋白质,利用DEV阳性血清检测重组蛋白质的抗原性,并用切胶纯化的重组蛋白质免疫家兔,制备兔抗DEV gB-AD血清。结果显示,重组蛋白质可被DEV阳性血清特异性识别,制备的兔源多克隆抗体I-ELISA效价为1∶10 240,且其具有中和活性;兔源多克隆抗体在还原电泳条件下显示DEV gB的相对分子质量约为66ku,而在非还原电泳条件下DEV gB显示为相对分子质量约120和66ku的两条目的带,通过间接免疫荧光试验和中和试验进一步证实制备的兔源多克隆抗体可特异性识别鸭肠炎病毒感染细胞所合成的gB蛋白。结果表明,所制备的兔抗DEV gB-AD多克隆抗体可作为检测DEV的试剂,为DEV检测及gB的功能研究提供必要的基础数据和材料。
- 张树栋曹春秋董井泉高明春张文龙郑铁鑫马波王君伟
- 关键词：鸭肠炎病毒GB原核表达多克隆抗体
- 东北白鹅CD8α基因的克隆及其胞外区基因的表达与抗血清的制备
- 2015年
- 根据GenBank公布的绿头鸭CD8α(AF378373)基因序列设计引物,通过RT-PCR获得东北白鹅CD8α基因。根据测序结果设计特异性引物,克隆得到东北白鹅CD8α胞外区基因,并在pET-30a(+)及pET-28a(+)/Rosetta(DE3)pLysS系统中进行原核表达。经IPTG诱导重组蛋白质获得表达,Ni-NTA柱亲和层析获得纯化的重组蛋白质,以纯化的重组蛋白质(pET-30a-CD8ex)为免疫原制备兔抗鹅CD8α胞外区抗血清。I-ELISA、Western blot分析表明抗血清可特异识别分离获得的东北白鹅外周血T淋巴细胞与重组蛋白质(pET-28a-CD8ex),间接免疫荧光试验证实,纯化的抗血清可特异性识别瞬时真核表达的鹅CD8α胞外区蛋白质。利用激光共聚焦显微镜观察到分离获得的鹅外周血淋巴细胞的细胞膜处出现明显的荧光信号。本研究结果说明制备的抗血清可作为鹅CD8+T淋巴细胞的检测试剂。
- 张雪莲魏双施刘晓玫邵建伟张树栋李珊珊高明春张文龙邢育钢马波王君伟
- 关键词：东北白鹅CD8Α基因表达T淋巴细胞
- 牛传染性鼻气管炎病gB蛋白的截短表达及间接ELISA方法的建立被引量：6
- 2015年
- 为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）的间接ELISA方法,本研究根据Gen Bank登录的IBRV全基因组序列,设计引物扩增糖蛋白B（g B）基因编码第190～524氨基酸残基（aa）的基因,构建重组质粒p ET-g B进行原核表达。SDS-PAGE结果显示目的蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达,大小约为40 ku。Western blot鉴定表明目的蛋白具有良好的反应原性。以纯化的g B蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA检测方法,该方法敏感性好,特异性强,与其他病原血清无交叉反应,其组内组间变异系数均低于11%。与IDEXX公司的g B-ELISA试剂盒进行对比,阳性符合率为84.28%,阴性符合率为85.71%。采用本研究建立的方法对黑龙江省10个农场的血清样品进行了IBR的流行性调查,阳性率最高为65.52%,最低为5.56%,平均阳性率为18.01%。本研究建立的ELISA方法为进出口检疫和该病防制工作提供一种可选方法。
- 曹翀曹永生宋林高明春彭统全张树栋王君伟
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒原核表达间接ELISA
- 鸭肠炎病毒主要囊膜糖蛋白复合表位的制备及间接ELISA方法建立和初步应用
- 鸭病毒性肠炎(duck viral enteritis，DVE)是由鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus，DEV)引起的一种急性、热性、败血性高度传染性疾病，给水禽养殖造成巨大的经济损失。目前，常用的鸭病...
- 张树栋
- 关键词：鸭肠炎病毒囊膜糖蛋白酶联免疫吸附测定
- 文献传递
