李向阳
- 作品数：38 被引量：76H指数：4
- 供职机构：徐州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Sonic Hedgehog(SHH)促进胶原蛋白诱导关节炎大鼠滑膜成纤维细胞的增殖被引量：2
- 2016年
- 目的探讨Sonic Hedgehog(SHH)在滑膜成纤维细胞增殖中的作用。方法收集类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、强直性脊柱炎(AS)患者及健康正常人血清样本各(30例),ELISA检测上述血清SHH的含量。SD大鼠皮内注射2型胶原蛋白(Col2)诱导RA大鼠模型(CIA),取其滑膜组织原代培养滑膜成纤维细胞(SF)。免疫荧光细胞化学染色法检测vimentin表达鉴定SF,并检测SHH在SF中的表达。培养SF给予SHH-胶质瘤相关癌基因1(Gli-1)通路特异性阻断剂GANT61处理72 h,Western blot法检测SF表达SHH的变化情况,CCK-8法检测SF的增殖情况。结果 RA患者血清中SHH的含量较SLE、AS患者及正常组含量升高。成功建立CIA模型及分离培养SF;CIA-SF表达SHH较正常组SF高。给予GANT61处理72 h,CIA-SF中SHH蛋白表达降低且细胞增殖水平下降。结论 SHH参与RA发病与CIA-SF增殖有关。
- 李慧秦苏萍孙德旭潘伟李向阳孔凡运郑葵阳汤仁仙
- 关键词：滑膜成纤维细胞SHH
- 甘西鼠尾草总酚酸提取物对嘌呤霉素氨基核苷大鼠足细胞损伤的保护作用被引量：2
- 2015年
- 目的:研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)大鼠足细胞损伤的保护作用。方法:建立PAN肾病大鼠动物模型,给予他克莫司和SPE干预治疗,分别在第5、10、15、21天留取血尿标本,同时采用肾组织病理观察大鼠肾小球组织形态学改变,透射电镜观察肾小球足细胞超微结构改变,并分别从mRNA和蛋白水平分析足细胞裂孔膜蛋白的表达水平。结果:(1)除正常组外,各组大鼠尿蛋白定量第5天时已明显升高,第10天上升至高峰,而后开始下降,第15天时仍明显高于正常。给予药物干预后,可降低大鼠的尿蛋白排泄量,且阳性对照组与SPE高剂量组降低尿蛋白的程度较为接近。(2)光镜下未见肾小球形态异常。电镜结果显示第5天时已出现肾小球足细胞足突融合,第10天时足突融合最明显,随后开始恢复,第21天基本恢复正常;SPE高剂量组和阳性对照组的足突融合程度较轻。(3)阳性对照组和SPE组大鼠的nephrin、podocin蛋白表达水平高于模型对照组。第5天时各组大鼠蛋白表达低于正常,第10天时下降更为明显,第15天蛋白表达已开始回升,至第21天时恢复至正常水平。阳性对照组和SPE高剂量组大鼠蛋白表达均明显高于其余三组。(4)大鼠nephrin、podocin的mRNA表达量在第5天时已下降,至第10天明显下降至最低水平,而后开始上升,直至第21天恢复至正常水平。阳性对照组和SPE高剂量组的表达水平明显高于其他各组(P<0.05)。结论:SPE对PAN大鼠肾小球足细胞损伤有一定的保护作用,可降低PAN大鼠蛋白尿。
- 戴德淑刘翔杨阳周璇骆晓梅袁飞蔡青赵勇王增慧李向阳颜超汤仁仙任红旗
- 关键词：嘌呤霉素氨基核苷足细胞
- 细粒棘球绦虫原头节可溶性抗原对树突状细胞表型分化及分泌炎症因子的影响被引量：1
- 2016年
