王金志
- 作品数：44 被引量：72H指数：5
- 供职机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家大学生创新性实验计划项目浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- rhIL-18在不同原核表达系统中的表达和活性比较被引量：2
- 2006年
- 目的研究rhIL-18包涵体、可溶性(His融合型)两种形式蛋白的生物学活性。方法从已构建的pBV220-IL-18重组质粒中双酶切获取IL-18基因,回收后重组至pLHis质粒构建重组载体。42℃热诱导pBV220-IL-18表达,产生rhIL-18包涵体,IPTG诱导pLHis-IL-18表达,产生可溶性rhIL-18蛋白。两者分别刺激人外周血单个核细胞,ELISA法检测上清中IFN-γ的含量。结果两种重组表达载体均表达产生了rhIL-18,且均可刺激人PMBC上清产生IFN-γ,可溶性rhIL-18刺激人外周血产生IFN-γ的能力高于包涵体形式的rhIL-18。结论可溶性rhIL-18具有比包涵体形式的rhIL-18更强的活性,这为IL-18原核表达基因工程药物的开发提供了新思路。
- 张海峰李丽娥盛伟华缪竞诚谢宇锋王金志杨吉成
- 关键词：IL-18包涵体可溶性蛋白IFN-Γ
- 褪黑素对大鼠下丘脑视交叉上核神经元放电的影响
- 2002年
- 目的 观察内源性和外源性褪黑素对大鼠下丘脑视交叉上核神经元自发放电的影响。方法 在昼夜周期的不同时相 (主观白天的CT4～ 8和主观黑夜的CT16～ 2 0 ) ,采用松果腺摘除 (PINX)和氨甲蝶呤 (MTX)抑制褪黑素 (MEL)合成的方法 ,分别去除内源性MEL的主要来源后 ,观察大鼠SCN神经元自发放电的变化以及侧脑室注射外源性MEL的作用。结果 (1)不管是主观白天还是主观黑夜 ,SCN神经元存在规则放电、不规则放电和簇状放电 3种形式的自发放电 ,摘除松果腺和抑制MEL合成 ,对这 3种放电形式未见明显影响 ;(2 )SCN神经元的自发放电频率在主观白天高 ,在主观黑夜低。摘除松果腺和抑制MEL合成后 ,放电频率昼高夜低的节律性消失 ,放电频率有所提高 ;(3)SCN神经元对外源性MEL起抑制反应 ,高亲和力 (ML - 1)受体拮抗剂luzindole能阻断这种抑制效应 ,而低亲和力 (ML - 2 )受体拮抗剂哌唑嗪 (prazosin)则不能 ,提示MEL的抑制作用是由ML - 1受体介导的。结论 松果腺作为大鼠昼夜节律组构中的一个调整器 ,分泌MEL并由ML - 1受体介导 ,对SCN神经元自发放电有抑制性的调节作用。
- 王金志俞光第蒋星红印其章
- 关键词：视交叉上核褪黑素昼夜节律LUZINDOLE神经元放电下丘脑
- 人脑源性神经营养因子成熟肽基因克隆及表达
- 目的:构建表达人脑源性神经营养因子的基因工程菌。方法:人工合成一对含EcoRI 和BamHI 限制性酶切位点的特异引物,以健康成人末梢白细胞基因组DNA 作为模板。应用PCR 技术扩增hBDNF 成熟肽基因,用A-T 克...
- 张虎杨吉成盛伟华缪竞诚李丽娥王金志白艳艳谢宇锋
- 关键词：脑源性神经营养因子
- 文献传递
- 重组腺病毒Ad-ING4和Ad-PTEN抑制肝癌细胞增殖
- 2011年
- 目的用构建好的重组腺病毒Ad-ING4和Ad-PTEN感染人肝癌SMMC-7721细胞,检验其对细胞的作用。方法用构建好的重组腺病毒Ad-ING4和Ad-PTEN感染QBI-293A细胞,对病毒进行扩增并测定其效价,荧光显微镜下观察感染效果。用扩增得到的Ad-ING4和Ad-PTEN感染SMMC-7721细胞,流式细胞术及MTT检测作用效果。结果空腺病毒组的凋亡率为3.4%±1.3%,Ad-ING4组和Ad-PTEN组分别为49.7%±4.8%和11.4%±3.2%,均显著高于空腺病毒组（P〈0.01）;Ad-ING4组和Ad-PTEN组的细胞增殖在48~96 h时较正常组明显下降（P〈0.05）。结论 Ad-ING4和Ad-PTEN对SMMC-7721细胞均有显著抑制作用,尤其是Ad-ING4。
- 姚雷曹婧媛吴鹏飞黄玉洪王金志杨吉成缪竞诚
- 关键词：肝癌AD-ING4基因
- 腺病毒介导hIL-24抑制裸鼠肝癌荷瘤生长及其机制研究被引量：8
- 2006年
