徐晓园
- 作品数：14 被引量：31H指数：2
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省中医药管理局基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 维甲酸对树突状细胞增殖及细胞骨架微丝的调节作用被引量：1
- 2010年
- 目的观察药理剂量的全反式维甲酸对人单核细胞来源的树突状细胞增殖及细胞骨架微丝的调节作用。方法 rhGM-CSF1000U/mL、IL-4500U/mL诱导人外周血单核细胞向树突状细胞分化,在细胞分化过程中加入0.1μmol/L全反式维甲酸,相差显微镜下观察细胞的形态变化及集落形成,活细胞计数和MTT检测细胞的增殖。成熟树突状细胞经全反式维甲酸处理24h后,用FITC标记的鬼笔环肽检测细胞骨架微丝的形态和分布。结果细胞因子诱导的外周血单核细胞来源的树突状细胞具有典型的树枝状结构。在树突状细胞的分化过程中,全反式维甲酸作用组的树突状细胞的产量明显低于对照组(P<0.05)。已经分化成熟的树突状细胞经维甲酸处理后细胞骨架微丝出现重排和分布不均。结论药理剂量的全反式维甲酸抑制树突状细胞的增殖和分化,并可能通过细胞骨架调节树突状细胞的功能。
- 苏中静陈海滨刘戈飞徐晓园马天仲陈先才黄东阳
- 关键词：树突状细胞维甲酸细胞骨架
- 阴道毛滴虫Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因的cDNA克隆和序列分析(英文)
- 2006年
- Rab鸟苷三磷酸酶是细胞膜转运机制的关键调节分子,与原虫的分泌功能密切相关。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因,以便进一步探讨其功能。作者从阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离出2个Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因的cDNA克隆,其中1个cDNA序列长658对碱基,读码框含597对碱基,推测蛋白质序列具198个氨基酸。序列分析表明该氨基酸序列与Rab6a蛋白亚家族的同源性最高。另一cDNA序列长764对碱基,读码框含657对碱基,推测蛋白质序列具218个氨基酸。序列比对分析显示该氨基酸序列与Rab6b蛋白有较高的同源性。2个氨基酸序列都拥有Rab鸟苷三磷酸酶家族的所有保守结构域、特异性RabF结构域和典型的异戊烯化结构域。进化树分析提示毛滴虫的这2个基因系Rab6家族的同源基因,在进化上更接近原虫和单细胞的酵母Rab6亚家族。序列分析还显示这2个基因都无内含子,其基因组DNA序列与其cDNA序列完全一致。
- 闫广勤傅玉才许铭炎许锦阶徐晓园
- 关键词：阴道毛滴虫基因克隆
- 阴道毛滴虫Rab1基因的克隆表达及蛋白质的细胞内定位
- 研究目的:(1)克隆和分析原生动物阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis)两个 Rab1鸟苷三磷酸酶(Guanosine Triphosphate,GTP)同源基因:TvRab1a和TvRab1-like;...
- 徐晓园
- 关键词：阴道毛滴虫基因克隆蛋白质细胞内定位
- 文献传递
- 自体子宫移植建立子宫内膜异位症大鼠模型被引量：16
- 2006年
- 目的构建子宫内膜异位症(内异症)大鼠动物模型。方法取性成熟雌性SD大鼠26只,手术将大鼠自体子宫组织移植到子宫旁韧带上,建立诱发型内异症大鼠动物模型。术后8周,再次剖腹观察异位组织的存活情况、病灶大小、与周围组织的粘连程度以及病理学变化。结果21只大鼠有明显的异位病灶。所有病灶都与周围组织有不同程度的粘连,病灶外观呈囊泡状。光镜观察见大部分异位子宫内膜形态和结构与在位子宫内膜基本相同,但内膜细胞、间质细胞、腺体,与在位内膜相比较少。少数病灶只有上皮组织或只有间质组织。结论自体子宫移植法可成功建立内异症大鼠模型。
- 曾如辉罗丽莉许铭炎徐晓园史咏梅隋旭霞傅玉才
- 关键词：子宫内膜异位症疾病模型动物
- 阴道毛滴虫两个Sir2同源基因的克隆和功能(英文)
- 2007年