- 目的研究细粒棘球绦虫原头节可溶性抗原(protoscolex soluble antigens,PSA)对树突状细胞(dendritic cells,DC)表型分化及分泌炎症因子的影响,探索寄生虫对宿主免疫逃避的机制。方法运用免疫磁珠从健康BALB/c小鼠脾脏中分选DC,分别加入PSA(10μg/ml)、LPS(1μg/ml)、PSA(10μg/ml)+LPS(1μg/ml)以及等体积PBS进行刺激24h,收集细胞及培养上清,利用流式细胞术检测DC表面活化分子的表达水平,并采用流式液相多重蛋白定量技术检测细胞因子分泌情况。结果 PSA组DC表面表达CD40,CD80,CD86,MHCⅡ的比例为(42.33±0.59)%、(71.08±1.61)%、(73.63±5.31)%、(70.20±1.01)%,较PBS组的(29.1±8.14)%、(48.81±1.69)%、(37.37±2.57)%、(26.83.08±3.55)%均明显升高(P<0.05),较LPS组的(61.33±4.73)%、(81.23±2.03)%、(85.40±1.57)%、(86.86±2.01)%均显著降低(P<0.05)。PSA组培养上清中IL-6、TNF浓度为(53.67±6.23)pg/ml、(405.10±5.78)pg/ml,较PBS组的(9.44±4.06)pg/ml、(139.35±45.86)pg/ml、均显著升高(P<0.05),较LPS组的(48.23±7.85)pg/ml、(471.40±61.07)pg/ml均显著降低(P<0.05);且PSA+LPS组IL-6、TNF浓度为(73.42±8.00)pg/ml和(508.54±20.68),较PSA组、LPS组显著升高(P<0.05)。结论 PSA能促进DC活化及炎症因子释放,从而诱导机体产生正向免疫应答。
- 潘伟孙芬芬郝文婷李向阳汤仁仙沈玉娟郑葵阳
- 关键词：细粒棘球绦虫原头节可溶性抗原树突状细胞炎症因子
- 人肝癌细胞LASP1启动子的克隆及其核心调控区域的初步鉴定
- 2016年
- 目的:克隆人肝癌细胞的LASP1基因的启动子区域并找出该基因启动子的核心调控区域。方法:提取肝癌Hep G2细胞总DNA,PCR扩增不同长度的LASP1启动子片段,克隆至PGL3-Basic载体中构建重组表达载体PGL3-P1(2059 bp)、PGL3-P2(1123bp)、PGL3-P3(909 bp)、PGL3-P4(574 bp)和PGL3-P5(159 bp),转化入大肠埃希菌(E.coli)DH5α中,提取质粒经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆并测序。将构建的重组表达载体、PGL3-Basic载体分别与内参质粒PRL-Tk共转染Hep G2细胞,48 h后经双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测其活性。结果:PCR结果、双酶切结果以及DNA测序结果表明成功构建了LASP1启动子荧光素酶报告基因载体;双荧光素酶报告基因检测结果显示,与PGL3-Basic组相比,重组载体PGL3-P1、PGL3-P2、PGL3-P3、PGL3-P4均具有较强的启动子活性(P<0.01),其中,PGL3-P4的活性最强。结论:成功构建了人肝癌细胞不同截断长度的LASP1基因启动子荧光素酶报告基因载体,确定了LASP-1基因启动子的核心区域(-581 bp^-8 bp),为进一步研究LASP1基因在肝癌细胞中表达的关键调节因素及分子机制奠定了基础。
- 胡磊罗文雅胡威尤红娟孔凡运李向阳郑葵阳汤仁仙
- 关键词：启动子荧光素酶报告基因
- 性别差异对类风湿性关节炎大鼠模型的影响被引量：2
- 2014年
- 目的观察性别差异对类风湿性关节炎大鼠模型的影响。方法健康成年SD大鼠40只，雌雄各半，随机分4组：雄性、雌性对照组，雄性、雌性模型组。模型组大鼠尾根部皮内注射Ⅱ型胶原及弗氏完全佐剂诱导类风湿性关节炎模型。观察建模后第1、2、3、4、5、6周大鼠的一般情况、体重、踝关节直径、关节炎指数评分的变化情况。结果与雄性模型组相比，雌性模型组大鼠关节炎症状出现早且急性期维持时间长，踝关节直径增加更明显，关节炎指数评分较高。结论采用注射胶原法诱导大鼠类风湿性关节炎动物模型，雌性大鼠更易于建模。
