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病理类型特异的卵巢癌组织适配子的鉴定: 2013年; 目的鉴定经组织切片消减SELEX筛选获得的4条候选适配子对不同类型卵巢癌组织的识别特性。方法公司合成、荧光素修饰候选适配子,利用免疫荧光实验对筛选获得的适配子候选序列进行鉴定。结果免疫荧光实验证明,适配子OC-10-19和OC-10-36能够特异识别卵巢浆液性乳头状囊腺癌,且OC-10-36还能够对早期的不典型增生进行识别,另2条适配子OC-10-10和OC-10-37仅识别个别的卵巢浆液性囊腺癌。结论成功筛选获得识别不同类型卵巢癌组织的特异适配子,为适配子用于不同病理类型标志物的鉴定、临床辅助诊断等提供了理论基础。; 王玮丁红梅李慧李洁夏伟邵宁生李少华; 关键词：卵巢肿瘤适配子病理类型

一种利用miR-145为标志物的肝癌患者血清检测试剂盒及方法: 本发明公开了属于分子生物医学技术领域的一种利用miR-145为标志物的肝癌患者血清检测试剂盒及方法。本发明设计miR-145特异性的引物，采用定量PCR的方法检测正常人血清、肝癌患者血清中miR-145的含量变化，含量显...; 邵宁生李少华李慧王玮丁红梅李洁黄皑雪苏雪婷赵强; 文献传递

体内转录的多聚腺苷酸加速外源基因mRNA的出核转运: 2012年; 目的:探索体内转录的短多聚腺苷酸[poly(A)]对外源基因mRNA的表达及出核转运的影响。方法:构建依赖于H1启动子体内转录的poly(A)载体,用脂质体转染方法将其与外源绿色荧光蛋白(GFP)基因表达质粒导入MCF-7细胞,采用qPCR和Western印迹分别检测GFP在mRNA和蛋白水平的表达情况,并通过体外实验检测体内转录的poly(A)对GFP mRNA的加尾影响;采用qPCR法考察16种内源基因的mRNA水平;将其与p53表达质粒共转染MCF-7细胞后,采用MTT法检测细胞增殖情况。结果:在MCF-7细胞中,依赖于H1启动子转录的poly(A)能够加速外源GFP mRNA的poly(A)加尾,促进其从细胞核向细胞质输出,从而提高12 h内GFP的表达量,对内源基因mRNA水平没有影响;它还能加速外源p53基因的表达。结论:建立了通过体内转录poly(A)从而加速外源基因表达的策略,可能对基因治疗或快速研究某个特异基因的功能具有重要的应用价值。; 陈颖刘舒云夏伟李少华丁红梅王玮李慧苏雪婷黄皑雪李洁邵宁生; 关键词：外源基因

以临床标本为靶的消减SELEX技术及其应用: 目的:利用临床标本,建立针对复合物中未知靶标的消减SELEX 技术,并探讨特异适配子在临床标本检测、生物标志物分子鉴定等方面的应用.方法:以同源相近的两组标本为靶标(肿瘤组织、癌旁组织;金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌;肝癌...; 李少华丁红梅李慧王玮赵强李洁夏伟邵宁生

一种利用miR-146a为标志物的肝癌患者血清检测试剂盒及方法: 本发明公开了属于分子生物医学技术领域的一种利用miR-146a为标志物的肝癌患者血清检测试剂盒及方法。本发明设计miR-146a特异性的引物，采用定量PCR的方法检测正常人血清、肝癌患者血清中miR-146a的含量变化，...; 邵宁生李慧李少华李洁王玮丁红梅黄皑雪苏雪婷赵强; 文献传递

一种特异识别Vasorin(VASN)蛋白的寡核苷酸配基V4-2的序列和应用: 本发明公开了属于分子生物医学技术领域的一种特异识别Vasorin(VASN)蛋白的寡核苷酸配基V4-2的序列和应用。本发明设计V4-2特异性的序列，采用5’端或3’端修饰、标记(如FITC、生物素或者地高辛)的方法检测V...; 邵宁生李少华李慧王玮丁红梅李洁黄皑雪赵强