- 目的探讨寄生性原虫阴道毛滴虫细胞生长和衰老的相关基因。方法从阴道毛滴虫的cDNA表达文库中分离出两个与酵母沉寂信息调节因子(Sir2)有较高同源性的cDNA克隆,分别命名为TvSir2和TvSir2-like,它们的编码框分别长915bp和1116bp。结果序列分析显示这两个cDNA克隆与酵母Sir2同源性很高,其氨基酸序列中含有Sir2p及其同源蛋白三个特征性保守结构域。分别从这两株cDNA克隆中扩增出表达片段植入表达载体pET-41a,转化宿主菌E.coli BL21并用IPTG(isopropylthio-β-D-galactoside)诱导表达到大量融合蛋白。用亲和层析法纯化的融合蛋白分别免疫豚鼠,获得的抗血清用Western-blot法识别到滴虫虫体全蛋白中大小为34000Mr和42000 Mr的条带。免疫荧光法检测TvSir2和TvSir2-like蛋白位于细胞核外的内质网和高尔基复合体区域。结论TvSir2和TvSir2-like克隆是酵酶Sir2的同源基因,为TvSir2和TvSir2-like在模式生物阴道毛滴虫的功能研究奠定了基础。
- 史咏梅傅玉才许铭言徐晓园许锦阶邓致刚
- 关键词：阴道毛滴虫基因克隆免疫定位
- 一个含有25 bp内含子的阴道毛滴虫Rab1-like新基因(英文)
- 2008年
- 目的克隆和鉴定一个新的阴道毛滴虫 Rab1-like 基因( TvRab1-like) 及其内含子。方法我们从一阴道毛滴虫 cDNA 表达文库中分离出一个 cDNA 克隆, 它与各物种的 Rab 家族蛋白有较高的同源性, 因此我们进一步用 BLASTP、RPS-BLAST、ClustalW 和 MEGA3 等分析软件对该 cDNA 克隆进行了序列分析和进化树分析; 用 PCR 和 RT-PCR 等技术分别对该基因组和 mRNA 进行了扩增和测序分析。结果序列分析结果表明该cDNA 克隆长 705 bp, 开放阅读框具 603 bp, 推测肽链含有 200 个氨基酸。序列比较分析结果提示该 cDNA 克隆所推测的蛋白质是一个 Rab1 亚家族的亚型。进化树分析也表明它属于阴道毛滴虫 Rab1 亚家族。基因组 PCR扩增和测序分析表明该基因包含一个 25 bp 的内含子, 该内含子具有阴道毛滴虫和其它真核生物较大内含子所具备的典型的 5′GT-AG-3′和分支位点基序。RT-PCR 产物及其测序分析表明在该基因的转录本中存在着未剪切和剪切后的 mRNA, 说明确实有内含子的存在。结论 TvRab1-like 基因属于阴道毛滴虫 Rab1 亚家族, 该基因含有一个 25 bp 的内含子。该内含子是至今发现的最小的阴道毛滴虫基因内含子之一, 很可能也是真核生物中最小的内含子。对诸类最低等真核生物内含子的研究将有助于我们理解真核生物内含子的起源和进化。
- 罗丽莉徐晓园许铭炎傅玉才
- 关键词：阴道毛滴虫
- 阴道毛滴虫衰老生物学标志分子β-半乳糖苷酶基因克隆和蛋白表达被引量：1
- 2007年
- 目的:克隆并分析阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis,Tv)衰老生物学标志分子β-半乳糖苷酶(β-gal)同源基因,表达β-GAL重组蛋白。方法:从Tv cDNA表达文库中分离获得Tv β-gal同源基因的cDNA克隆,测序和序列分析。将cDNA部分片段亚克隆到原核表达载体(pQE-80L),转化宿主菌E.coli SG13009,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鉴定。结果:在Tv cDNA文库中获得1株2445 bp的cDNA克隆。序列分析表明,该序列开放读码框有2415 bp,推测肽链具有804个氨基酸,等电点为5.4;该肽链与多种来源的β-GAL同源蛋白均具有较高同源性。用PCR扩增了该cDNA序列中的2277 bp片段,构建了pQE-80L/Tv β-gal,所表达重组蛋白产物的相对分子质量为82 ku。结论:推测该克隆是Tv β-gal的同源基因,Tv β-gal基因可以在E.coli中得到表达,为进一步研究其细胞内定位和蛋白功能奠定了基础。
- 史咏梅傅玉才许铭炎许锦阶徐晓园刘居理
- 关键词：阴道毛滴虫Β-半乳糖苷酶CDNA克隆
- 阴道毛滴虫过氧化物氧化还原酶系统的RNA干扰
- 2005年