- 秦苏萍李慧李向阳汤仁仙郑葵阳
- 关键词：类风湿性关节炎性别动物模型
- 乙肝病毒X基因重组腺病毒载体的构建被引量：1
- 2010年
- 目的为了探讨HBx基因与肝癌发生的关系,构建HBx基因重组腺病毒载体。方法应用pAdEasyTM腺病毒载体系统,首先从质粒pCDNA3.l-HBx中酶切得到HBx基因,插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,得到pAdTrack-CMV-HBx,将其Pm eⅠ酶切线性化后,转到含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的B J5183感受态细菌中,通过同源重组得到重组腺病毒质粒载体pAd-HBx,经PacⅠ酶切线性化后转染人胚肾293细胞,产生重组腺病毒颗粒Ad-HBx。结果PCR和酶切鉴定证明重组腺病毒Ad-HBx构建成功,在转染的293细胞中可以观察到绿色荧光蛋白GFP。结论成功构建了携带HBx基因的重组腺病毒载体,为后续研究奠定了基础。
- 史震李向阳周峰李金龙尤红娟汤仁仙
- 关键词：乙型肝炎病毒HBX基因腺病毒载体
- p38MAPK介导的Fas/FasL凋亡信号通路在大鼠抗GBM肾炎中的作用被引量：10
- 2012年
- 目的:探讨p38MAPK介导的Fas/FasL凋亡信号通路在大鼠抗肾小球基底膜(GBM)肾炎中的作用。方法:1:复制大鼠抗GBM肾炎模型,于实验第2、7、14、21、28天取肾组织行免疫印迹法检测p-p38MAPK、p38MAPK、FasL、Fas、Caspase-3的表达。2:应用p38MAPK阻断剂SB203580处理大鼠抗GBM肾炎模型,于实验第2、7、14天检测24小时尿蛋白、血肌酐及血尿素氮含量;第14天取肾组织,经光镜观察肾组织病理变化;TUNEL法检测肾组织细胞凋亡情况;免疫印迹和免疫组织化学法检测肾组织p-p38MAPK、p38MAPK、FasL、Fas、Caspase-3表达情况。结果:在成功复制大鼠抗GBM肾炎模型基础上,免疫印迹结果显示肾炎模型组大鼠p-p38MAPK、FasL、Fas、Caspase-3蛋白表达各时间点均明显高于正常对照组,而p38MAPK表达与正常对照组相比无明显差异。在成功复制大鼠抗GBM肾炎模型基础上,阻断剂SB203580降低了大鼠抗GBM肾炎生化指标,减轻了肾炎病理反应,抑制了p-p38MAPK、FasL、Fas、Caspase-3的表达,降低了肾组织细胞凋亡数。结论:p38MAPK介导的Fas/FasL凋亡信号通路在大鼠抗GBM肾炎发病机制中发挥重要作用,其阻断剂SB203580减轻了大鼠抗GBM肾炎的病理改变,为临床防治人类新月体性肾炎提供实验理论依据。
- 王晓天李向阳秦苏萍李小翠尤红娟汤仁仙
- 关键词：抗GBM肾炎P38MAPKFASFASL
- 商品猪饲料致皮肤超敏反应实验研究
- 2014年
- 目的 探讨商品猪饲料对人皮肤的致敏作用.方法 建立豚鼠斑贴试验模型,观察豚鼠局部的超敏反应情况,ELISA法检测血清白细胞介素4（IL-4）、γ干扰素（IFN-γ）水平,苏木精-伊红染色观察受试部位组织病理的改变.结果 高浓度饲料组和低浓度饲料组局部出现超敏反应的阳性率分别为87.5％、80.0％;与阴性对照组相比,高浓度饲料组豚鼠血清IFN-γ和IL-4水平显著升高（P ＜0.001）,低浓度组豚鼠血清IFN-γ和IL-4水平也显著升高（P＜0.01）;病理检查见饲料组局部出现炎症细胞浸润.结论 商品猪饲料具有致敏作用,主要由Ⅰ型和Ⅳ型超敏反应引起.
