袁杰
- 作品数：7 被引量：23H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 整合素β1基因shRNA慢病毒载体构建及其对乳腺癌他莫昔芬耐药细胞迁移和侵袭能力的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:构建整合素β1(integrinβ1,ITGβ1)基因干扰慢病毒载体,并研究ITGβ1对他莫昔芬耐药乳腺癌MCF-7细胞(Tamoxifen-resistant MCF-7,MCF-7R)的迁移和侵袭能力的影响。方法:针对ITGβ1靶序列设计合成4条sh RNA序列及1条阴性对照序列NC,构建ITGβ1RNAi慢病毒载体及对照病毒载体,并分别进行病毒包装,通过内源性筛靶,选取干扰效果最好的组病毒感染MCF-7R细胞,Western blot检测ITGβ1蛋白的表达水平;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果:成功构建4条慢病毒干扰重组质粒,并分别包装成病毒,通过内源性筛靶挑选出干扰效果最佳的慢病毒组,感染MCF-7R细胞后ITGβ1基因的蛋白表达量较NC组明显降低(P=0.000),且细胞的迁移和侵袭能力明显弱于NC组(P=0.000)。结论:慢病毒介导的sh RNA可有效地干扰MCF-7R细胞中ITGβ1的表达,并且抑制MCF-7R细胞的迁移和侵袭能力。
- 袁杰涂刚陈茂山朱庆杨丽成宏杨光伦
- 关键词：整合素Β1慢病毒乳腺癌
- 他莫昔芬抑制G蛋白偶联雌激素受体沉默的乳腺癌相关成纤维细胞的增殖并促进其凋亡被引量：6
- 2015年
- 目的通过构建G蛋白偶联雌激素受体(GPER)的慢病毒短发夹RNA(shRNA)表达载体,感染人乳腺癌相关成纤维细胞(BCAF)后,探讨他莫昔芬对BCAF增殖及凋亡的影响。方法构建GPER-RNAi慢病毒载体及对照病毒载体后,进行病毒包装,实时定量PCR检测GPER mRNA水平,Western blot法检测GPER蛋白水平;将BCAF分为4个组,包括阴性对照组、GPER-RNAi组、阴性对照联合10-8mmol/L他莫昔芬组和GPER-RNAi联合10-8mmol/L他莫昔芬组,CCK-8法检测他莫昔芬处理后细胞增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测他莫昔芬处理后的细胞凋亡情况。结果 Western blot结果显示感染慢病毒的BCAF中,GPER表达显著降低。与阴性对照相比,CCK-8法检测结果显示他莫昔芬显著促进BCAF增殖。GPER敲低的BCAF,他莫昔芬的促增殖作用减弱;流式细胞术检测结果显示,他莫昔芬抑制BCAF凋亡,但在GPER敲低的BCAF,他莫昔芬的抑制细胞凋亡作用减弱。结论 Lenti-GPER-shRNA慢病毒感染BCAF,可有效沉默GPER表达;GPER敲低的BCAF,他莫昔芬刺激细胞增殖和抑制凋亡作用减弱。
- 严玉钊余腾骅涂刚柳满然袁杰杨光伦
- 关键词：他莫昔芬
- S100p促进乳腺癌MCF-7细胞他莫西芬耐受和细胞迁移被引量：3
- 2014年
- 目的采用基因芯片技术检测乳腺癌MCF-7细胞系他莫昔芬(Tamoxifen,TAM)耐受的差异表达基因,探讨S100p对MCF-7细胞TAM耐受和细胞迁移能力的影响。方法提取MCF-7和耐药型MCF-7(简称MCF-7R)细胞系总RNA,应用安捷伦(Agilent)基因芯片检测二者差异表达基因。随机选取差异表达基因,应用实时定量PCR(qRT-PCR)技术验证;基因干扰技术下调MCF-7R细胞系S100p的表达,研究S100p对细胞耐药与迁移能力的影响;生存曲线(KM plot)分析过表达S100p与乳腺癌患者无复发生存率(relapse free survival,RFS)及无远处转移生存率(distant metastasis free survival,DMFS)的相关性。结果检测出显著差异基因4 108个,与MCF-7细胞系相比,MCF-7R上调表达1 983个,下调2 025个。S100钙结合蛋白家族基因多个成员均有显著差异表达;与MCF-7相比,MCF-7R细胞系中S100p mRNA和蛋白表达显著上调,干扰其蛋白表达后,MCF-7R TAM耐受性明显降低(P<0.01),细胞迁移能力显著减弱(P<0.01);KM plot分析与低表达S100p乳腺癌患者比较,高表达患者RFS(P<0.01)及DMSF(P=0.01)均显著降低。结论 S100p能够促进乳腺癌细胞TAM耐受和增强细胞迁移能力。
- 付伟杰杨光伦涂刚李振华罗浩军袁杰
- 关键词：S100P迁移
- p53在乳腺癌中的表达及其临床意义被引量：8
- 2014年