人vasorin蛋白的基因克隆、表达及纯化被引量：3: 2014年; 目的:克隆、表达人vasorin(VASN)蛋白。方法:利用PCR方法从HepG2细胞的cDNA中扩增获得目的基因,并插入带有6×His标签的原核高效可溶性表达载体pET28a中,构建重组表达质粒pET28a-VASN,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后目的基因获得表达,对融合目的蛋白进行Ni2+金属螯合柱纯化。结果:内切酶鉴定及基因序列测定证实重组表达质粒构建成功;对目的蛋白进行了原核表达,SDS-PAGE显示相对分子质量为61×103的特异表达条带;Western印迹证实目的蛋白为VASN,且主要以包涵体形式存在;对经尿素变性的表达产物进行了亲和层析纯化,有利于以后的变性、复性过程。结论:获得了人VASN融合蛋白,为其进一步的生物学功能研究奠定了基础。; 丁红梅赵强王玮李慧刘农乐李洁苏雪婷黄皑雪房涛李少华邵宁生; 关键词：原核表达纯化

一种肝癌药物治疗的靶标及其应用: 本发明公开了属于医学肿瘤学技术领域的一种肝癌药物治疗的靶标Vasorin蛋白及其应用。本发明通过液相差异SELEX的方法，以伴肝外转移的AFP阴性HCC患者血清为靶标，以正常人血清为消减靶标，获得特异识别肝癌患者血清的富...; 邵宁生李少华李慧王玮丁红梅李洁夏伟刘农乐赵强王芳

人肿瘤坏死因子α抑制肽-抗炎酸性尾巴融合蛋白的原核表达及纯化被引量：1: 2011年; 目的:表达和纯化人肿瘤坏死因子α抑制肽-抗炎酸性尾巴融合蛋白。方法:利用PCR搭接方法及基因合成方法获得目的基因,插入带有6×His标签的原核高效可溶性表达载体pET32a中,构建重组表达质粒pET32a-T9-ac-9,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导目的基因表达;对融合蛋白进行Ni2+金属螯合柱纯化。结果:构建的重组表达质粒经PCR、内切酶鉴定及基因序列测定证实;目的蛋白在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE显示相对分子质量为22.917×103;对表达产物进行了亲和层析纯化,从上清中获得了纯度较高的人肿瘤坏死因子α抑制肽-抗炎酸性尾巴融合蛋白。结论:获得了可溶性的人肿瘤坏死因子α抑制肽-抗炎酸性尾巴融合蛋白,为其生物学功能研究奠定了基础。; 丁红梅赵强王玮刘农乐郭彦梅李慧李洁夏伟苏雪婷陈颖邵宁生高波李少华; 关键词：人肿瘤坏死因子Α 基因克隆

重组人肿瘤坏死因子α抑制肽-抗炎酸性尾巴融合蛋白的生物学活性检测: 2012年; 目的:评价原核表达、纯化的6×His-硫氧还蛋白(TRX)-人肿瘤坏死因子α(TNFα)抑制肽-C端抗炎酸性尾巴融合蛋白的生物学功能。方法:在大肠杆菌中分别表达带His标签的TRX对照蛋白及TRX蛋白融合的人TNFα抑制肽-抗炎酸性尾巴融合蛋白,并对2种蛋白进行N2+金属螯合层析纯化,采用MTT法检测纯化后的蛋白及化学合成多肽抑制TNFα标准品对L929细胞的细胞毒活性。结果:与对照蛋白相比,融合蛋白人TNFα抑制肽-C端抗炎酸性尾巴及合成多肽均能拮抗TNFα标准品对L929细胞的细胞毒作用。结论:融合蛋白人TNFα抑制肽-C端抗炎酸性尾巴及合成肽均能有效拮抗TNFα的生物学作用,为今后发展抑制TNFα为主的抗炎生物药物奠定了基础。; 王玮丁红梅李慧赵强李洁夏伟苏雪婷陈颖黄皑雪高波李少华邵宁生; 关键词：人肿瘤坏死因子Α 融合蛋白细胞毒作用

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王玮