郑巍薇
- 作品数：9 被引量：5H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人THAP11基因RNAi慢病毒表达系统的建立
- 2012年
- 目的构建人THAP11基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,制备高滴度病毒颗粒,敲低K562细胞和脐带血CD34+细胞中THAP11表达。方法采用第三代慢病毒包装系统,将含有特异性干涉THAP11的DNA序列克隆入穿梭质粒pSicoR中,构建siTHAP11-pSicoR质粒。在脂质体介导下,siTHAP11-pSicoR与包装质粒pLP1,pLP2,pLP/VSVG共转染HEK293T细胞,获得高滴度慢病毒颗粒。感染K562细胞,检测内源THAP11敲低效果。感染人CD34+细胞,流式分选GFP阳性细胞,检测原代细胞中THAP11的敲低效果。结果成功构建针对THAP11两个位点的RNAi慢病毒载体siTHAP11-1和siTHAP11-2并获得慢病毒颗粒,病毒滴度检测可达1.8×108TU/ml。感染K562细胞后建立稳定株,THAP11的蛋白水平和mRNA水平均有下调。感染CD34+细胞效率达30%以上,siT-HAP11-1可下调THAP11mRNA约80%,siTHAP11-2约下调85%。结论成功构建THAP11的RNAi慢病毒载体,包装后的病毒颗粒可有效敲低细胞株及原代细胞中内源性THAP11的表达,为后续研究THAP11对CD34+细胞的影响奠定基础。
- 孔祥祯尹荣华郑巍薇詹轶群杨晓明李长燕
- 关键词：RNA干扰慢病毒细胞系人造血干细胞
- 敲低EDAG加强NPM1蛋白的降解并增加AML病人对药物的敏感性(英文)被引量：2
- 2013年
- Nucleophosmin(NPM1或B23.1)是在细胞核内广泛表达的蛋白磷酸酶,在多方面发挥重要作用,如核糖体合成、中心体复制、细胞周期控制、细胞增殖及转化.NPM1是急性粒细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)中最常见的突变基因之一.红系分化相关基因(erythroid differentiation associated gene,EDAG)是在造血组织特异表达的基因,在造血细胞的增殖与谱系分化调节方面发挥重要作用.在AML病人中,高表达的EDAG与较差的预后相关联.我们前期研究结果显示,EDAG与NPM1相结合并调节NPM1稳定性,但在AML病人体内EDAG与NPM1的关系,及EDAG与NPM突变体(NPMc+)的关系尚未明确.在本文中发现:在AML病人骨髓CD34+细胞中,敲低EDAG表达导致NPM1蛋白稳定性降低并提高了对柔红霉素的敏感性;EDAG虽不与突变体NPMc+相互作用,但在蛋白出核抑制剂(leptomycin B,LMB)作用下,过表达EDAG提高NPMc+蛋白稳定性;表达突变NPMc+的AML病人与表达NPM1蛋白的病人相比,其骨髓CD34+细胞对柔红霉素具有更高的敏感性,且敲低EDAG能微弱提高其敏感性.上述结果表明,EDAG在AML病人药物治疗中发挥的可能作用以及NPMc+"逃脱",使EDAG无法保护其稳定性,这提示了在AML病人药物治疗过程中EDAG的潜在作用,同时也提示,携带NPMc+蛋白的AML患者具有较好预后,可能与NPMc+蛋白"逃脱"出EDAG对其稳定性的保护有关.
- 郑巍薇杨扬张美江董小明唐刘军王晓辉詹轶群于淼葛常辉宁红梅李长燕杨晓明
- 关键词：柔红霉素AML
- 敲低EDAG抑制乳头状甲状腺癌细胞的增殖
- 2014年
- 为研究EDAG在人乳头状甲状腺癌病人组织中的表达及在乳头状甲状腺癌细胞中的作用,利用免疫组化检测31例乳头状甲状腺癌癌组织及癌旁组织中EDAG蛋白的表达,并进行数据分析.包装EDAG敲低慢病毒颗粒,感染乳头状甲状腺癌细胞系K1,建立EDAG敲低稳定细胞株,检测EDAG敲低对细胞增殖、克隆形成、周期和凋亡的影响.结果显示,EDAG蛋白在乳头状甲状腺癌癌组织中异常高表达,而在对应癌旁组织极低表达或不表达.建立稳定敲低EDAG的K1细胞株,敲低效果达到约96%,敲低EDAG后细胞增殖变缓,倍增时间由18.49±0.19 h变为19.47±0.11 h,且克隆形成能力下降,G0/G1期比例升高,无血清培养时凋亡增多.本文报道了EDAG在乳头状甲状腺癌病人中高表达,且敲低甲状腺癌细胞系K1中内源EDAG抑制细胞增殖,降低细胞克隆形成能力,G0/G1期增多,凋亡升高,提示EDAG异常高表达可能在甲状腺癌发生发展中具有重要作用.
- 毕俊杰董小明郑巍薇詹轶群葛志强杨晓明李长燕
- 关键词：乳头状甲状腺癌K1细胞增殖
- EDAG基因缺失诱导氧化应激增加小鼠放射敏感性并降低HSC存活能力
- 赵珂董小明潘婷婷郑巍薇尹荣华高瑞詹轶群杨晓明李长燕
- EDAG对人原代CD34~+细胞增殖分化特性影响的研究
- 红系分化相关基因（Erythroid Differentiation Associated Gene, EDAG）是利用代表性差异显示技术，自人胎肝中克隆分离出的新基因。EDAG特异表达于不同发育时期的造血组织，高表达于...
