邓鹏
- 作品数：16 被引量：58H指数：5
- 供职机构：中国人民解放军第一军医大学基础部全军休克微循环重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- iNOS红色荧光蛋白报告基因载体的构建及其在细胞中的表达被引量：1
- 2003年
- 目的 :构建iNOS启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体 ,为研究细胞内iNOS的基因表达调控和相关的信号转导机制提供重要工具。方法 :采用基因重组技术构建了含iNOS启动子区的红色荧光蛋白报告基因载体pDsRed1- 1-iNOSp ;用脂质体瞬时转染NIH3T3细胞 ,观察iNOS启动子对脂多糖 (LPS)刺激的反应。结果 :酶切和DNA测序证明所构建的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的 ;该表达载体在NIH3T3细胞静息状态下表达水平很低 ,经LPS刺激后 ,在荧光显微镜下可看到高亮度的红色荧光。结论 :所构建的iNOS启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的 ,对生理相关刺激有很好的反应 ,可有效地用于iNOS基因表达信号调控机制的研究。
- 刘志锋阚文宏秦清和邓鹏王静珍姜勇
- 关键词：一氧化氮合酶红色荧光蛋白基因基因
- 用T7噬菌体筛选系统筛选TLR4胞浆内段的结合蛋白
- 为了研究hTLR4的功能及筛选与其相互作用的蛋白,以hTLR4胞浆内段为靶蛋白,通过结合→洗脱→扩增3个步骤,用T7噬茵体展示筛选系统筛选了人肺cDNA文库,结果获得了9个与靶蛋白hTLR4C有结合关系的序列,其中6个克...
- 刘靖华赵克森姜勇李志杰刘亚伟赵善超黄浩龚小卫秦清和邓鹏孙学刚
- 关键词：TOLL样受体4蛋白质相互作用噬菌体结合蛋白
- 文献传递
- 人Toll样受体4胞浆内段融合蛋白表达载体的构建与表达被引量：3
- 2003年
- 目的 :构建人 Toll样受体 4胞浆内段 ( h TL R4C) His融合蛋白表达载体并在原核表达与纯化 ,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增 h TL R4基因编码区的胞浆内段 ,并将其重组于 p ET Dsb A2 .0载体中。重组质粒经酶切、序列鉴定分析后 ,转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3)。结果 :用异丙基β D硫代半乳糖 ( IPTG)诱导产生 h TL R4胞浆内段的 His Dsb A融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 42 kd的融合蛋白。结论 :本研究成功地构建了 h TL R4胞浆内段融合蛋白表达载体并获得高效表达 ,为进一步研究提供了重要的实验材料。
- 刘靖华孙学刚李志杰秦清和龚小卫邓鹏刘亚伟王静珍赵克森姜勇
- 关键词：TOLL样受体融合蛋白蛋白表达
- 用T7噬菌体展示筛选系统筛选与p38相结合的蛋白被引量：13
- 2003年
- 目的用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38 MAPK结合的蛋白。方法以p38 MAPK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断,回收PCR产物并进行测序,将所得到的序列用BLAST软件搜索GenBank中的同源序列,得到了46个编码蛋白的序列。结论T7噬菌体展示筛选系统筛选新的结合蛋白简单、快速、有效。
- 李志杰刘靖华龚小卫秦清和黄浩邓鹏王静珍孙学刚赵善超刘亚伟赵克森姜勇
- 关键词：P38结合蛋白靶蛋白
- TLR4全长及其截断体重组腺病毒的制备和功能鉴定被引量：1
- 2004年
- 制备脂多糖 (LPS)Toll样受体 4 (TLR4 )全长及其胞内段缺失的TLR4截断体 (ΔTLR4 )的绿色荧光蛋白重组腺病毒并鉴定其功能 .用PCR方法扩增TLR4及ΔTLR4基因片段 ,酶切后亚克隆至腺病毒穿梭质粒中 ,形成带有目的基因的穿梭载体pAdTrack TLR4和pAdTrack ΔTLR4 .用BJ5 1 83细菌同源重组法将目的基因重组于腺病毒骨架载体中 ;将重组腺病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后 ,用脂质体法转染HEK 2 93细胞进行腺病毒的包装扩增 .将重组腺病毒感染CHO K1细胞 ,采用荧光毒酶报告基因方法检测其对LPS诱导NF κB激活的影响 .酶切及测序表明 ,TLR4全长及其截断体ΔTLR4的重组腺病毒载体构建正确 .荧光素酶报告基因检测结果表明 ,TLR4全长及其截断体的重组腺病毒感染细胞对LPS诱导的反应具有不同的影响 ,Ad ΔTLR4明显抑制了LPS引起的NF κB激活 (P <0 0 5 ) ,Ad TLR4则使LPS引起的NF κB活性增强 (P <0 0 5 ) .
