母晓宇
- 作品数：9 被引量：10H指数：2
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金博士科研启动基金黑龙江省科技攻关计划更多>>
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- 鸭肝炎病毒在鸭胚成纤维细胞上的适应性研究
- 2013年
- 将鸭肝炎病毒(DHV)E53鸡胚致弱株适应鸭胚成纤维细胞(DEF),连续传代至第16代时出现细胞病变(CPE),第21代时CPE呈现规律性,接毒后72hCPE达80%,其病变特征是细胞间隙增宽、细胞崩解死亡、脱落。经病毒细胞培养物滴度测定、RT-PCR检测和间接免疫荧光法鉴定,证明DHVE53株能够在DEF上增殖。
- 李鑫朱永梅母晓宇马波王君伟
- 关键词：鸭肝炎病毒鸭胚成纤维细胞
- 鸭肠炎病毒gD基因胞外区的原核表达及在感染鸭胚成纤维细胞中的定位
- 2012年
- 以本实验室获得的鸭肠炎病毒(DEV)C-KCE株US区基因序列(GenBank登录号EU714267)为基础PCR扩增出gD基因胞外区(gDw),将其定向克隆至原核表达载体pET-30a(+)并转化至大肠杆菌RosettaTM(DE3)pLys。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表明gD基因胞外区在大肠杆菌中获得与预期大小相符的表达蛋白。重组蛋白纯化后免疫家兔制备多克隆抗体,血清琼扩效价达1∶16,噬斑减数中和试验测定血清中和抗体效价达1∶64。通过免疫荧光技术首次对gD进行亚细胞定位检测,结果表明DEV感染鸭胚成纤维细胞(DEF)后4h近核区域细胞质内首先开始出现荧光,12h以后显著增加,明显的点状绿色荧光广泛存在于胞质中。本研究为进一步开展DEV gD的功能研究提供了重要数据和材料。
- 刘琰徐凝付培芬母晓宇董井泉马波王君伟
- 关键词：鸭肠炎病毒原核表达
- 鸭肠炎病毒C-KCE株TK基因的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：3
- 2015年
- 为了探究鸭肠炎病毒(DEV)TK基因编码蛋白在相关细胞上作用与功能及其在病毒感染周期、机体免疫应答中的作用,试验以DEV C-KCE株基因组DNA为模板扩增获得TK基因,在p ET-32a(+)/Rosetta(DE3)p Lys系统中原核表达,并用IPTG诱导DEV TK重组蛋白。结果表明:经SDS-PAGE分析,外源基因主要以包涵体形式表达,分子质量约为59 ku;经Ni-NTA纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,抗体效价可达到1∶4;经Western-blot分析,制备的多克隆抗体可特异性识别重组蛋白;间接免疫荧光试验证实,制备的多克隆抗体与DEV的TK基因编码产物反应性良好。说明TK基因表达蛋白在鸭肠炎感染周期及机体的免疫应答中发挥着至关重要的作用。
- 赵宇田荔母晓宇董井泉高明春张文龙马波王君伟
- 关键词：TK基因原核表达多克隆抗体WESTERN-BLOT间接免疫荧光试验
- 鸭肠炎病毒SORF3基因的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：1
- 2012年
- 以鸭肠炎病毒(DEV)C-KCE株基因组DNA为模板,PCR扩增获得SORF3(S3)基因,在pET-32a(+)/Rosetta(DE3)pLys系统中原核表达。S3重组蛋白经IPTG诱导,SDS-PAGE分析显示外源基因以包涵体形式表达为主,分子质量约为52ku。重组蛋白经Ni-NTA纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,琼脂扩散法测得抗体效价为1:4。经Western blotting分析制备的多克隆抗体具有较高的特异性,间接免疫荧光试验证实制备的多克隆抗体与DEV的SORF3编码产物反应性良好,为进一步研究DEVSORF3结构与功能特性奠定了基础。
