廖乾生
- 作品数：43 被引量：93H指数：4
- 供职机构：浙江理工大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 利用烟草脆裂病毒同时表达两种外源蛋白的载体构建法
- 本发明公开了一种同时非融合表达两个外源蛋白载体pTRV2e<Sup>3</Sup>的构建方法：以TRV基因组RNA2的农杆菌侵染性克隆pYL156为材料，采用病毒基因缺失策略构建包含TRV的2b和2c基因启动子载体pTR...
- 廖乾生郭歌常发光赖家良杜志游
- 文献传递
- 黄瓜花叶病毒辣椒分离物侵染性克隆构建被引量：4
- 2008年
- 【目的】鉴定引起辣椒产生褪绿黄化症状的病原物,构建侵染性克隆。【方法】大田辣椒样品通过ELISA检测,结合病毒外壳蛋白SDS-PAGE及病毒RNA分析,初步确定辣椒中病原物为黄瓜花叶病毒(CMV)Phy株系。以辣椒病毒粒子RNA为模板,采用含T7启动子的不同正向引物通过RT-PCR扩增CMV-Phy全长基因组RNA1、RNA2和RNA3。PCR产物经过双酶切后连接到pUC118载体,并分别比较5种(DH5α、HB101、JM109、LE392和NM522)感受态细胞的转化效率。体外转录CMV-Phy的基因组cDNA克隆(pUC-P1、pUC-P2和pUC-P3)成RNA分子(P1P2P3),分析其转录效率和侵染活性。P1P2P3与CMV的卫星RNA进行假重组,进一步确定CMV-Phy侵染性克隆的成功构建。【结果】引起辣椒产生褪绿黄化症状病原物为CMV,携带卫星RNA;心叶烟接种辣椒病毒粒子后同样产生褪绿黄化症状。HB101感受态细胞最适合CMV-Phy基因组转化。CMV-Phy基因组及其卫星RNA的大小如下:RNA1为3356nt、RNA2为3048nt和RNA3为2220nt,卫星RNAPz-satRNA为384nt(序列登陆号分别为:DQ402477,DQ412731,DQ412732EF363688)。CMV-Phy的cDNA克隆体外转录在5′端添加G有利于提高转录效率,但影响其侵染活性;P1P2P3在苋色藜和心叶烟产生的症状与其病毒粒子产生的症状相一致。除了Pz-satRNA,P1P2P3还能作为T1-satRNA、Rs-satRNA和Tsh-satRNA辅助病毒;T1-satRNA可加重CMV-Phy在心叶烟症状反应,而其它3个卫星RNA则对此起减弱作用。【结论】以病毒粒子RNA为模板,采用touch-upPCR扩增参数在1个反应管中同时获得CMV-Phy基因组RNA1、RNA2和RNA3;CMV-PhyRNA1、RNA2和RNA3的5′端添加1个G最有利于侵染性克隆构建。
- 廖乾生杜志游张华荣吴鹏朱丽萍陈集双
- 关键词：黄瓜花叶病毒侵染性克隆
- 黄瓜花叶病毒2b基因及其与卫星RNA互作研究
- 黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)是典型的三分体+ssRNA 病毒,也是迄今为止报道寄主最多、分布最广的模式植物病毒。CMV 的2b 基因是该编码基因沉默抑制子,CMV 卫星 RNA(sa...
- 陈集双严师节廖乾生
- 关键词：黄瓜花叶病毒侵染性克隆
- 文献传递
- 抗稻瘟病菌附着胞形成研究
- 稻瘟病菌可引起水稻上的重要病害-稻瘟病,其进入寄主叶表是通过形成一种特异性的侵染结构-附着胞来完成的.随着稻瘟病菌一系列致病基因的克隆及功能明确,附着胞形成的信号传导途径包括：cAMP途径和MAP途径,这些途径中基因的失...
- 廖乾生
- 关键词：稻瘟病菌拮抗作用附着胞形成
- 文献传递
- 同时表达两个外源蛋白载体TRVe<Sup>2</Sup>的构建方法与应用
- 本发明公开了一种同时表达两个外源蛋白载体TRVe<Sup>2</Sup>的构建方法，以TRV的基因组RNA2的农杆菌侵染性克隆pYL156为材料，构建含有TRV的2b基因启动子和豌豆早枯病毒外壳蛋白基因启动子序列的载体，...
- 廖乾生常发光杜志游刘小红林福呈
- 文献传递
- 以黄瓜花叶病毒为载体表达绿色荧光蛋白被引量：2
- 2016年
- 为了构建基于黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的外源蛋白表达载体,实验在获得CMV的LS株系(CMV-LS)农杆菌侵染性克隆(pCB301-R1,R2和R3)的基础上,将CMV-LS基因组RNA3的外壳蛋白(coat protein,CP)基因置换成绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因,研究以CMV-LS为载体在本氏烟中表达GFP基因的情形。农杆菌浸润接种结果表明,以R1R2R3-gfp为载体在寄主中的GFP表达量远高于植物瞬时表达载体pCB301产生的GFP,番茄丛矮病毒基因沉默抑制子p19加入有助于CMV表达GFP,将移动蛋白(movement protein,MP)缺失C端的33个氨基酸残基而构建表达载体R1R2R3mpΔ33-gfp在寄主中的GFP含量大大增加。农杆菌菌液稀释接种的结果表明R1R2R3mpΔ33-gfp接种OD600值为0.01均能有效在本氏烟中表达产生GFP。
- 卢冉常发光杜志游廖乾生
- 关键词：黄瓜花叶病毒绿色荧光蛋白
- 黄瓜花叶病毒2b基因及其与卫星RNA互作研究
- 黄瓜花叶病毒/(Cucumber mosaic virus，CMV/)作为典型的+ssRNA病毒，是寄主最多、分布最广、对农作物危害最为严重的植物病毒之一；由于基因组分布在3条RNA分子，基因组结构简单，CMV是研究RN...
- 廖乾生
- 关键词：黄瓜花叶病毒侵染性克隆卫星RNA烟草
- 文献传递
- 同时表达两个外源蛋白载体TRVe<Sup>2</Sup>的构建方法与应用
- 本发明公开了一种同时表达两个外源蛋白载体TRVe<Sup>2</Sup>的构建方法，以TRV的基因组RNA2的农杆菌侵染性克隆pYL156为材料，构建含有TRV的2b基因启动子和豌豆早枯病毒外壳蛋白基因启动子序列的载体，...
- 廖乾生常发光杜志游刘小红林福呈
- 黄瓜花叶病毒2b基因及其与卫星
- 廖乾生
- 关键词：黄瓜花叶病毒侵染性克隆卫星RNA烟草
- 番茄保守性microRNA及其对病毒侵染的反应
- microRNA（miRNA）是一类在真核生物中广泛存在、对基因表达具有调控作用的内源性的一类小分子 RNA。Sanger miRbase 9．0数据库收录了从拟南芥（Arabidopsis thaliana）、大豆 （...
- 陈集双张建光郎秋蕾廖乾生曾蓉陈绍宁
- 关键词：番茄黄瓜花叶病毒MIRNA
- 文献传递
