李长燕
- 作品数：54 被引量：155H指数：6
- 供职机构：安徽医科大学研究生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- THAP11转基因线虫载体的构建及转基因线虫的制备
- 2009年
- 目的构建带有线虫组织特异启动子的含不同ployQ的THAP11转基因线虫载体,并制备转基因线虫,为进一步研究THAP11基因的功能提供基础。方法设计引物,以THAP11-pcDNA3.1his/mycB真核表达载体为模板,PCR法扩增含不同ployQ的THAP11基因,将其克隆至带有线虫组织特异性启动子的pFx-unc119(Gene Marker dsRed)载体。酶切及测序鉴定正确后,用显微注射的方法制备THAP11转基因线虫,用荧光显微镜观察载体荧光表达并提取转基因线虫基因组DNA、RNA,PCR、RT-PCR方法检测其整合及表达情况。结果PCR扩增出含不同ployQ的THAP11-HIS片段,长度约1000bp,测序正确并构建pFx-unc119(THAP11)载体,THAP11转基因线虫的载体在线虫体内稳定表达红色荧光,转基因线虫基因组内有相应的THAP11插入及转录。结论成功构建的THAP11转基因线虫的载体能稳定转染线虫,将有助于THAP11功能的进一步研究。
- 杨帆李长燕任长虹赵娜杨晓明汪思应
- 关键词：动物基因修饰漂亮
- 一种新型丝氨酸苏氨酸激酶CPK的初步克隆及功能被引量：2
- 2005年
- 从人胎肝cDNA文库中分离到一种cDNA ,推测的蛋白氨基酸序列具有明显的丝氨酸苏氨酸激酶结构域,可能编码一种新的丝氨酸苏氨酸激酶(命名为CPK ,cellproliferationassociationkinase) .CPKmRNA全长约3 0kb .RT PCR检测表明CPKmRNA在增殖活跃组织或细胞如人胚胎组织、肿瘤细胞株中呈高丰度表达,在成人组织则呈低丰度或不表达.利用PCR技术扩增大鼠同源cDNA ,以此为探针,Northern杂交发现CPK表达于多种成年小鼠组织,以脑组织丰度最高.小鼠2 3肝部分切除可迅速诱导CPKmRNA的表达,在术后2 4～4 8h达高峰,与2 3肝部分切除后细胞增殖期吻合.以小鼠同源cDNA片段为模板,合成RNA探针,原位杂交显示在胚胎发育期CPK低丰度表达在大多数组织,以神经系统组织变化最大,在第8d胚胎神经管内皮细胞中即出现表达,11～13d在端脑、脑膜、间脑、脊神经节表皮细胞、海马、小脑神经胶质细胞等多种神经细胞中表达且丰度较高,16d后这些组织的表达迅速下降到较低水平,表明CPK可能与神经系统的生长发育有一定关联.利用信号通路检测技术,观察到CPK的表达对MAPK ,p38MAPK途径的激活有明显的影响,并可显著增强表皮生长因子对这两条途径的激活,提示该激酶可能参与细胞因子的信号转导.
- 汪思应陈兵许望翔詹轶群崔玉芳李长燕杨晓明
- EDAG基因缺失诱导氧化应激增加小鼠放射敏感性并降低HSC存活能力
- 赵珂董小明潘婷婷郑巍薇尹荣华高瑞詹轶群杨晓明李长燕
- 戊乙奎醚对肝移植术患者新肝期炎性反应的影响被引量：4
- 2008年
- 目的探讨戊乙奎醚对肝移植术患者新肝期炎性反应的影响。方法择期肝移植术患者60例，ASAⅡ或Ⅲ级，年龄20～64岁，体重46—83kg，随机分为3组（n=20）：对照组（C组）、戊乙奎醚0．1mg／kg组（Ⅰ组）和戊乙奎醚0．2mg／kg组（Ⅱ组）。均采用静吸复合全麻，于无肝期30min开始，Ⅰ组和Ⅱ组分别静脉输注戊乙奎醚0．1、0．2mg／kg，C组静脉输注等容量生理盐水。分别于无肝期30min（T0）、再灌注1、2、3、24h（T1-4）时取上腔静脉血3ml，放免法测定血清TNF-α及IL-1浓度，于T3时取新肝组织，测定肝细胞NF-κB蛋白表达及其活性；光镜下观察新肝病理学结果。结果与C组比较，Ⅰ组，T1、Ⅱ组T1～3时血清，TNF-α浓度降低，Ⅰ组和Ⅱ组，T1，3时血清IL-1浓度降低，肝细胞NF-κB蛋白表达下调、活性降低（P〈0．05）；与Ⅰ组比较，Ⅱ组T1,2时血清TNF-α浓度降低，肝细胞NF-κB蛋白表达下调（P〈0．05）；Ⅰ组和Ⅱ组肝缺血再灌注损伤较C组减轻。结论戊乙奎醚可通过抑制肝细胞NF-κB蛋白表达及其活性，降低肝移植术患者新肝期的炎性反应，从而减轻肝缺血再灌注损伤。
- 董兰李树人韩曙君臧运金雷志礼马宁杨国山李长燕
- 关键词：胆碱能拮抗剂肝移植再灌注损伤
- JNK3重组腺病毒促进表柔比星诱导的人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡被引量：1
- 2008年
