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邓鹏: 作品数：76 被引量：149H指数：7; 供职机构：南方医科大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：生物学医药卫生农业科学文化科学更多>>

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pNTAP-MK2真核表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立: 2010年; 目的构建pNTAP-MK2真核表达质粒,并建立其稳定表达的HEK293细胞系。方法将MK2亚克隆至串联亲和纯化载体pNTAP质粒上,构建成重组质粒pNTAP-MK2,转化该重组质粒至感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆进行PCR、酶切及DNA测序验证正确后,利用脂质体PolyFect介导将其转染至HEK293细胞中,再通过G418筛选建立稳定表达TAPtag-MK2融合蛋白的HEK293细胞系;利用Western blotting和细胞免疫荧光标记法检测融合蛋白TAPtag-MK2的表达及细胞内定位情况。结果重组真核表达载体构建正确,该重组质粒能在HEK293细胞中稳定表达,表达产物TAPtag-MK2主要分布在核内。结论成功构建pNTAP-MK2真核表达载体并建立了其稳定表达的HEK293细胞系,TAP标签未对MK2定位产生明显影响。; 王达安龚小卫刘爱华梅柱中王丹明小燕王旭魏洁邓鹏姜勇; 关键词：真核表达载体分子克隆基因表达

p53基因敲除对细胞迁移的影响被引量：1: 2007年; 目的研究p53基因敲除对细胞迁移的影响。方法观察p53+/+和p53-/-细胞中血清诱导的板状伪足形成情况,以及利用Transwell细胞迁移系统观察p53基因敲除对血清诱导的细胞迁移的影响。结果在血清诱导下,p53+/+细胞能形成板状伪足和进行迁移,而p53-/-细胞中板状伪足的形成和细胞迁移都被阻断。结论p53在血清诱导的细胞迁移中具有重要作用。; 龚小卫魏洁李煜生程蔚蔚王旭邓鹏姜勇; 关键词：P53 基因敲除细胞迁移

利用RNAi技术抑制ARPC2基因表达的研究被引量：1: 2004年; 目的　构建pSUPER ARPC2表达载体 ,并在真核细胞中进行表达 ,验证ARPC2基因表达是否受到抑制。方法　设计特异性针对ARPC2基因的寡核苷酸序列 ,退火后利用常规酶切、连接方法将其重组至pSUPER .basic载体中。对阳性克隆进行酶切和测序鉴定后 ,转染HEK 2 93细胞 ,利用RT PCR和Westernblot检测ARPC2基因的表达情况。结果　构建的pSUPER ARPC2载体导入HEK 2 93细胞时 ,ARPC2基因的表达受到抑制 ,蛋白合成减少。结论　成功构建了ARPC2的RNAi表达载体 ,并证实其能对ARPC2基因的表达产生抑制作用 ,为进一步研究ARPC2的生理功能提供了重要的实验材料。; 龚小卫彭毅刘靖华邓鹏刘志锋秦清和姜勇; 关键词：HEK293细胞蛋白合成 RNAI技术阳性克隆

无POU域八聚体结合蛋白基因的克隆及其在Hepa1-6细胞内的表达: 2010年; 目的构建小鼠无POU域八聚体结合蛋白(non-POU-domain-containing,octamer binding protein,NonO)真核表达载体并在小鼠Hepa 1-6肝癌细胞内表达,观察NonO胞内表达、定位及脂多糖(LPS)对其定位的影响。方法提取小鼠肝组织总RNA,RT-PCR扩增小鼠NonO基因的蛋白编码序列。采用基因重组技术将其亚克隆至pcDNA3-HA真核表达载体中,将该载体瞬时转染Hepa1-6细胞,通过细胞免疫荧光方法观察NonO的胞内表达及LPS对其定位的影响。结果酶切和DNA测序证明所构建质粒正确;细胞免疫荧光可见NonO在Hepa 1-6细胞内表达、分布于细胞核,LPS刺激后NonO分布无明显变化。结论成功构建NonO真核表达载体,为研究NonO在基因表达调控中作用及其生物功能提供了重要载体。进一步证实NonO为定位于细胞核的核蛋白。; 张秀娟王娟邓鹏姜勇; 关键词：蛋白表达蛋白定位