- 目的用干扰RNA的方法特异性降解阴道毛滴虫细胞过氧化物酶(Prx)和硫氧还蛋白还原酶(TrxR)的mR-NA,并观察其对虫体生长情况的影响。方法取患者阴道毛滴虫培养,用酚、氯仿法提取其基因组DNA,反转录合成双链RNA(dsRNA)后用RNaseⅢ消化过柱,合成小分子(21～23 bp)干扰RNA(siRNA);由脂质载体介导分A、B、C等3组转染,分别降解毛滴虫细胞Prx、TrxR及Prx+TrxR,转染前的细胞作为对照组(D组);收集转染前、转染后24 h和48 h的毛滴虫细胞,用半定量反转录-PCR(RT-PCR)检测Prx和TrxR的mRNA水平;转染36 h后显微镜下计数并观察细胞活力。结果转染后阴道毛滴虫Prx和TrxR的mRNA水平显著下降,组间细胞的活力差异无统计学意义(P>0.05),但组间细胞数差异具有统计学意义(P<0.01),4组的细胞均数:A、B、C、和D组分别为7.2×107/L、14.2×107/L、3.8×107/L和20.3×107/L。结论用干扰RNA的方法可以抑制Prx和TrxR的mRNA水平,对阴道毛滴虫的细胞周期有明显延长作用,而对细胞活力无明显影响。
- 章家新傅玉才徐晓园吴统健曹凤玲
- 关键词：阴道毛滴虫RNA干扰过氧化物酶硫氧还蛋白还原酶
- 阴道毛滴虫Rab1a重组蛋白的表达和细胞内定位被引量：1
- 2006年
- 目的制备阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis,Tv)Rab1a重组蛋白及其多克隆抗体,并对TvRab1a蛋白进行阴道毛滴虫的细胞内定位。方法将我们已构建的pQE80L/TvRab1a重组表达质粒转入大肠埃希菌E.coliM15,在IPTG诱导下表达重组蛋白,经Ni-NTA亲和柱层析后获得纯度较高的TvRab1a的重组蛋白;用经复性处理的重组蛋白免疫动物,获得TvRab1a重组蛋白抗血清,免疫印迹WesternBlot鉴定抗血清。采用荧光免疫细胞化学对TvRab1a蛋白进行细胞内定位。结果WesternBlot分析显示,TvRab1a重组蛋白可与豚鼠的抗TvRab1a血清反应,同时该抗血清在滴虫提取蛋白中检测到与预测TvRab1a分子量一致的条带;免疫荧光化学检测发现TvRab1a分布于细胞核周围的高尔基复合体与内质网。结论获得的抗TvRab1a蛋白的多抗血清可用于TvRab1a基因功能的研究;TvRab1a功能场所位于高尔基复合体与内质网。
- 徐晓园傅玉才许铭炎许锦阶张仁利
- 关键词：阴道毛滴虫重组蛋白表达细胞内定位
- 阴道毛滴虫沉寂信息调节因子Sir2同源基因克隆和蛋白表达被引量：1
- 2006年
- 目的克隆并分析阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis)沉寂信息调节因子Sir2基因,构建原核表达重组载体,表达重组蛋白,并制备抗体进行相关功能的研究。方法从阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离获得阴道毛滴虫Sir2同源基因的cDNA克隆、测序,并采用相关在线程序及软件进行序列分析。将cDNA部分片段亚克隆到原核表达载体pET-41a,转化宿主菌E.coliBL21,IPTG(isopropylthio-β-D-galactoside)诱导表达,亲和层析法纯化表达产物并对表达产物进行SDS-PAGE鉴定之后,用纯化重组蛋白免疫豚鼠获得抗血清,对重组蛋白和滴虫总蛋白进行蛋白质印迹鉴定。结果在阴道毛滴虫cDNA文库中获得一株1034bp的cDNA克隆,序列分析表明,该序列开放阅读框有912bp,推测肽链具有304个氨基酸,等电点(PI)5.5。该肽链与酵母SIR2p蛋白及其同源物一致性高达30%～47%,并具有SIR2p及其同源蛋白的三个高度保守的特征性结构域。进化树结果显示,TvSIR2p接近线虫的SIR2蛋白,与同时克隆到的基因组TvSir2比较序列一致,证明该TvSir2基因组DNA不含内含子。PCR扩增出890bp片段,植入表达载体pET-41a;经酶切鉴定后取阳性克隆用IPTG诱导表达,产生融合蛋白产物经SDS-PAGE鉴定相对分子质量为62000,与预期分子质量相符。用该融合蛋白免疫豚鼠得到的抗体,经Westernblotting检测其与相应融合蛋白发生特异性反应,同时在33000处也能识别滴虫虫体全蛋白。结论推测该克隆是阴道毛滴虫Sir2的同源基因,该基因没有内含子,它可能参与阴道毛滴虫的组蛋白去乙酰化作用及调节衰老和寿命。阴道毛滴虫Sir2基因可以在大肠杆菌中得到表达,并获得了相应的抗血清,为进一步研究其功能奠定了基础。
- 史咏梅傅玉才徐晓园许铭炎刘红
- 关键词：阴道毛滴虫重组蛋白抗血清