- 目的探讨p53蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法收集该科收治的214例乳腺癌患者的临床病理资料,回顾性分析p53蛋白表达情况及其与临床病理特征的相关性。结果 p53蛋白阳性率为52.3%;p53阳性表达与患病年龄、病灶大小无相关性(P>0.05),与淋巴结转移状态、肿瘤组织学分级及分子分型呈正相关(r=0.396、0.309、0.167,P=0.000、0.000、0.014),与雌激素受体、孕激素受体的表达呈负相关(r=-0.561、-0.315,P=0.000、0.000),与人表皮生长因子受体2及Ki-67的表达呈正相关(r=0.374、0.153,P=0.000、0.026);三阴型与非三阴型中p53蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论p53与乳腺癌生物学特性密切相关,检测乳腺癌中p53的表达可作为指导临床治疗和判断预后的参考指标。
- 陈茂山袁杰成宏杨光伦
- 关键词：乳腺肿瘤预后
- 新型雌激素受体GPER在乳腺癌MCF-7细胞他莫昔芬耐药中的作用及机制被引量：6
- 2015年
- 目的研究乳腺癌他莫昔芬耐药细胞MCF-7R中新型雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)对促凋亡蛋白Bim的影响及其机制。方法倒置显微镜下观察MCF-7和MCF-7R经过浓度为1μmol/L的他莫昔芬(tamoxifen,TAM)处理后细胞形态的变化;qRT-PCR检测人乳腺癌细胞MCF-7及其他莫昔芬耐药株MCF-7R中促凋亡蛋白Bim(Bcl-2L11)的mRNA表达水平,Western blot检测两种细胞株Bim蛋白表达水平和两种细胞中总的GPER和膜上GPER的表达水平;两种细胞中分别以(无水乙醇、TAM、GPER特异性抑制剂G15+TAM、GPER特异性激动剂G1)处理后,检测Bim的蛋白表达水平;MCF-7R细胞中分别抑制PI3K-Akt及MAPK/Erk两条信号通路后,再加入TAM,检测Bim的蛋白水平;流式细胞术检测细胞凋亡。结果倒置显微镜下发现MCF-7细胞经TAM处理后细胞大部分变透亮且悬浮,而MCF-7R无明显变化;MCF-7R细胞中促凋亡蛋白Bim的mRNA水平及蛋白水平较MCF-7都降低(P<0.05);耐药细胞中总GPER的蛋白表达量较MCF-7无明显变化而膜上的表达量升高(P<0.05);MCF-7经TAM处理后,Bim蛋白表达量增加(P<0.05),而MCF-7R中却无明显变化,但在MCF-7R中加入GPER特异性抑制剂G15后再用TAM处理,Bim蛋白水平增加(P<0.05);耐药细胞中PI3K/AKT及MAPK/Erk信号通路处于活化状态,抑制MAPK/Erk信号通路后再加入TAM,耐药细胞中促凋亡蛋白Bim的表达量增加(P<0.05);在MCF-7中加入TAM后细胞凋亡率明显升高(P<0.05),MCF-7R经TAM处理后无明显差异,但抑制GPER或Erk信号通路后,再加入TAM处理,细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。结论乳腺癌TAM耐药细胞MCF-7R中TAM作为GPER的激动剂,活化信号通路MAPK/Erk抑制Bim表达。抑制GPER或MAPK/Erk信号通路,可使耐药细胞对TAM恢复敏感性。
- 朱庆伍俊仪袁杰杨海兵陈茂山杨光伦
- 关键词：乳腺癌BIM
- 人乳腺癌MCF-7他莫昔芬耐受细胞株EMT表型的鉴定及其机制的初步研究被引量：2
- 2014年
- 目的观察乳腺癌细胞MCF-7发生他莫昔芬耐受后细胞形态的变化及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)现象,并初步研究其机制。方法免疫荧光染色观察乳腺癌细胞MCF-7及其他莫昔芬耐药株MCF-7R细胞的形态;qRT-PCR、Western blot检测两种细胞EMT相关标志蛋白的表达;Transwell法检测两种细胞的迁移能力;分别抑制PI3K-Akt及MAPK/Erk信号通路,检测MCF-7R细胞的迁移能力及EMT表型的变化。结果 MCF-7细胞间的联系紧密,发生他莫昔芬耐受后,细胞间隙明显增大;MCF-7细胞发生他莫昔芬耐受后迁移能力明显增强,并发现E-钙粘素(E-cadherin)分布从细胞膜向细胞质转移,波形蛋白(vimentin)及纤维粘连蛋白(fibronectin)表达水平明显升高(P<0.05);在耐药细胞中PI3K-Akt及MAPK/Erk信号通路均处于异常活化状态,抑制PI3K-Akt信号通路能明显抑制细胞的迁移能力,同时能使波形蛋白和纤维粘连蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论乳腺癌MCF-7细胞发生他莫昔芬耐受后其迁移能力增强可能与其发生EMT样表型有关。
- 袁杰杨丽陈茂山朱庆付伟杰成宏柳满然杨光伦
- 关键词：乳腺癌上皮-间质转化
- ITGB1基因shRNA慢病毒载体构建及其对乳腺癌他莫昔芬耐药细胞的迁移和侵袭能力的影响
- 目的:构建整合素β1(integrinβ1,ITGB1)基因干扰慢病毒载体,并研究ITGB1对他莫昔芬耐药乳腺癌MCF-7细胞(MCF-7R)的迁移和侵袭能力的影响.
方法:针对ITGB1靶序列设计合成4条sh...
- 袁杰涂刚陈茂山朱庆杨丽成宏杨光伦
- 关键词：乳腺癌MCF-7细胞整合素Β1慢病毒
- 文献传递