- 母晓宇董井泉孟祥莉张雪莲马波王君伟
- 关键词：鸭肠炎病毒原核表达
- 化脓隐秘杆菌溶血素蛋白的原核表达及其溶血活性鉴定被引量：1
- 2013年
- 为研究化脓隐秘杆菌致病机制及其病原学诊断方法,本研究克隆了编码化脓隐秘杆菌溶血素蛋白的plo基因,并构建重组表达质粒pET-plo,转化大肠杆菌Rosetta(D E3)感受态细胞中诱导表达。SDS-PAGE检测结果显示,表达的重组蛋白约为62 ku,western blot分析表明表达的重组蛋白可以与鼠抗化脓隐秘杆菌血清发生反应。采用重组蛋白免疫新西兰白兔制备的多克隆抗体效价达到1∶128 000,western blot和琼脂双扩散试验表明制备的多克隆抗体能够与天然PLO蛋白发生反应。溶血试验表明重组蛋白能够溶解红细胞,制备的多克隆抗体能有效中和重组蛋白的溶血活性。
- 孟祥莉母晓宇刘晓丹徐凝王璞高明春张文龙王君伟
- 关键词：溶血素原核表达多克隆抗体
- 1型鸭肝炎病毒E53株VP1基因在昆虫细胞中的表达及产物分析
- 2012年
- 根据1型鸭肝炎病毒E53株基因组序列设计并合成一对特异性引物,RT-PCR扩增VP1基因,将其定向克隆至pFastBacTMHTB载体,转化至DH10BacTM感受态细胞中,蓝白斑筛选获得重组穿梭质粒rBacmid-VP1,重组质粒在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒。结果表明VP1蛋白在昆虫细胞中获得表达,表达产物能够与兔抗1型鸭肝炎病毒VP1蛋白多抗血清和鸭肝炎病毒阳性血清发生特异性反应。在昆虫细胞中表达VP1蛋白为VP1功能的研究及鸭肝炎病毒抗体的检测提供了物质材料。
- 付培芬刘华刘琰母晓宇董井泉刘晓玫马波王君伟
- 关键词：VP1基因昆虫细胞
- 鸭肠炎病毒US10基因的原核表达及抗血清的制备
- 2013年
- 以鸭肠炎病毒(DEV)C-KCE株基因组DNA为模板,PCR扩增获得US10基因。构建了其原核表达载体pET-32a-US10,经1.0 mmol/L IPTG诱导,目的蛋白在Rosetta(DE3)pLys宿主菌中获得了表达。SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白以包涵体形式表达,与预期大小相符。利用亲和层析法纯化目的蛋白,以纯化的蛋白为免疫原制备其抗血清,琼脂扩散法测得抗体效价为1∶4,间接ELISA法测定抗体效价为1∶102 400。间接免疫荧光试验证实制备的抗血清可特异性识别鸭肠炎病毒的US10基因编码产物。
- 张蕾董井泉母晓宇马波王君伟
- 关键词：鸭肠炎病毒
- 两株缺失SORF3/TK基因重组鸭肠炎病毒的构建及其基本生物学特性研究
- 鸭病毒性肠炎(duck viral enteritis，DVE)，又名鸭瘟(duck plague，DP)，是鸭、鹅及多种雁形目禽类的一种急性、热性、败血性传染病，曾相继在多个国家和地区流行，给养鸭业造成巨大的经济损失。...
- 母晓宇
- 关键词：免疫原性
- 文献传递
- 东北白鹅CD4基因的克隆及其胞外区的表达与抗血清的制备被引量：4
- 2014年
- 本研究根据GenBank公布的绿头鸭CD4(AF378701)基因序列设计引物,RT-PCR获得东北白鹅CD4基因。根据测序结果设计特异性引物,克隆得到东北白鹅CD4胞外区基因,并在pET-32a(+)/Rosetta(DE3)pLysS系统中进行原核表达。经IPTG诱导重组蛋白获得表达,Ni-NTA柱亲和层析获得纯化的重组蛋白,以纯化的重组蛋白为免疫原制备兔抗鹅CD4胞外区抗血清。I-ELISA、Western blot和流式细胞仪分析表明抗血清可特异识别重组蛋白以及分离获得的东北白鹅外周血T淋巴细胞,间接免疫荧光试验证实纯化的抗血清可特异性识别瞬时真核表达的鹅CD4胞外区蛋白。以上结果说明制备的抗血清可作为鹅CD4+T淋巴细胞的检测试剂。
- 张雪莲魏双施邵建伟母晓宇高明春张文龙马波王君伟
- 关键词：东北白鹅CD4基因表达T淋巴细胞
