姜云水
- 作品数：31 被引量：59H指数：4
- 供职机构：浙江省医学科学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省科技计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 表达人乳头瘤病毒16型E6E7重组腺病毒疫苗对小鼠的免疫和抗肿瘤效应被引量：2
- 2014年
- 目的评价HPVl6E6E7的复制缺陷型重组5型腺病毒（PK—HPV—ad5）治疗性疫苗对实验小鼠免疫应答和抗肿瘤的生物学效应。方法使用基因重组技术构建PK—HPV—ad，疫苗，并通过小鼠免疫试验，检测小鼠总抗体和特异性IFNl，同时将造模小鼠分成疫苗组和对照组，分别对其进行抑瘤试验、TC-1肿瘤细胞挑战试验和肿瘤切除后防复发试验。结果HPV16E6E7诱导的总抗体第12天的水平相对较高（1：400～1：600）；3批次疫苗特异性IFNl在第14天与对照组比较分别升高8．6、5．9和8．9倍，差异有统计学意义（t=15．721、6．967和14．342，P均〈0．01）。抑瘤试验表明疫苗剂量为10^7IU／只时小鼠肿瘤生长率为0，与对照组比较差异有统计学意义（确切概率法，P〈0．01），3批次疫苗验证有效剂量为10^7IU／只时肿瘤抑制率可达80％（8／10）以上。TC-1肿瘤细胞挑战试验结果显示：小鼠先接种疫苗能引起特异性的免疫应答，并能保护90％（9／10）的小鼠免受TC-1肿瘤细胞的攻击；肿瘤切除后防止复发试验提示在注射相同剂量疫苗时，对10^4个，只和10^5个／只肿瘤细胞造模小鼠，第0、5天免疫组肿瘤复发数少于第5，8天免疫组（1／10，4／10VS8／10，7／10）。结论PK—HPV—ads疫苗能诱导小鼠产生特异性的免疫应答，对抗肿瘤复发有治疗潜力。
- 吴洁陈刚金素凤高孟庄昉成李剑波姜云水毛子安
- 关键词：腺病毒疫苗抗肿瘤作用
- 肠道病毒71型灭活疫苗滴度的酶联免疫吸附检测方法被引量：5
- 2011年
- 目的 建立肠道病毒71型（EV71）灭活疫苗滴度的检测方法,用于疫苗研制及生产过程中抗原含量的测定.方法 以兔抗EV71多克隆抗体为包被抗体,小鼠抗EV71单克隆抗体为检测抗体,以夹心ELISA方法测量我们制备的EV71疫苗抗原参照品,建立抗原标准曲线,确定定量限度及最佳定量范围,同时验证该方法的特异性和可重复性.结果 建立了检测EV71抗原含量的夹心ELISA方法,定量限度为3.9352log10TCID50/mL,最佳定量范围为3.9352～5.9686 log10TCID50/mL,相关系数为R2=0.9956;特异性好,除与EV71疫苗样品有反应外,与其他样品无交叉反应;稳定性和重复性好,变异系数小于7%.结论 本研究建立的检测EV71灭活疫苗滴度的夹心ELISA方法灵敏、特异,为疫苗研制过程中抗原含量测定提供了快捷有效的检测手段.