- 郑巍薇
- 关键词：造血干细胞红系分化增殖细胞周期
- 文献传递
- 人红系分化相关基因高表达提高TF-1细胞系存活能力被引量：1
- 2013年
- 目的:检测人红系分化相关基因(EDAG)对TF-1细胞株存活能力的影响。方法:采用电转染法将过表达EDAG的质粒高效转染TF-1细胞株,通过G418筛选得到过表达EDAG的TF-1细胞稳定株,用MTS法检测过表达EDAG的细胞稳定株在撤除细胞因子后的增殖情况,用流式细胞术检测细胞凋亡。结果:用表达GFP的质粒电转染TF-1细胞株,通过综合评价转染效率和细胞状态,确定最佳转染条件为1350 V电压电击30 ms,电击次数为1次;对得到的细胞稳定株进行检测,其内源EDAG的mRNA和蛋白水平均上调;将细胞稳定株在撤除细胞因子状态下培养,过表达EDAG后细胞存活能力增强、凋亡减少。结论:用电转染方式高效转染TF-1细胞,通过筛选得到过表达EDAG的稳定细胞株,并证实撤除细胞因子后过表达EDAG能提高TF-1细胞系的存活及抗凋亡能力。
- 郑巍薇张美江尹荣华董小明詹轶群杨晓明李长燕
- 关键词：存活凋亡
- 利用ChIP-seq技术研究转录因子EDAG在全基因组的结合谱被引量：3
- 2013年
- 为揭示红系分化相关基因(erythroid differentiation-associated gene,EDAG)在造血中的作用机制,利用ChIP-seq分析EDAG的全基因组结合谱.首先从产妇脐带血分离CD34+细胞,EPO诱导CD34+细胞培养5 d.利用EDAG抗体进行染色体免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验、Western印迹法检测EDAG抗体的富集情况.将富集到的DNA样品进行高通量测序,最后利用生物信息学分析测序结果.成功富集染色体DNA,经高通量测序和生物信息学分析,共得到1 292个EDAG结合位点的Peaks数目,代表了975个结合的基因且错误发现率(false discovery rate,FDR)小于0.0001.EDAG Peaks主要分布在基因间区和内含子区.进一步利用Q-PCR对ChIP-Seq数据进行了验证,证实EDAG可结合在检测的靶基因调控区上.将EDAG结合的基因进行基因功能(gene ontology,GO)注释,表明EDAG参与了细胞周期、细胞生长、细胞分化、细胞凋亡及信号通路等多种生物学过程.综上,利用ChIP-seq技术在促红细胞生成素(EPO)诱导分化的CD34+细胞中鉴定了1 292个EDAG结合的peaks对应975个基因,并对该结果进行了随机验证,提示EDAG广泛参与了多种生物学过程.该研究为揭示EDAG的功能及作用机制提供了线索.
- 董小明郑巍薇尹荣华詹轶群杨晓明李长燕
- 关键词：CD34+细胞生物信息学分析
- 细胞角蛋白8GFP/Puro双标干涉慢病毒系统的构建及对细胞凋亡的影响
- 2013年
- 目的构建细胞角蛋白8(CK8)的双标慢病毒干涉载体,获得高滴度慢病毒颗粒,感染HCT116细胞建立稳定株,检测CK8敲低对细胞凋亡的影响。方法将CK8的siRNA序列插入慢病毒表达载体GV248,并与包装质粒PMD、SPA共转染293T细胞,36、48 h分两次收集慢病毒上清,应用流式细胞术检测病毒滴度。获得的病毒感染HCT116细胞,用嘌呤霉素筛选阳性细胞,Western blotting检测干涉效果。采用Annexin V/PI染色检测干涉CK8对化疗药物顺铂诱导的细胞凋亡的影响。结果与结论成功构建CK8干涉慢病毒载体并得到干涉稳定株,在HCT116细胞中干涉CK8使细胞对顺铂引起的凋亡更加敏感。
- 金延超尹荣华郑巍薇孔祥祯詹轶群杨晓明李长燕
- 关键词：GFPRNAI凋亡顺铂
- 在人-小鼠异种移植模型中提高人红细胞产生效率条件的优化
- 2013年
- 本研究旨在探讨在建立人-小鼠异种移植模型中提高人红细胞产生效率的条件。本研究从三个方面分别进行条件优化:①受体免疫缺陷小鼠品系选择,分别对NOD/SCID和NOD/SCID/IL2rγnull两种小鼠品系进行移植,考察移植后不同品系小鼠嵌合率和人红细胞发育情况;②考察照射剂量和照射方法对小鼠生存率的影响;③优化人造血干细胞培养条件及感染方法,检测重建率及红细胞产生率。结果表明,移植后4周检测小鼠骨髓细胞显示,NOD/SCID/IL2rγnull小鼠人CD45比例可达(51.4±13.9)%,并能检测到人红细胞(5.98±3.46)%;利用X射线分2次对小鼠进行总剂量2.5 Gy的照射,照射后小鼠生存率可以达到100%;利用新鲜脐带血分离的CD34+细胞,不经过冻融和分选过程,在分离后72 h内完成转染和移植过程,移植后嵌合率可达(51.4±13.9)%,并且人红细胞产生的效率为(5.98±3.46)%。结论:利用X射线分两次照射NOD/SCID/IL2rγnull小鼠后通过尾静脉注射2×105个细胞,新鲜分离的人脐带血CD34+细胞在移植前缩短体外培养时间(≤72 h),有利于提高免疫缺陷小鼠体内人红细胞产生效率。
- 郑巍薇徐菲菲尹荣华詹轶群杨晓明李长燕
- 关键词：异种移植造血干细胞
