韩月恒
- 作品数：21 被引量：140H指数：7
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队“十五”科研基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 虎仗提取物白藜芦醇诱导胃癌细胞HGC27凋亡被引量：8
- 2004年
- 目的 :观察虎仗提取物白藜芦醇对胃癌细胞HGC2 7细胞周期和增殖的影响及凋亡诱导作用 .方法 :采用MTT法和软琼脂集落形成实验观察白藜芦醇对细胞增殖的影响 ,Annxin V&PI染色及流式细胞仪检测观察白藜芦醇对细胞周期的影响及诱导凋亡的作用 .结果 :MTT实验发现白藜芦醇作用HGC2 7细胞 2 4h后 ,细胞存活率显著下降 (P <0 .0 1)并呈剂量依赖性 ,软琼脂集落形成实验发现HGC2 7细胞在0 .5mmol/L白藜芦醇作用下无细胞集落的形成 ,Annxin V&PI染色及流式细胞仪检测发现白藜芦醇可引起HGC2 7阻滞于G1期 ,并可诱导HGC2 7发生凋亡 (8.39% ) .结论 :白藜芦醇可抑制胃癌细胞HGC2 7增殖并可诱导细胞发生凋亡 .
- 李莹药立波王立峰韩炯韩月恒刘新平林树新俞强
- 关键词：白藜芦醇凋亡胃肿瘤肿瘤细胞
- 水飞蓟素对乳腺癌细胞系的作用及其机制研究被引量：12
- 2003年
- 目的 研究水飞蓟素在体外对不同乳腺癌细胞系的作用 ,并进一步探讨其作用机制。方法 MTT实验测定水飞蓟素对乳腺癌细胞系 MCF- 7和 SK- BR- 3的半数抑制浓度 ( IC50 ) ;软琼脂克隆形成试验检测加药后两种细胞在软琼脂内的增殖能力。在此基础上 ,用 Her- 2抑制剂 AG82 5进行干预 ,对水飞蓟素的作用机制进行初步探讨。结果 水飞蓟素对两种乳腺癌细胞有不同程度的抑制作用 ,其中对 MCF- 7细胞的作用较强 ,IC50 ≤ 0 .0 2 %,而对SK- BR- 3的作用较弱。 Her- 2抑制剂 AG82 5可增加 SK- BR- 3细胞对药物的敏感性 ,抑制了水飞蓟素作用后该细胞在软琼脂中集落的形成。结论 水飞蓟素在体外对 MCF- 7细胞具有明显的抑制作用 ,而 AG82 5可增强 SK- BR-3细胞对药物的敏感性。因此 ,SK- BR- 3细胞中 Her- 2的高表达可能是该细胞对水飞蓟素敏感性差的原因 ,而水飞蓟素也可能通过 Her- 2调节某个或某几个下游分子起作用。
- 韩月恒韩炯李莹刘新平药立波
- 关键词：水飞蓟素乳腺癌HER-2
- 大容量人乳腺癌单链抗体库的构建与初步鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的利用细胞内重组技术构建大容量人乳腺癌单链抗体(scFv)库。方法收集30例乳腺癌外周转移淋巴结,依次提取总RNA、mRNA,RT-PCR扩增全套可变区基因(VL、VH),各自克隆到T载体,构建T载体库。然后从T载体上酶切VL、VH分步克隆到噬粒载体pDAN5,经电转化TG1得到初级库。辅助性噬菌体感染初级库,使噬菌体抗体表面呈现。提纯噬菌体抗体,滴定浓度后感染大肠杆菌BS1365进行细胞内重组。噬菌体挽救后再次提纯滴定噬菌体,感染大肠杆菌DH5αF',得到次级库,并测序验证。结果VH、VLT载体库分别为3.5×108和1.7×108,初级库库容量2.5×109。次级库库容量为2.5×1011。结论所采用的引物能够高效扩增目的片段,T载体的应用能够提高抗体基因的克隆效率,细胞内重组将进一步扩大库容量及增加其多样性,这种基于RT-PCR、T载体过渡、细胞内重组的路线能够构建大容量抗体库。
- 吕勇刚窦科峰吴昱彤赵爱志陶开山韩月恒杨雁灵刘杰陈刚药立波
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体乳腺癌
- 重组信号分子GRF的PH结构域抑制蛋白激酶C活性被引量：2
- 2001年