- 宋革孙学刚秦清和邓鹏刘靖华姜勇
- 关键词：腺病毒报告基因NF-KB
- p38 MAPK在细胞内的定位及其对LPS刺激的反应被引量：1
- 2001年
- 姜勇龚小卫张琳秦清和王静珍邓鹏郭爱华孙学刚
- 关键词：丝裂原活化蛋白激酶P38MAPK细胞定位LPS
- 人内皮细胞一氧化氮合酶红色荧光蛋白报告基因载体的构建与表达被引量：4
- 2002年
- 目的 研究血管壁切应力诱导的人血管内皮细胞内皮细胞一氧化氮合酶 (eNOS)基因表达的调控机制 ,构建在哺乳动物细胞中表达的eNOS红色荧光蛋白报告基因载体。方法 从人脐静脉内皮细胞基因组DNA中克隆eNOS启动子 ,将其构建到红色荧光蛋白载体pDsRed1 1上 ,经PCR、酶切和DNA测序鉴定后将重组载体转染 2 93细胞 ,在荧光显微镜下观察其在细胞内的表达和分布情况。结果 PCR、酶切和DNA测序结果均表明重组载体pDseNOSRed的构建正确 ,该载体能在 2 93细胞中高效表达。由eNOS启动子驱动表达的红色荧光蛋白大部分均匀分布于整个细胞中 ,转染后 1 2h开始出现 ,36～ 48h为表达高峰 ,1 2 0h后红色荧光几乎全部消失。结论 成功构建了eNOS红色荧光蛋白报告基因载体 ,该载体能在哺乳动物细胞中高效表达 。
- 邢飞跃赵克森秦清和王静珍邓鹏姜勇
- 关键词：一氧化氮合酶一氧化氮内皮细胞休克血管狭窄内皮细胞
- 人ARPC2基因的克隆与表达
- 2004年
- 目的构建人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中进行表达与纯化,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法采用PCR方法从人肝cDNA文库扩增ARPC2基因编码区,使用常规酶切、连接方法将其重组至pET-14b载体中。对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。转化BL21(DE3)大肠杆菌株,用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化该融合蛋白。结果所构建的人ARPC2的His融合蛋白表达载体是正确的,该载体可在大肠杆菌内高效表达,用Ni-NTA纯化获得了相对分子质量约36 000的融合蛋白。结论成功构建了人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中获得了高效表达和纯化,为进一步研究ARPC2的生理功能提供了重要的实验材料。
- 龚小卫彭毅刘靖华李志杰邓鹏秦清和姜勇
- 关键词：基因表达蛋白纯化
- 肿瘤坏死因子α通过丝裂原活化蛋白激酶激酶6诱导LA795肺腺癌细胞凋亡被引量：3
- 2003年
- 目的 为了研究肿瘤坏死因子α(TNF α)诱导肺癌细胞凋亡的分子机制 ,寻找肺癌基因治疗的新方法。方法 建立TNF α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡的细胞模型 ;使用人胚肾 2 93包装细胞制备丝裂原活化蛋白激酶激酶 6 (mitogen activatedproteinkinasekinase 6 ,MKK6 )及其结构活性和无活性突变体的重组腺病毒 ;使用激酶活性测定法检测细胞内MKK6的激酶活性。结果 TNF α刺激可明显诱导LA795肺腺癌细胞MKK6激活 ;用TNF α刺激肺腺癌细胞可明显诱导细胞凋亡 ;MKK6结构活性突变体也可明显诱导LA795细胞凋亡 ;而MKK6无活性突变体可明显抑制TNF α诱导的LA795细胞凋亡。结论 TNF α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡是通过MKK6发挥作用的 。
- 刘爱华邓鹏姜勇
- 关键词：肿瘤坏死因子Α丝裂原活化蛋白激酶肺腺癌细胞凋亡
- p38丝裂原激活蛋白激酶对人胚胎肾293细胞一氧化氮合酶基因转录的调控被引量：8
- 2003年
- 目的探讨p38 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)家族四种亚型对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的转录调控。方法以人胚胎肾293(HEK 293)细胞为靶细胞,采用脂质体(LPS)介导的细胞基因共转染技术、荧光素酶报告基因技术,分别将FLAG-tagged p38 MAPK 4种亚型、含有鼠iNOS基因启动子区的荧光素酶报告基因质粒(piNOS-Luc)、空载体(pcDNA3)、β-半乳糖苷酶表达质粒(pCMV-β)共转染,检测并比较荧光素酶相对活性。结果(1)未加刺激时,在HEK 293细胞中,p38 MAPK中仅有p38α能够诱导iNOS基因启动子的转录活性;(2)在LPS刺激下,p38 MAPK 4种亚型均能够诱导iNOS启动子的转录活性,其中,p38β所诱导的转录活性最高,p38α的诱导作用亦很明显。结论(1)LPS能够在HEK 293细胞中诱导iNOS基因转录活性;(2)在HEK 293细胞中,p38 MAPK参与了静息时及LPS刺激下对iN-OS基因的转录调控。
- 郭爱华龚小卫阚文宏秦清和邓鹏王静珍姜勇
- 关键词：一氧化氮合酶P38丝裂原激活蛋白激酶酶学转录共转染
