王云丹
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：南通医学院神经科学研究所江苏省神经再生重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 大鼠损伤神经组织中Tropic1808基因相关蛋白的亲和层析法纯化
- 2002年
- 目的 :纯化大鼠损伤坐骨神经组织中 Tropic180 8基因特异表达的蛋白。方法 :将 Tropic180 8基因重组蛋白的单克隆抗体与 CNBr- activated Sepharose 4 B交联 ,用亲和层析的方法 ,提取在大鼠损伤坐骨神经组织中Tropic180 8基因特异表达的蛋白 ,并将纯化的蛋白进行 SDS- PAGE分析。结果 :(1)经层析系统紫外检测 ,亲和层析后洗脱 ,在 2 80 nm波长处获得两个不同的紫外吸收峰。 (2 )亲和层析的洗脱液 ,经冷冻浓缩 ,SDS- PAGE分析 ,出现4 3.0 k Da、32 .0 k Da、31.0 k Da和 14 .4 k Da蛋白条带 ,其中在 32 .0 k Da的蛋白条带与预期的 Tropic180 8基因在组织中的编码蛋白基本相符 ,而 4 3.0 k Da、31.0 k Da、14 .4 k Da蛋白 ,预测为 Tropic 180 8基因在大鼠损伤坐骨神经组织中表达的相关蛋白。结论 :用亲和层析的方法 ,获得了大鼠损伤坐骨神经组织中 Tropic180 8基因特异表达的相关蛋白 。
- 姚登兵王云丹陈雪丁斐
- 关键词：TROPIC损伤坐骨神经相关蛋白单克隆抗体SDS-PAGE
- 大鼠周围神经43kDa蛋白的生化初步分析
- 2004年
- 目的:提取大鼠损伤坐骨神经组织中表达增强的43kDa蛋白(PNP-43),并对PNP-43进行生化初步分析。方法:纯化抗PNP-43单克隆抗体,将纯化的抗PNP-43单克隆抗体与CNBr-activatedSepharose4B交联,用亲和层析的方法,提取PNP-43,并将提取的PNP-43进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和等电聚焦凝胶电泳(IEF)分析,考马斯亮蓝染色,取SDS-PAGE后染色的43kDa蛋白区带胶条,进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱检测(MALDI-TOF-MS),测定肽质量指纹图谱,在相应的蛋白质谱数据库(MS-Fit)中检索。结果:⑴、经层析系统紫外检测,亲和层析后洗脱,在280nm波长处显示一个的紫外吸收峰。⑵、亲和层析获得的蛋白,经SDS-PAGE分析,在43.0kDa标准蛋白位置出现单一蛋白条带。⑶、经IEF分析,PNP-43的等电点(pI)为5.8。⑷、经MALDI-TOF-MS检测,测定肽质量指纹图谱,通过MS-Fit检索未发现有与该蛋白完全相同的质谱数据。结论:用亲和层析的方法,获得了大鼠损伤坐骨神经组织中表达增强的PNP-43,通过质谱分析和MS-Fit检索提示未发现有与该蛋白完全相同的质谱数据。为进一步深入研究PNP-43的结构与功能提供了科学依据。
- 姚登兵顾晓松丁斐王云丹
- 关键词：损伤坐骨神经MALDI-TOF-MS