- 目的 鉴定表达 guanine- nucleotide- releasing factor(GRF)的 pleckstrin homology(PH)结构域与谷胱甘肽转移酶 (GST)融合蛋白的可溶性 ,并进一步检测该重组蛋白与蛋白激酶 C(PKC)的结合及对 PKC活性的影响 .方法 将表达GRF的 PH结构域与 GST融合蛋白的菌体经超声裂解 ,上清中的融合蛋白用琼脂糖珠锚定纯化 .Western blot检测融合蛋白与 PKC的结合 ,以 PKC活性检测试剂盒测定结合后PKC的活性变化 .结果 获得信号分子 GRF的 PH结构域 -GST融合蛋白的可溶性表达 .Western blot结果表明 ,GRF的 PH结构域可在体外与 PKC结合 .PKC活性实验显示 ,GRF的 PH结构域抑制 PKC活性 .结论 GRF的 PH结构域可在体外与 PKC结合并对
- 季少平药立波韩月恒刘新平苏成芝
- 关键词：信号分子PH结构域蛋白激酶C重组蛋白
- 人髓性白血病细胞系U937定向克隆cDNA表达文库的构建及其意义被引量：1
- 2003年
- 本研究的目的是构建髓性白血病U937细胞系表达型cDNA文库 ,为肿瘤抗原的筛选奠定工作基础。提取U937细胞总RNA ,分离mRNA ,反转录合成双链cDNA ,消平cDNA末端 ,连接EcoRⅠ适配子 ,磷酸化EcoRⅠ适配子 5′端 ;XhoⅠ酶切后 ,丙烯葡聚糖凝胶 S4 0 0柱除去小于 4 0 0bpcDNA片段 ,与λZAP表达载体连接 ,包装蛋白包装后建成cDNA文库 ;取出 1μl倍比稀释感染大肠杆菌XL1 Blue MRF′ ,测定文库大小、重组率 ;随机挑取 10个噬斑 ,在ExAssist辅助性噬菌体的作用下 ,释放出PBK CMV噬菌粒 ;感染大肠杆菌XLOLR ,铺于卡那霉素抗性的LB平板 ;挑取克隆 ,37℃震摇过夜 ;抽提质粒 ,经EcoRI和XhoI酶切后 ,初步确定片段的大小及多样性。结果 :构建成含 2 .87× 10 6重组子的U937细胞cDNA文库 ,重组子平均插入外源片段长约 1.7kb。结论 :所建文库合格 ,适合用于筛选目的cDNA克隆。
- 陈刚张王刚付杰曹星梅赵万红赵爱志韩月恒李福洋刘新平药立波
- 关键词：U937细胞系CDNA表达文库
- 白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡被引量：7
- 2004年
- 目的 研究白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡的作用。方法 采用细胞形态学观察、Annxin-V和PI细胞染色和流式细胞仪检测,观察白藜芦醇(0.1、0.2、0.5 mmol/L)对脱落培养胃癌细胞B(3C823、SGC7901和HGC27的生长状态、细胞周期的影响及诱导脱落凋亡的作用。结果 倒置显微镜下发现脱落培养的胃癌细胞聚集成团生长,0.1 mmol/L白藜芦醇作用细胞后可抑制抗脱落凋亡的胃癌细胞聚集成团;流式细胞仪检测和Annxin-V和PI细胞染色表明0.5 mmol/L白藜芦醇可分别阻滞脱落培养的BG(2823、SGC7901和HGC27细胞于G0/G1、S、G2/M期,并可诱导这3株胃癌细胞发生脱落凋亡,其中自藜芦醇诱导HGC27细胞脱落凋亡比例达19.3％,远高于其他两株胃癌细胞。结论 白藜芦醇可诱导胃癌细胞发生脱落凋亡。
- 李莹药立波王立峰韩炯韩月恒刘新平林树新俞强
- 关键词：白藜芦醇胃癌细胞
- NDRG2蛋白的毕赤酵母可溶表达与纯化被引量：1
- 2003年
- 目的 :酵母表达并纯化可溶性NDRG2蛋白 .方法 :从 pRSET A ndrg2重组质粒中扩增出 6his ndrg2融合基因 ,克隆入酵母表达载体 pPIC3.5K ;酵母重组表达载体pPIC3.5K 6his ndrg2电转化入毕赤酵母GS115 ,并进行营养缺陷筛选和G4 18抗性筛选 ;对高拷贝整合的重组酵母表达菌株诱导表达 ,可溶性表达产物经Ni NTA亲合层析纯化 .结果 :构建得到酵母融合重组表达载体 pPIC3.5K 6his ndrg2 ;经G4 18浓度梯度筛选得到串联整合 16个重组表达载体以上的重组酵母表达菌株 ;诱导后表达得到 6his NDRG2融合蛋白 ,并成功纯化得到可溶性表达产物 .结论 :表达并纯化得到可溶性NDRG2蛋白 ,为进一步研究NDRG2的结构与功能打下了必要的基础 .