- 为了研究腺病毒hIL-24抑制SMMC-7721肝癌细胞裸鼠荷瘤的生长抑制及其作用机制,构建了重组腺病毒载体pAdeasy-1-pTrack-CMV-hIL-24(Ad-hIL-24),经PacI线性化后转染QBI-293A细胞,多轮感染后收获高效价腺病毒重组病毒子。用SMMC-7721肝癌细胞使16只裸鼠致瘤,然后随机NS分成干预组、5-Fu组、Ad组和Ad-hIL-24组,进行抗肿瘤试验。四组均使用瘤体内注射干预用药,100μL/只NS组、Ad组(107pfu)和Ad-hIL-24组(107pfu)隔日一次,共注射5次;5-Fu组20μg/kg,连续注射5d。用药前、用药后1周和2周分别测皮下瘤体的长径(L)、短径(W),计算出瘤体体积,治疗开始后第15天,将裸鼠脱颈处死,摘取瘤体称重,计算出抑瘤率。显微镜观察细胞生长形态、免疫组化法测caspase3蛋白表达、P53及P27核内抑癌基因表达、CD34染色标记测定的MVD及VEGF蛋白表达。与NS组比较,Ad-hIL-24组与5-Fu组的抑瘤率分别为68.52%(P<0.01)和65.64%(P<0.01);镜下Ad-hIL-24组肿瘤组织的caspase3蛋白表达细胞数较其它3组呈显著性升高(P<0.01),P27核内抑癌基因表达细胞数也较NS组明显增高(P<0.01),CD34染色标记测定的CD34及VEGF较NS组和Ad组明显减少(P<0.001),P53未见明显变化。结论Ad-hIL-24可以显著抑制裸鼠SMMC-7721荷瘤的生长,其机制可能通过激活caspase途径、上调P27抑癌基因表达、抑制血管形成等多途径发挥抑瘤作用。
- 汪小华叶震敏盛伟华谢宇锋王金志杨吉成
- 关键词：SMMC抑瘤
- 褪黑素对大鼠下丘脑视交叉上核神经元自发放电的影响
- 该文采用在体细胞外记录大鼠下丘脑视交叉上核(SCN)神经元单位放电的方法,在昼夜周期的不同时相(主观白天的CT10-14和主观黑夜的CD22-02),采用松果腺摘除(PINX)和采用氨甲蝶呤(MTX)抑制褪黑素(MEL)...
- 王金志
- 关键词：视交叉上核褪黑素昼夜节律LUZINDOLE
- 文献传递
- (m→h)ING4腺病毒载体构建和对A549肺癌细胞体内外生长的抑制效应
- 研究携带人源化改造的(m→h)ING-4(肿瘤生长抑制因子4)基因的腺病毒表达载体对A549肺癌细胞体内外生长的抑制效应,为进一步开展肿瘤临床基因治疗奠定基础.以pcDNA3.0-mING-4重组质粒为模板,通过定点突变...
- 张海峰章春花盛伟华王金志谢宇锋缪竞诚杨吉成
- 关键词：腺病毒载体肺癌细胞生长抑制
- 文献传递
- 姜黄素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡被引量：10
- 2010年
- 目的探讨姜黄素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测人胃癌SGC-7901细胞生长活力;Hoechst33258核染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率;比色法检测Caspase-3、8、9活性。结果姜黄素(5.0、10.0、20.0、40.0、80.0μmol/L)明显抑制SGC-7901细胞生长并呈剂量依赖关系,48h的IC50值为(23.65±3.15)μmol/L,细胞核经Hoechst33258染色出现浓染致密的固缩形态和颗粒状荧光。与对照组相比,姜黄素处理后凋亡细胞比例增加;姜黄素处理SGC-7901细胞48h后Caspase-3、8、9的活性明显增强。结论姜黄素可通过激活Caspase级联活化而抑制人胃癌SGC-7901细胞生长并诱导其凋亡。
- 李玉芳仲宁沈文香王金志
- 关键词：姜黄素胃癌细胞凋亡CASPASE
- ING4的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2006年
- 目的在原核系统中表达并纯化ING4蛋白,制备多克隆抗体。方法构建表达载体pET-21a(+)-ING4,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳检测。结果构建的表达载体pET-21a(+)-hGDNF经酶切、PCR鉴定均出现750 bp左右的条带,测序结果正确,用IPTG诱导转化菌有30KD大小的目的条带,表达的目的蛋白占菌体总蛋白10%以上,以包涵体形式存在,纯化后其纯度可达70%以上。用纯化的ING4蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结论制备的多克隆抗体为下阶段的研究提供了重要的实验材料。
- 王金志缪竞诚盛伟华谢宇锋杨吉成
- 关键词：原核表达抗体ING4
- 人脑源性神经营养因子成熟肽基因克隆及表达
- 目的:构建表达人脑源性神经营养因子的基因工程菌.方法:人工合成一对含EcoRI和BamHI限制性酶切位点的特异引物,以健康成人末梢白细胞基因组DNA作为模板.应用PCR技术扩增hBDNF成熟肽基因,用A-T克隆法与pUC...
- 张虎杨吉成盛伟华缪竞诚李丽娥王金志白艳艳谢宇锋
- 关键词：脑源性神经营养因子基因表达基因克隆生物学活性
- 文献传递
