张灵芝
- 作品数：3 被引量：15H指数：1
- 供职机构：北京大学药学院天然药物学系更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家教育部“985工程”长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 银胶菊丙二烯氧化物合成酶的表达纯化及其活性分析被引量：1
- 2012年
- 植物来源细胞色素P450的表达和结晶都十分困难,成为成功解析该类蛋白晶体结构的瓶颈。探索了使用大肠杆菌表达系统表达、纯化银胶菊丙二烯氧化物合成酶(allene oxide synthase,AOS)的方法。氨基酸序列比对分析显示,银胶菊AOS缺失N-末端的膜锚定序列和信号肽序列,推测其在大肠杆菌中应表达为水溶性蛋白质。试验中纯化得到的银胶菊AOS是一个分子量为54.5 kD的八聚体分子,均一性好,不含去垢剂,达到毫克量级,适合下一步的晶体培养研究;还原一氧化碳差示光谱显示该酶在450 nm处有特征吸收峰,酶活性测定得到该酶的米氏常数为45.3μmol/L,显示该重组AOS具有很高的酶活性。
- 刘云华周秋虎张灵芝常振战
- 关键词：细胞色素P450表达纯化酶活性分析
- 骨碎补中的两个新酚酸类化合物被引量：14
- 2010年
- 为了研究骨碎补的化学成分,采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20柱色谱及半制备高效液相色谱等技术,从中药骨碎补的70%乙醇提取物中分离得到9个酚酸类化合物。其结构经1HNMR、13CNMR、2DNMR、HR-ESI-MS等谱学方法分别鉴定为4,4'-dihydroxy-3,3'-imino-di-benzoic acid(1)、原儿茶酸(protocatechuic acid,2)、没食子酸(gallic acid,3)、对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid,4)、咖啡酸[(E)-caffeic acid,5]、ethyl trans-3,4-dihydroxycinnamate(6)、咖啡酸4-O-β-D-葡萄糖苷(caffeic acid 4-O-β-D-glucopyranoside,7)、对-香豆酸4-O-β-D-葡萄糖苷(p-coumaric acid 4-O-β-D-glucopyranoside,8)和23(S)-12-O-caffeoyl-12-hydroxyllauric acid glycerol ester(9)。其中,化合物1和9为新化合物,化合物3、4、6为首次从槲蕨属植物中分离得到。
- 梁永红叶敏张灵芝李卉芳韩健王宝荣果德安
- 关键词：骨碎补槲蕨ACIDACID
- 亲和色谱和反相高效液相色谱测定菠菜和拟南芥中四氢叶酸代谢物及叶酸的含量(英文)
- 2010年
- 植物中来源于甘氨酸和丝氨酸的一碳单位转移给四氢叶酸用于四氢叶酸代谢物的生物合成.由于含量低、成份复杂以及稳定性差,植物组织中四氢叶酸代谢物和叶酸的定量分析一度是一个挑战性很强的课题.本研究旨在建立一种可靠方法测定对甲基基团要求不同的植物(例如累积甘氨酸甜菜碱的菠菜与不累积甘氨酸甜菜碱的拟南芥)中四氢叶酸代谢物和叶酸的含量,用于研究这些植物中通过叶酸途径的一碳单位通量.菠菜和拟南芥叶片在金色荧光灯下加液氮研磨,加入大鼠血浆轭合酶粗提物处理,提取物经叶酸结合蛋白琼脂糖亲和色谱柱纯化,用附有荧光和紫外检测器的高效液相色谱仪分离并测定四氢叶酸代谢物和叶酸的含量.菠菜和拟南芥叶片中单谷氨酸型N5-甲基四氢叶酸含量分别是252ng/g和64ng/g,而总N5-甲基四氢叶酸的含量分别是370ng/g和199ng/g.两种植物均检测到少量的四氢叶酸和N5-醛基四氢叶酸,但只在拟南芥叶片而非菠菜叶片中检测到叶酸.实验结果显示,菠菜中单谷氨酸型和多谷氨酸型N5-甲基四氢叶酸的含量均比拟南芥显著增多.这种样品制备和高效液相色谱方法适于测定植物中四氢叶酸代谢物和叶酸的含量.
- 常振战张灵芝Douglas A.GAGE
- 关键词：叶酸高效液相色谱荧光检测