- 目的:构建人JNK3基因重组腺病毒,检测其对人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的影响;以表柔比星作为凋亡诱导剂,检测其对细胞凋亡的影响。方法:以pDBLeu-JNK3质粒为模板PCR扩增人JNK3基因全长,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-JNK3,线性化后与骨架载体pAdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组,在HEK293细胞中进行病毒包装和扩增,经PCR方法鉴定后,用包装后的病毒上清感染人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞,Western印迹方法检测JNK3蛋白的表达;MTT实验检测其对细胞增殖的影响;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳检测表柔比星诱导的细胞凋亡情况。结果:核酸测序和PCR鉴定表明成功构建Ad-JNK3,终点稀释试验测定扩增的腺病毒滴度为6.5×1010pfu/ml;Ad-JNK3在SH-SY5Y细胞中表达JNK3蛋白;MTT检测结果表明Ad-JNK3可抑制SH-SY5Y细胞生长,抑制率为28.08%;流式细胞术结果表明Ad-JNK3可明显促进表柔比星诱导的细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳可观察到DNA梯形条带。结论:重组腺病毒Ad-JNK3能显著抑制SH-SY5Y细胞增殖,促进表柔比星诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,为研究JNK3的作用机制及将其用于人成神经细胞瘤的基因治疗提供了条件。
- 韩卿宋方洲易发平卜友泉王治东李长燕杨晓明
- 关键词：JNK丝裂原活化蛋白激酶类重组腺病毒表柔比星细胞凋亡
- 死亡相关蛋白11对染色质形态的影响被引量：2
- 2008年
- 目的研究死亡相关蛋白11(THAP11)对染色质形态的影响。方法将THAP11与pRC-lac载体上lac的阻遏物融合表达于AO3-1细胞中,然后利用染色质形态检测技术检测THAP11对染色质形态的影响。结果与对照组比较,THAP11能使染色质更加浓缩。结论THAP11可能具有转录抑制功能和作为白血病的抑癌因子,为进一步研究THAP11功能提供了线索。
- 李扬朱晨雁翟倩丁丽华叶棋浓李长燕詹轶群杨晓明汪思应
- 关键词：基因染色质
- TRAF6截短体的构建及其对NF-κB信号通路的影响被引量：3
- 2011年
- 目的构建肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)截短体,鉴定TRAF6截短体及对核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响区域。方法采用PCR技术扩增TRAF6 4个截短体(N1、N2、N3、C1)编码基因,分别将其构建在pFlag-CMV2重组载体,用荧光素酶报告基因方法对TRAF6 4个截短体功能活性进行验证。结果成功将TRAF6截短体编码基因构建至pFlag-CMV2载体,截短体命名为N1、N2、N3、C1,通过荧光素酶报告基因实验证明TRAF6N3对NF-κB信号通路有增强效应。结论 TRAF6通过截短体N3区域对NF-κB信号通路产生增强效应。
- 王敏王晓辉唐刘君李长燕董晓明周扬帆杨晓扬杨晓明汪思应
- 关键词：NF-ΚBTRAF6荧光素酶报告基因
- 造血干细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立被引量：1
- 2011年
- EDAG是在胚胎发育阶段造血干细胞特异性表达的基因.为了在早期造血组织细胞中实现相关基因的条件敲除,构建了含有早期造血组织特异性表达的EDAG启动子和Cre重组酶基因的转基因EDAG-Cre表达载体质粒.通过显微注射的方法将线性化的5.6kb的EDAG-Cre转基因片段导入小鼠受精卵细胞核,获得的新生小鼠经过PCR鉴定,常规方法培育传代.结果发现,共获得了6只阳性转基因首建鼠,其中4只已经建系并稳定传代.RT-PCR分析表明Cre重组酶基因在阳性转基因小鼠的骨髓、脾脏、胸腺、外周血以及胎肝等组织中均有表达,重组酶活性也在脾和骨髓中获得确认.EDAG-Cre重组酶转基因小鼠的建立,为研究早期造血组织以及造血干细胞特异性基因条件敲除小鼠模型的建立奠定了基础.
- 苗丽丽王磊许望翔李长燕杨晓明葛常辉
- 关键词：CRE-LOXP转基因小鼠组织特异性表达
- 人造血细胞相关基因－1
- 通过比较四月龄人胎肝组织及成年人肝组织基因表达差异,成功分离一种新基因,命名为造血细胞分化相关基因－1(Hemagene－1)。该基因mRNA全长2166bp核苷酸,包括110bp5’－非翻译序列,602bp3’－非翻译...
- 杨晓明闾军许望翔江岩李长燕
- 文献传递
- EDAG-1在人髓系白血病细胞株中的表达被引量：6
- 2004年
- 目的 研究EDAG 1在人髓系白血病细胞株中的表达情况。方法 选取 4种人髓系白血病细胞株分别通过NorthernBlot、PCR、WesternBlot、SouthernBlot了解EDAG 1基因在mRNA、蛋白以及其基因组结构表达情况 ;通过凝胶阻滞实验分析选用白血病细胞系NF κBDNA结合活性。结果 发现向红系分化的K 5 6 2、HEL在mRNA、蛋白水平均高表达EDAG 1基因 ,但未发现突变、扩增和重排。HL 6 0细胞缺失EDAG 1基因。 4种白血病细胞株NF κBDNA结合活性是增强的 ,以高表达EDAG 1基因的细胞株明显。结论 红系白血病细胞株高表达EDAG 1基因 ,该基因的激活可能与编码区结构无关。
- 周颖许望翔郑红李菲菲詹轶群李长燕徐诚望杨晓明汪思应
- 关键词：白血病基因表达EDAG-1