- 张文红刘新平王琰韩月恒药立波
- 关键词：毕赤酵母基因表达
- OS-9基因的融合表达、纯化及多克隆抗体制备被引量：14
- 2003年
- OS 9基因广泛表达于人体多种组织 ,该基因的表达产物可能与肿瘤的发生相关 .为获得可溶性表达的OS 9蛋白 ,制备多克隆抗体 ,深入了解OS 9基因的功能 ,将OS 9基因片段克隆入组氨酸标签融合的表达载体pET2 8a中 ,IPTG诱导 ,利用金属螯合亲和层析 (MCAC)进行纯化 ,薄层扫描及Bradford法检测纯化蛋白的纯度与含量 .免疫家兔制备多克隆抗体 ,利用间接ELISA法检测抗体效价 ,Western印迹检测抗体特异性 .经表达形式分析证明 ,融合蛋白大部分可溶 .薄层扫描分析纯度可达 90 %以上 ,Bradford法检测蛋白浓度约 0 1mg ml.抗血清效价可达 1∶32 0 0以上 ,Western印迹检测证明抗体特异性良好 .经诱导表达及纯化制备出可溶的纯度较高的OS 9蛋白产物 。
- 韩月恒张文红沈岚季少平刘新平药立波
- 关键词：纯化多克隆抗体肿瘤
- Tec家族蛋白酪氨酸激酶Itk PH结构域与OS-9蛋白的相互作用被引量：1
- 2003年
- 用酵母双杂交技术筛选与ItkPH结构域相互作用的蛋白分子 ,以了解Itk的功能及其在T细胞信号转导中的位置与作用 .Itk的PH结构域扩增后克隆入酵母双杂交系统的pLexA载体 ,转化酵母细胞EGY4 8(p8op lacZ) ,经检测PH结构域无自激活作用 ,且对酵母细胞无毒性作用 .用PH结构域作为“钓饵”蛋白 ,在酵母双杂交系统中筛选构建于AD载体的T细胞cDNA文库 .将PH结构域及筛库所得基因片段分别进行融合表达 ,用于体外结合实验 ,进一步证实二者的相互作用 .经营养缺陷选择、诱导筛选和鉴定确证 ,筛库所得的插段约 15 0 0bp的文库质粒为一真阳性克隆 .经blast比较分析为骨肉瘤、横纹肌肉瘤等肿瘤组织中高表达的os 9基因 .体外结合实验也表明 ,ItkPH结构域可与该基因表达产物结合 .Itk的PH结构域可与OS 9蛋白相互作用 .
- 韩月恒张文红张晓光刘新平药立波
- 关键词：酪氨酸激酶ITKPH结构域酵母双杂交系统
- 在酵母双杂交系统中筛选与Tec家族蛋白酪氨酸激酶Itk PH结构域相互作用的蛋白
- T淋巴细胞表面受体(TCR)、辅助分子(如CD28、CD2)及细胞因子受体等介导的信号转导主要是通过细胞内底物的酪氨酸磷酸化来完成的.由于这些受体或辅助分子往往不含固有的激酶结构域,信号的传递势必通过它们与细胞内蛋白酪氨...
- 韩月恒张晓光刘新平药立波
- 文献传递