人可溶性晚期糖基化终产物受体的原核表达及活性鉴定被引量：3: 2005年; 目的构建人可溶性晚期糖基化终产物受体(hsRAGE)His融合蛋白表达载体并在原核细胞表达与纯化。方法PCR扩增hRAGE基因编码区的胞质外段,利用分子克隆技术将其重组于pET-14b载体中。利用酶切、序列分析鉴定克隆正确性。转化大肠杆菌BL21(DE)3,用异丙基b-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达。以尿素对获得的包涵体进行处理,用金属螯合亲和层析的方法纯化融合蛋白并进行复性。以Western印迹和ELISA法对融合蛋白的免疫原性及与AGE的结合活性进行鉴定。结果克隆的hsRAGE完全正确,经过表达与纯化,获得了相对分子质量约45000的融合蛋白。纯化得到的变性蛋白经复性后可被相应抗体识别。所得到的hsRAGE具有与AGE相互结合的活性,并能够抑制AGE诱导的内皮细胞NF-kB的表达。结论成功地构建了hsRAGE融合蛋白原核表达载体且获得高效表达,得到大量的复性蛋白;该蛋白具有特异的免疫原性,保持与AGE的结合活性,并能够有效阻断AGE-RAGE相互作用。; 赵善超姜勇刘靖华李志杰邓鹏张桂林刘志强张训侯凡凡郑少斌; 关键词：晚期糖基化终产物

His标记的小鼠线粒体转录因子A的克隆和表达纯化及其多克隆抗体的制备: 2005年; 目的表达和纯化带His标记的小鼠线粒体转录因子A(mitochondrialtranscriptionfactorA,mtTFA)融合蛋白,并制备mtTFA的特异性多克隆抗体。方法提取正常BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR方法扩增出无信号肽的mtTFA编码序列,克隆入经KpnⅠ和BamHⅠ酶切后的pET14b。酶切及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后用镍离子亲和树脂(Ni2+-NTAHis·BindResin)纯化融合蛋白。用纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果成功克隆出了mtTFA的编码序列,并构建了带His标记的小鼠mtTFA融合蛋白的重组表达质粒pET14b/His-mtTFA。表达的融合蛋白经亲和树脂纯化后得到大量的高纯度目的蛋白,获得了高特异性兔抗血清。结论获得了His标记的小鼠mtTFA原核表达载体,纯化得到高纯度的目标蛋白,并制备出高特异性兔抗血清,对进一步研究其生物学功能及调节细胞核同线粒体之间功能协同性的信号通路有重要意义。; 刘志锋邵紫韫徐佳刘靖华邓鹏姜勇; 关键词：线粒体转录因子A 融合蛋白基因克隆蛋白表达

整合素α_v重组腺病毒的构建和鉴定及对人肝癌细胞黏附特性的影响: 2006年; 目的构建表达人整合素αv亚基(整合素αv)重组腺病毒,并在人肝癌细胞株SMMC7721细胞中表达,探讨整合素αv对肝癌细胞黏附特性的影响。方法将人整合素αvcDNA克隆到腺病毒穿梭质粒pAd-Track巨细胞病毒(CMV)启动子下游,与腺病毒骨架质粒pAdEasy1在细菌内同源重组,在HEK293A细胞中包装成整合素αv重组腺病毒。以重组腺病毒感染SMMC7721细胞24h后,用蛋白质免疫印迹法(West-ernblot)检测整合素αv的表达;通过黏附实验研究其对SMMC7721细胞黏附的影响。结果构建了整合素αv重组腺病毒载体并制备出高滴度重组腺病毒。重组腺病毒感染SMMC7721细胞后,整合素αv能够正确表达,并且SMMC7721细胞黏附率显著高于对照组和空白组(P<0.01)。结论整合素αv基因在SMMC7721细胞的黏附中起重要作用,是肿瘤转移的重要分子基础。; 李旭艳刘靖华李志杰莫永炎刘亚伟刘志锋邓鹏姜勇; 关键词：整合素细胞黏附腺病毒载体