- 张银芬陈梅香谢栋顾洋卢志勇李向阳汤仁仙尤红娟郑葵阳
- 关键词：超敏反应皮肤
- 乙型肝炎病毒X基因促TRAIL诱导Huh7细胞凋亡的机制被引量：2
- 2012年
- 目的探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X基因(HBX)促肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF relatedapoptosis inducing ligand,TRAIL)蛋白诱导人肝癌细胞Huh7凋亡的机制。方法应用脂质体转染法将pcDNA3.1-HBX、pcDNA3.1分别转染Huh7细胞,建立稳定表达HBX的细胞模型Huh7-HBX和空载体对照细胞模型Huh7-3.1;运用TRAIL蛋白分别作用Huh7-HBX细胞、Huh7-3.1及Huh7细胞后,采用CCK8、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况;Western blot检测死亡受体4(deathreceptor 4,DR4)和死亡受体5(death receptor 5,DR5)的表达情况;分光光度法检测细胞caspase8和caspase3活性。结果 RT-PCR及Western blot证实成功构建细胞株Huh7-HBX;CCK8和流式细胞术检测结果均显示Huh7-HBX细胞的凋亡率明显高于Huh7-3.1及Huh7(P<0.05);Western blot显示Huh7-HBX细胞的DR4、DR5的表达量明显高于Huh7-3.1及Huh7细胞(P<0.05);caspase活性检测结果显示,Huh7-HBX细胞caspase8及caspase3的活性明显高于Huh7-3.1及Huh7(P<0.05)。结论 HBX能够通过上调Huh-7细胞表面死亡受体DR4、DR5的表达,进而促进TRAIL蛋白诱导的细胞凋亡,为进一步研究HBX的促凋亡机制提供实验依据。
- 尤红娟刘雯赵金金徐志辉李向阳刘转转汤仁仙郑葵阳
- 关键词：乙型肝炎病毒X基因肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体凋亡
- 初步探讨乙型肝炎病毒X蛋白激活PI3K／Akt信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白（HBx）激活磷脂酰肌醇-3-激酶／蛋白激酶B（P13K／Akt）信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法利用稳定表达HBx基因的肝癌细胞模型HepG2-HBX、Huh-7-HBX，运用阻断剂LY294002阻断P13K／Akt信号通路后，采用Westernblot方法分析HepG2-HBX和Huh-7-HBX细胞中P～Akt蛋白的表达水平的情况；采用CCK～8增殖实验和划痕愈合实验观测HepG2-HBX和Huh-7～HBX细胞的增殖和迁移能力。结果与阴性对照肝癌细胞相比，稳定转染HBx基因的肝癌细胞中的P—Akt蛋白的表达增多（P〈0．05），运用阻断剂LY294002阻断P13K信号通路后，稳定转染HBx基因的肝癌细胞内的P～Akt蛋白表达降低（P〈0．05）。CCK-8增殖实验和划痕愈合实验结果均显示，与阴性对照肝癌细胞相比，稳定转染HBx基因的肝癌细胞的增殖能力和迁移能力增加（P〈0．05）。经阻断剂LY294002阻断P13K／Akt信号通路后，稳定转染HBX的肝癌细胞的增殖和迁移能力减弱（P〈0．05）。结论HBx可通过激活19／3K／Akt信号通路促进肝癌细胞增殖和迁移。
- 胡丽娜孔凡运尤红娟李向阳党景东刘雯汤仁仙郑葵阳陈明
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白PI3K/AKT肝癌细胞增殖迁移