- 高孟周康凤罗永能姜云水唐彩华陈柯达高丽美朱莲毛子旭毛江森
- 关键词：酶联免疫吸附测定肠道病毒71型灭活疫苗
- HEK293细胞的传代、建库与高效表达重组HPV16-E6E7腺病毒的研究被引量：1
- 2015年
- 目的对HEK293细胞进行三级细胞库的建立,并高效表达重组的HPV16-E6E7腺病毒。方法进行HEK293细胞传代培养,并建立三级细胞库,按中国药典2010年版III部要求进行常规检验;培养重组HPV16-E6E7腺病毒,测定滴度,插入目的基因以及基因组酶切图谱鉴定。结果 HEK293细胞传代符合其生长形态,建立的三级细胞库和不同细胞库之间的传代数,细胞浓度和装量均符合疫苗基质制备的要求;能高效表达重组HPV16-E6E7腺病毒,种子滴度>3.0×109 IU·m L?1;表达的目的基因和目的蛋白稳定。结论建立的HEK293三级细胞库符合疫苗用细胞基质的要求。
- 吴洁李剑波高孟金素凤潘海桦陈刚姜云水庄昉成
- 关键词：HEK293细胞库HPV16
- 幽门螺杆菌与胃癌被引量：1
- 2002年
- 姜云水
- 关键词：幽门螺杆菌胃癌螺杆菌感染癌前状态流行病学
- 微载体技术高密度培养MRC-5细胞初探被引量：2
- 2014年
- 目的 通过探索MRC-5细胞的微载体培养条件,以期建立MRC-5细胞的高密度培养方法.方法 用3种不同培养基（MEM、M199、DMEM）分别培养3.0×104/mL的MRC-5细胞,观察它们的细胞增殖及传代能力；在Spinner培养系统中,用1.0 g/L Cytopore 2和3.0 g/L Cytodex 3分别培养密度为3.70× 105/mL和2.98×105/mL的MRC-5细胞,观察两种载体对细胞生长代谢和细胞密度的影响,筛选出最适宜的培养基及微载体.使用5 L CelliGen310生物反应器对筛选获得的培养基及微载体进行MRC-5细胞的灌流培养初步摸索.结果 MRC-5细胞在MEM、M199、DMEM培养基中培养96 h细胞分别增殖了7.0、4.4和3.0倍；在MEM培养基中连续传代至5次以上,细胞增殖稳定,1：3传代72 h形成致密单层,而在M199和DMEM培养基中连续传代均未能获得理想的细胞形态.经96～120 h的培养后,使用1.0 g/L Cytopore 2培养的MRC-5细胞密度达到2.20× 106/mL高于使用3.0 g/L Cytodex 3的1.12×106/mL,且前者葡萄糖和乳酸代谢较后者更为活跃.首选MEM和Cytopore 2作为MRC-5细胞的灌流培养体系.在5L生物反应器中以1.0 g/L Cytopore 2和2.5LMEM培养基培养MRC-5细胞至144h,细胞密度达到1.54×106/mL.结论 初步建立的MEM Cytopore 2微载体细胞培养方法能够获得高密度、活性良好的MRC-5传代细胞.
- 姜云水李剑波顾春燕陈科达唐彩华包佳源毛岱敏张峰庄昉成王平
- 关键词：细胞培养技术微载体
- HPV16型L2N120E7E6融合蛋白、基因、制备方法及用途
- 本发明涉及一种在大肠杆菌中高效表达的人乳头瘤病毒16型L2N120E7E6重组蛋白的密码子优化基因，将其插入原核表达载体pET9a，优化基因获得高效表达，表达水平占全菌的50％，表达蛋白经纯化后免疫小鼠，实验结果表明该蛋...
- 田厚文赵莉毛子安庄昉成任皎高见冯靖庞正姜云水阮力
- 不同佐剂对人乳头瘤病毒16型L2E7E6蛋白免疫效果的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:研究CpG佐剂、弗氏佐剂、聚肌胞苷酸佐剂及左旋咪唑、西米替丁作为佐剂对人乳头瘤病毒16型L2E7E6融合蛋白在小鼠体内产生的免疫效果的影响。方法:以单独蛋白组、蛋白加各佐剂组分别肌肉注射免疫C57BL/6小鼠,检测不同佐剂诱发小鼠产生的体液免疫和细胞免疫应答水平,并观察其对小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果:各免疫组均能检测到高滴度的抗L2、E7、E6蛋白IgG抗体(以IgG1为主),其中弗氏佐剂能显著提高E6蛋白的IgG和IgG1抗体水平和E7蛋白的IgG1抗体水平(P<0.05),CpG佐剂明显提高了E7蛋白的IgG2a抗体水平(P<0.01);而西米替丁佐剂则降低了E7抗原的IgG抗体水平(P<0.05);同时可以检测到CpG佐剂组能诱发小鼠产生针对E7、E6较强的细胞免疫反应,且能抑制70%的荷瘤小鼠肿瘤生长;此外弗氏佐剂与聚肌胞苷酸佐剂可产生较弱的针对E7肽的细胞免疫反应,能延缓荷瘤小鼠肿瘤形成时间,与单纯蛋白组相比差异显著(P<0.05)。结论:CpG佐剂、弗氏佐剂和聚肌胞苷酸佐剂都能提高人乳头瘤病毒16型L2E7E6融合蛋白的细胞免疫反应水平和抑制肿瘤生长能力,其中CpG佐剂效果较好,为促进该蛋白作为疫苗的研发提供了实验依据。