MK2不同突变体的构建、表达及细胞内定位的研究被引量：2: 2008年; 目的:为了研究MAPK激活蛋白激酶2(MAPK-activated protein kinase 2,MK2)细胞内定位与其功能的关系,构建了MK2不同突变体的绿色荧光蛋白融合表达载体并观察这些突变体在细胞内的定位情况。方法:将克隆在绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上的野生型MK2(WT)通过定点突变技术构建其无活性突变体MK2(320A)和活性突变体MK2(320E),转染NIH3T3细胞,并在荧光显微镜下观察其细胞内定位情况。结果:各种MK2不同突变体经测序鉴定正确后,在NIH3T3细胞中得到高量表达。融合蛋白发出的绿色荧光表明,在静息状态下,MK2(WT)主要分布于细胞核内,MK2(320E)主要分布于细胞质内,而MK2(320A)在细胞核和细胞质中都有分布。在受到紫外线(UV)刺激后,MK2(WT)和MK2(320A)移位出核,而MK2(320E)的细胞内定位则没有发生明显的改变。结论:成功构建了绿色荧光蛋白标记的MK2不同突变体并在真核细胞中进行了表达,观察到不同突变体对MK2细胞内定位的影响。; 魏洁龚小卫明小燕王旭王达安邓鹏姜勇; 关键词：蛋白激酶类突变细胞内定位 P38丝裂原活化蛋白激酶

KCNE2的两种突变体I57T和V65M对Kv4.3通道功能的调节被引量：1: 2008年; Mink相关蛋白1(MiRP1)是由KCNE基因家族成员KCNE2编码的具有一个跨膜结构的小分子蛋白质,发生在KCNE2上的相关突变能够引起遗传性长QT间期综合症(long QT syndrome,LQT6),但其机制不明.以往的工作表明,MiRP1调节瞬间外向钾电流(transient outward current,Ito)的功能,对维持心电稳定性具有重要的调节作用.在哺乳细胞系COS-7表达系统利用膜片钳全细胞记录方式,研究了两种LQT6相关的突变体I57T和V65M对Kv4.3通道功能的影响,从MiRP1对Ito功能调控的改变探讨LQT6引起心律失常的电生理机制.结果表明,KCNE2与Kv4.3共表达后对通道功能具有明显的调控作用,使通道的激活和失活明显减慢,电压依赖性失活发生正向移位,同时加快Kv4.3通道从失活中的恢复.I57T与Kv4.3共表达的通道,门控动力学以及通道的恢复特性更接近Kv4.3单独表达的通道,表现为丧失KCNE2的功能——"loss of function",而V65M的作用则与之刚好相反,对Kv4.3门控动力学和恢复特性的调节较KCNE2更强,同时,使通道电流密度明显降低,表现为增强KCNE2的功能——"gain of function".由此推论,KCNE2对Ito功能有重要的调节作用,发生在KCNE2基因上的突变,无论是增强(V65M)还是减弱(I57T)KCNE2的功能都可能通过改变Ito在心脏电稳定性中的贡献,从而使心脏在某些条件下发生心律失常.; 刘文娟邓鹏程蔚蔚邓建新潘秉兴姜勇刘杰; 关键词：瞬间外向钾电流突变

p38丝裂原活化蛋白激酶基因敲除对小鼠胚胎成纤维细胞增殖的影响: 2008年; 目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）基因敲除对小鼠胚胎成纤维细胞增殖的影响。方法用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测小鼠胚胎成纤维细胞中p38制^＋/＋和p380^-/-的表达；利用噻唑蓝（MTT）比色法绘制p38^＋/＋和p38^-/-细胞的生长曲线，用流式细胞仪检测细胞周期各时相所占百分比。结果绘制的生长曲线表明，p38^-/-细胞的生长速率明显下降，增殖受到抑制，细胞倍增时间延长，培养96h时，p380^-/-细胞数量较p38^＋/＋减少了15．5％，说明p38基因敲除明显抑制了G2／M的进程。流式细胞仪检测结果显示，p3^＋/＋。细胞中G0／G1期细胞占34．47％，G2／M期占10．81％，S期占54．72％；p380^-/-细胞中G0／G1期占48．49％，G2／M期占4．06％，S期占47．44％。与p38^＋/＋细胞相比，G1期的p380^-/-细胞增加了40．7％，S期则减少了13．3％，说明p38基因敲除抑制了G1／S的进程。结论p38基因敲除能够阻滞细胞周期进展，减慢细胞增殖速度。; 龚小卫魏洁李煜生程蔚蔚邓鹏姜勇; 关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶基因敲除细胞增殖

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