- 任皎赵莉高孟姜云水郝明强谭文杰田厚文阮力
- 关键词：人乳头瘤病毒佐剂治疗性疫苗
- 人乳头瘤病毒16型治疗性疫苗联合免疫效果研究被引量：1
- 2013年
- 目的:探索联合免疫策略对人乳头瘤病毒16型(HPV16)治疗疫苗L2E7E6和rAdE7E6的免疫效果的影响。方法:用L2E7E6融合蛋白和重组腺病毒rAd5E7E6以不同的联合免疫程序分别免疫C57BL/6小鼠,通过检测其诱发的体液免疫和细胞免疫反应,以及观察其在HPV16小鼠治疗模型中的抑瘤效果,比较分析联合免疫对小鼠免疫反应及治疗肿瘤效果的影响。结果:异源性联合免疫组均可检测到较高水平的体液免疫,该2组针对E6、E7特异性的T细胞免疫反应与同源性联合免疫2组相比明显提高,并在小鼠肿瘤治疗模型中能抑制肿瘤生长。结论:异源性联合免疫策略可明显提高HPV16 L2E7E6及rAd5E7E6疫苗的T细胞免疫反应,且有效治疗HPV16相关肿瘤,为HPV16L2E7E6及rAd5E7E6疫苗的应用提供了实验基础。
- 任皎姜云水高孟赵莉庄昉成谭文杰阮力毛子安田厚文
- 关键词：人乳头瘤病毒宫颈癌免疫治疗联合免疫
- 非甲基化CpG寡聚脱氧核苷酸对人乳头瘤病毒治疗性蛋白疫苗的免疫佐剂作用被引量：2
- 2013年
- 目的研究非甲基化CpG寡聚脱氧核苷酸（CpG-ODN）联合宫颈癌治疗性融合蛋白疫苗HPV16L2ESET（以下简称蛋白疫苗）诱导小鼠产生的免疫应答及其在肿瘤免疫治疗中的免疫佐剂作用。方法免疫学试验：108只雌性C57BL／6小鼠随机分成CpG组、蛋白疫苗组、CpG＋蛋白疫苗组，每组36只，分别肌肉注射CpG-ODN（10μg／只）、蛋白疫苗（120μg／只）、蛋白疫苗（120μg/只）和CpG-ODN（10μg／只）的混合溶液，免疫程序为0,3、7d；ELISPOT法检测IFN-T，间接ELISA法检测IgG抗体水平，分别评价小鼠产生的细胞及体液免疫效果。肿瘤抑制试验：将40只雌性C57BL／6小鼠皮下接种TC．1肿瘤细胞（1×104／只），24h后随机分成4组接种疫苗，每组10只，CpG组、蛋白疫苗组和CpG＋蛋白疫苗组分别肌肉注射CpG-ODN（10μg/只）、蛋白疫苗（120μg／只）、蛋白疫苗（120μg／只）和CpG-ODN（10μg／只）的混合溶液，免疫程序为0、3、7d；对照组不给药。通过成瘤率分析抗肿瘤效果。结果免疫学试验表明，免疫后14、21和28d,CpG＋蛋白疫苗组小鼠分泌IFN-y的T细胞高于蛋白疫苗组（Z=-2．36、-3．58、-3．58，P均〈0．05），在21d达到最高水平；免疫后5周，CpG＋蛋白疫苗组IgG抗体滴度维持在1：1×105左右，其中在10、14、21、42d与蛋白疫苗组比较差异显著（t=6．15、5．84、4．57、7．91，P均〈0．01）；抑瘤试验表明，蛋白疫苗组能延缓肿瘤生长，成瘤率为40％，添加CpG-ODN后，成瘤率降为0（x^2=5．00，P〈0．05）。结论将CpG-ODN与HPV16L2E6E7融合蛋白疫苗联合应用，可以诱导C57BL／6雌性小鼠产生更强的特异性体液和细胞免疫应答，对荷瘤鼠有更好的抗肿瘤效果，有望提高疫苗的免疫治疗效果。
- 吴小红吴洁陈刚金素凤高孟陈科达姜云水李剑波罗永能庄昉成
- 关键词：CPGODN肿瘤免疫治疗
- 人乳头瘤病毒治疗性多肽及蛋白疫苗的研究进展
- 2011年
- 开发靶向E6和E7蛋白的HPV治疗性疫苗，用其治疗HPV感染及其所引起的癌变有着十分重要的意义。多种治疗性疫苗已进入临床前和临床研究。此文就HPV治疗性多肽及蛋白疫苗的研究进展作了综述。
- 吴小红陈科达姜云水庄昉成
- 关键词：宫颈癌人乳头瘤病毒多肽疫苗蛋白疫苗
